Electroforesis en gel de zimografía: una técnica electroforética para detectar metaloproteinasas de matriz mediante la evaluación de la actividad enzimática

La metaloproteinasa de matriz, o MMP, una proteasa multidominio que comprende propéptidos y dominios catalíticos, es secretada como una enzima inactiva o zimógeno por células específicas. La interacción entre el ion de zinc del dominio catalítico y el residuo de cisteína del dominio propeptídico mantiene la MMP inactiva.

Para detectar MMP en sobrenadante de cultivo celular mediante electroforesis en gel de zimografía, llene el tanque de electroforesis que contiene el casete de gel con dodecil sulfato de sodio o tampón de funcionamiento que contenga SDS.

Cargue el sobrenadante de cultivo mezclado con tampón de carga, seguido de patrones de proteínas, en pocillos de gel de poliacrilamida, copolimerizado con un sustrato proteico específico de MMP.

SDS, un detergente con carga negativa, en condiciones no reductoras, interrumpe las interacciones cisteína-zinc en MMP y desnaturaliza las proteínas al tiempo que imparte una carga negativa.

Realizar electroforesis. El campo eléctrico hace que las proteínas cargadas negativamente migren hacia el ánodo cargado positivamente, lo que provoca la separación de proteínas basada en el tamaño.

Después de la electroforesis, trate el gel con un tampón