Espectroscopía de fluctuación de fluorescencia para estudiar la homooligomerización de proteínas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:48 min. • July 8th, 2025
La espectroscopia de fluctuación de fluorescencia puede determinar el estado de oligomerización de las proteínas en una muestra.
Para comenzar, tome un portaobjetos con cámara que contenga una solución de monómero de proteína marcada con fluorescencia. Coloque el portaobjetos bajo un microscopio confocal. Enfoque el rayo láser en una pequeña parte de la muestra, el volumen confocal, para excitar los monómeros de proteínas.
Las moléculas de proteína se difunden dentro y fuera del volumen confocal debido al movimiento browniano. Este movimiento provoca cambios rápidos en la intensidad de la fluorescencia, lo que lleva a fluctuaciones en la intensidad de la fluorescencia a lo largo del tiempo.
Agregue el agente dimerizante, un ligando bivalente que ayuda a que dos monómeros de proteínas se unan y, por lo tanto, formen un dímero. Debido a la dimerización, dos etiquetas fluorescentes se unen para formar una sola partícula, lo que aumenta la intensidad de fluorescencia por partícula: el brillo molecular.
El aumento del brillo molecular debido a la dimerización aumenta la amplitud de las fluctuaciones de fluorescencia, ya que dos etiquetas fluorescentes entran y salen juntas del volumen c
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