Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:47 min. • July 8th, 2025
Las fosforilaciones múltiples en una proteína implican agregar grupos fosfato a la proteína en varias posiciones, específicamente en los residuos de serina y treonina.
Para identificar múltiples fosforilaciones en una proteína, comience con un tubo que contenga proteínas fosforiladas marcadas con nitrógeno-15, lo que ayuda a diferenciar los hidrógenos amida de otros hidrógenos en la proteína.
Agregue un compuesto de referencia de RMN interno para una medición precisa de las frecuencias de resonancia relativas. Transfiera la mezcla a un tubo de resonancia magnética nuclear o RMN. Inserte el tubo en una abertura giratoria y colóquelo en un espectrómetro de RMN.
La presencia de fosfatos exhibe efectos de extracción de electrones en los residuos de serina y treonina fosforilados. Como resultado, los hidrógenos amida de los residuos fosforilados parecen estar desprotegidos con densidades de electrones menores en comparación con los otros hidrógenos amida.
Los hidrógenos amida con diferentes entornos electrónicos experimentan campos magnéticos diferenciales alrededor de los núcleos, alcanzando estados de baja energía.
Aplique un breve pulso de radiofrecuencia para excitar los núcleos de
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