Ensayo de unión in vitro basado en SELEX para identificar interacciones ARN-proteína
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 6:30 min. • July 8th, 2025
La evolución sistemática de ligandos por enriquecimiento exponencial, SELEX, permite la identificación de secuencias de ARN de unión a proteínas.
Primero, obtenga un grupo de ARN aleatorio que contenga ARN radiomarcados con secuencias aleatorias que se pliegan en estructuras altamente específicas. Incubar con la proteína objetivo. La proteína se une a moléculas de ARN con secuencias específicas y estructuras tridimensionales, mientras que los ARN no específicos permanecen libres.
Pasar la mezcla por un filtro de nitrocelulosa. El ARN no unido pasa a través de los poros del filtro, mientras que los complejos ARN-proteína permanecen retenidos.
Corta el filtro que contiene el complejo de proteínas de ARN en fragmentos. Repita la interacción ARN-proteína incubando el grupo de ARN con una concentración reducida de proteína diana, lo que permite solo la unión de secuencias de alta afinidad, mientras que las secuencias de baja afinidad no se unen.
Cargue esta mezcla en un gel de poliacrilamida y realice la electroforesis. Los complejos ARN-proteína migran lentamente a través del gel en comparación con los ARN no unidos de baja afinidad. Las imágenes de gel de rayos X muestran un cambio de
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos