Electroforesis bidimensional en gel de poliacrilamida: una técnica de separación para el análisis de proteínas en mezclas complejas de proteínas basada en la carga y el peso molecular

Para la electroforesis en gel bidimensional de una mezcla de proteínas derivada de tejido tumoral homogeneizado, trátelo con tampón que contenga caótropos, detergente zwitteriónico y agente reductor. Los caótropos y el detergente desnaturalizan y solubilizan las proteínas. Los agentes reductores reducen los enlaces disulfuro de las proteínas, generando grupos tiol libres y desplegando las proteínas para una resolución óptima de las proteínas.

Transfiera la mezcla de proteínas tratada a un gradiente de pH inmovilizado, IPG, soporte de tiras. Coloque una tira de IPG que comprenda un gradiente de pH lineal dentro de la matriz de gel de acrilamida. Agregue aceite mineral para evitar la evaporación de la solución proteica. Transfiera el soporte a un sistema IEF de enfoque isoeléctrico. Deje que la solución de proteína rehidrate la tira.

Realizar IEF de primera dimensión. La corriente eléctrica hace que las proteínas cargadas migren a través del gradiente de pH hacia electrodos con carga opuesta, inmovilizándose en sus respectivos puntos isoeléctricos, pH en el que las proteínas tienen carga neta cero.

Después de la IEF, trate la tira de IPG con dodecil sulfato de sodio, SDS, un detergen