SDS no reductor PAGE: Un método para analizar complejos de proteínas multiméricas ligados a disulfuro

Las proteínas multiméricas se estabilizan mediante enlaces disulfuro intermoleculares covalentes entre sus residuos de cisteína, lo que es crucial para mantener su integridad estructural y funcional.

Para analizar dichos complejos mediante PAGE no reductor, tome la concentración deseada de proteínas estabilizadas con disulfuro. Agregue un tampón de muestra no reductor y caliente la muestra.

Este tampón contiene SDS, que imparte una carga negativa general a las proteínas, y un colorante de seguimiento para visualizar su movimiento en el gel. El tampón carece de cualquier agente reductor, lo que permite que los enlaces disulfuro permanezcan intactos, lo que facilita que el complejo multimérico permanezca intacto.

Cargue los complejos individuales en pocillos del gel de poliacrilamida del porcentaje deseado, preensamblado en un aparato de gel. Agregue una escalera de proteínas de tamaño conocido en otro pozo. Sumerja los pocillos en un búfer de funcionamiento basado en SDS y conecte el aparato a una fuente de alimentación.

La corriente eléctrica obliga a los complejos de proteínas cargados negativamente a moverse a través de los poros del gel hacia el ánodo, el terminal positivo. Dado