La técnica de espectroscopía de dicroísmo circular para estudiar las interacciones ADN-proteína
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:38 min. • July 8th, 2025
Las proteínas de remodelación de la cromatina dependientes de ATP regulan la expresión génica en la cromatina compacta alterando la conformación del ADN de una manera dependiente de ATP.
Para estudiar las interacciones entre el remodelador de la cromatina y el ADN mediante espectroscopia de dicroísmo circular o CD, tome una solución de oligonucleótidos de ADN bicatenario. Caliente para desnaturalizar los oligonucleótidos y colóquelos en hielo.
El enfriamiento rápido hace que el ADN se renaturalice mientras forma estructuras secundarias. La región de transición de doble a simple hebra proporciona un sitio de unión óptimo para los remodeladores de cromatina.
Agregue el ADN enfriado por calor en una cubeta. Agregue un tampón que contenga remodelador de cromatina dependiente de ATP, ATP e iones de magnesio.
El remodelador se une al ADN, seguido de la unión del ATP con complejos de iones de magnesio a la proteína, activándola. El remodelador activado hidroliza el ATP, induciendo una conformación de bucle de tallo en el ADN.
Pase luz polarizada circularmente izquierda y derecha, con una diferencia de fase de 90°, a través de la muestra. El ADN ópticamente quiral absorbe la luz polarizada
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