Los huevos de ventanas de pollo para Estudios del Desarrollo
October 1st, 2007
La facilidad de acceso del embrión ha permitido experimentos para trazar los destinos de células usando varios métodos, incluyendo pollo codorniz quimeras y tinte de etiquetado focal. En este artículo se demuestra un método de preparación de huevo que se ha optimizado el tiempo de supervivencia de largo.
Bienvenidos al Laboratorio Kramer. Soy Matt Korn, del departamento de Neurobiología y Comportamiento de la Universidad de California en Irvine. Hoy te mostraré cómo preparar huevos de gallina para una variedad de manipulaciones, incluida la colocación de cuentas, la inyección de tintes o la exploración in ovo.
Así que sin más preámbulos, comencemos. Bien, vamos a seguir adelante y limpiar el huevo. La razón es que hay muchas cosas que se podrían poner en la incubadora.
Vamos a sellar esto con cinta adhesiva. No queremos que ningún pedacito pequeño se mueva por donde la ventana va a recibir el óvulo y aumente la posibilidad de que el embrión muera para cuando queramos sacarlo. Entonces, si vio desde la incubadora, los huevos están sentados con el lado grande hacia arriba.
Así que lo que vamos a hacer es seguir adelante y tomar el huevo y simplemente girarlo hacia un lado. Y eso va a hacer dos cosas. Uno, nuestra ventana va a estar justo aquí, y segundo, el embrión necesita flotar hasta la parte superior para que podamos hacer cualquier tipo de manipulación.
Así que voy a exponer algunos aquí, desde el estante que estaba en la incubadora hasta un soporte de huevos de cartón. Esta es en realidad la pieza que viene en la caja cuando se entregan los huevos. Así que por hoy, vamos a seguir adelante y usarlo solo para sostener los huevos.
Ahora el arreglo es, depende de ti. Me gusta hacerlo de esta manera porque puedo acceder a todos los huevos en cualquier momento y ninguno de ellos se toca entre sí. En caso de que encontrara uno que estuviera suelto que tuviera una grieta y se me cayera, todos tienen un poco de espacio entre sí.
Así que voy a seguir adelante y tomar mi gasa aquí y sacar una buena pila como esta y dividirla en dos. Voy a tomar un 70% de alcohol aquí y voy a llenarlo hasta que pueda sentir que el fondo se humedece. Y eso es porque voy a usar toda esta pila para hisopar todos los huevos.
Así que luego tomaré un par de la parte superior, seguiré adelante y realmente haré la parte superior, pero en efecto casi rodearé todo el huevo aquí. Y una vez hecho esto, el alcohol se seca bastante rápido y luego podemos seguir adelante y ponerle cinta adhesiva. La cinta se pegará bien y para cuando termine un juego, por lo general el primero está seco y podemos continuar con el siguiente paso en la preparación de nuestro huevo.
Así que, de nuevo, vuelve a tirarlo a la basura y estaremos listos para pasar al siguiente paso. Bien, ahora que todos nuestros huevos han sido frotados con el alcohol, podemos seguir adelante y hacer un agujero de drenaje en el lado grande del huevo, la base del huevo. Y esto nos permitirá entrar y extraer algo de albúmina, porque si no extraemos la albúmina, el embrión no se asienta correctamente.
No podemos hacer ninguna manipulación. Así que esto solo implica que tome una cuchilla y tome esta cinta de plástico. Es un poco elástico, lo cual es genial.
No solo nos permite expandirnos sobre un agujero si es un poco más grande de lo que nos gustaría, sino que cuando realmente cubramos todo el huevo, vamos a necesitar estirarlo. Por lo tanto, el área donde va a estar la ventana está completamente cubierta. Así que voy a seguir adelante y cortar la pieza así y luego hacer una tira de aproximadamente un milímetro.
Y luego, a partir de esto, puedo hacer un trozo de cinta adhesiva cuadrada de aproximadamente un milímetro. Y luego, a partir de esto, voy a seguir adelante y colocarlo justo encima a la izquierda de la fecha. Simplemente colóquelo allí y podrá verlo.
Se está pegando muy bien. Luego puedo volver a la tira que ya hice, cortar otro trozo de cinta adhesiva de un milímetro. Y de nuevo, simplemente colócalo a la izquierda del número allí, que en realidad es la parte superior del huevo.
Ahora que lo hemos girado hacia los lados, está a la derecha. Y una pieza más aquí. Ahora no estoy usando guantes porque usar guantes hará que esta cinta se pegue a los guantes y me he lavado las manos.
Realmente no me preocupa que nada más contamine el activo en este momento. Así que voy a seguir adelante y tomar un par de tijeras con la punta afilada. Voy a ir en el centro de donde coloqué la cinta y voy a girarla en sentido contrario a las agujas del reloj hasta que la llene un poco.
Y verás que hay un pequeño agujero allí. Ahora, el agujero no necesita ser muy grande porque una vez que coloquemos esta jeringa allí, hará que el agujero sea lo suficientemente grande. Pero esto es para que no vayamos directamente con una aguja y tratemos de romper el huevo con ella porque a menudo eso hará que todo el lado del huevo se rompa.
Entonces ya no podemos usar el huevo. Bien, ahora voy a seguir adelante y escurrir el huevo. Tenemos ese pequeño agujero en el costado y voy a usar esta jeringa de 10 mililitros y una aguja de calibre bastante grande para seguir adelante y extraer la albúmina.
Ahora quiero unos tres o cuatro mililitros, definitivamente más de tres, no mucho más de cuatro y medio o cinco. Esto permitirá que nuestro embrión que ahora está sentado en la parte superior se aleje un poco de la cáscara. Y entonces podremos hacer nuestras manipulaciones.
Entonces, al entrar en un ángulo de 45 grados, estoy debajo de la yema. Y luego solo quiero girarlo un poco a mi derecha para colarme allí y puedes sentir la punta de la aguja tocando el fondo del huevo. Y voy a seguir adelante y extraer unos tres o cuatro y sale bastante bien.
Voy a seguir adelante y poner esa albúmina en mi cubo de cintura aquí y ahora puedo continuar con los otros huevos. Bien, voy a seguir adelante y continuar. Y verás aquí que el agujero que he hecho para el drenaje es un poco más grande de lo que me gustaría, pero que eso resulta estar bien.
Loque quiero preocuparme es que, a medida que voy metiendo la aguja, ya no la rompa. Así que voy a seguir adelante y hacer eso. Bien, ya puedo ver que el huevo tiene un poco de grieta.
Ahora bien, las pequeñas grietas están bien, pero debes preocuparte cuando se extiendan a otro plano del huevo. Y en este caso lo hace. Eso se puede ver desde el hoyo.
Se extiende prácticamente hasta la parte superior. Y de hecho, aquí es donde se va a sentar nuestra ventana. Así que desafortunadamente para este huevo, vamos a tener que ir a descartar este.
Y no hay nada especial en descartarlo. No es necesario escribir un protocolo en particular ni nada. Solo voy a seguir adelante y ponerlo en el cubo de basura.
Usamos estos botes de basura negros para designarlos como desechos animales, pero aparte de eso, ya se han solucionado. Podemos pasar al siguiente huevo. Bien, ahora que hemos drenado todos nuestros huevos, podemos seguir adelante y cubrir el orificio de drenaje.
Ahora bien, esto es importante porque si no introducimos el interior de la incubadora, podemos obtener una evaporación tremenda de lo que queda de la albúmina. Y entonces un huevo que está seco es un huevo que está muerto. Así que vamos a seguir adelante y tomar aproximadamente el mismo tamaño de cinta adhesiva y colocarla sobre el agujero y no tendremos que preocuparnos por volver a entrar en este agujero.
En algunos casos, si decides que te gustaría intentar drenar más albúmina de un huevo, una vez que esté abierto, este agujero actúa como un área sellada en la que luego puedes clavar una aguja y no perderás una gran cantidad de albúmina. Está bien, ¿es así? Bien, ahora vamos a seguir adelante y cubrir los huevos con un trozo de cinta adhesiva de buen tamaño.
Y comparo esto con poner un pedazo de cinta adhesiva sobre un globo antes de ponerle un pequeño alfiler. Lo bueno es que el globo no revienta y en este caso un poco de cinta adhesiva sobre el huevo. El huevo no se agrieta en varios lugares y luego la ventana se puede sellar y luego, cuando la ventana se cierra, porque la hemos usado con cinta adhesiva, crea un pequeño sello agradable y no tenemos que preocuparnos por la evaporación.
Así que puedes ver que el tamaño de la cinta es, probablemente sea la más grande que he cortado hasta ahora, pero incluso entonces voy a seguir adelante y estirarla un poco y realmente tirar de ella, un poco de tensión allí y colocarla sobre el huevo. Y voy a dar la vuelta por la parte de atrás aquí y estirarla con mucho cuidado sobre el huevo para que no haya pliegues justo encima de donde va a estar mi ventana. Y puedes reiniciar la cinta un poco.
Es que no se pega tanto de lo que tengas que preocuparte. Una vez que está atascado, está atascado. Y pueden ver esta área general aquí es donde voy a seguir adelante y cortar la ventana.
Bien, ahora que tenemos cinta adhesiva en todos los huevos, podemos seguir adelante y cortar una ventana en la parte superior. Esta puede ser la parte más difícil y, a menudo, aquí es donde perderás la mayoría de tus óvulos. Así que voy a seguir adelante y darle una buena toallita a mis tijeras con gasa que tenía alcohol y luego seguir adelante y simplemente secarla.
El alcohol se seca prácticamente por sí solo, pero no querrás que el alcohol vaya directamente al huevo. Así que voy a ir en el medio de donde está la cinta y, de nuevo, usar ese movimiento en el sentido de las agujas del reloj en sentido contrario a las agujas del reloj hasta que escuche que se agrieta un poco. Y entonces sé que mi espada está dentro.
Y luego quiero mover mis tijeras hacia afuera para que queden casi planas contra la superficie del huevo. Y luego hacer pequeños recortes hasta que pueda meter todo el trozo de tijera allí. Y voy a volver por el otro lado una vez que lo haya hecho como un medio círculo y no quiero completar el círculo porque quiero una ventana, pero luego puedo seguir adelante y abrir el huevo.
Y en este momento parece que hay más o menos la edad que esperaba que tuvieran, no tienen muchos vasos sanguíneos, pero hay un poco de sangre alrededor de donde se encuentra el embrión, principalmente de la región del león que la sangre ha comenzado y los latidos del corazón se han ido. Así que voy a cerrar eso, dejarlo reposar en la parte superior de esa manera y volver a dar la vuelta y seguiré adelante y cerraré las ventanas. Y de nuevo, simplemente, simplemente plano a la superficie y de vuelta al otro lado.
Y bueno, tenemos un par de burbujas aquí y resulta que el embrión está a un lado. Ahora hay dos cosas que podemos hacer ahora mismo. Si tenemos muchos huevos y no nos preocupa usar todos y cada uno de ellos, podemos seguir adelante y tirar este.
O lo que podemos hacer es cerrar la ventana y simplemente configurarla para que el embrión flote hasta la parte superior donde lo queremos de nuevo. Y para cuando lleguemos a él en nuestras manipulaciones, podría estar donde queremos. Si no, podemos descartarlo en ese momento.
Así que lo que he hecho aquí es simplemente colocarlo en un ángulo. Tendrás un poco de escorrentía de albúmina, pero ayudará a que el embrión vuelva a donde debe estar. Bien, ahora que tenemos todas estas ventanas, tenemos que asegurarnos de que estén cerradas y solo queremos que estén cerradas antes de hacer cualquier manipulación.
Y luego podemos seguir adelante y volver a sellar el huevo. Pero si tenemos una ventana abierta, a veces el yugo puede salirse. Si sabes que el huevo solo se inclina un poco cuando caminas de una habitación a otra, no querrás que se caiga todo.
Así que todo lo que estoy haciendo es cortar otro milímetro de largo, o lo siento, milímetro de ancho, probablemente unos tres, dos o tres milímetros de longitud de la cinta de plástico. Y me gusta ponerlo ahí justo en el medio. Y si puedo tirar de él hacia abajo frente al huevo, entonces lo apretará.
Y puedes ver dónde encaja la ventana, justo donde estaba la otra cinta, donde cortamos la ventana y la hace bastante sellada para este momento. Quiero decir, vamos a seguir adelante y hacer algunas manipulaciones en solo un minuto, por lo que no es necesario que sea completamente hermético. Así es como preparas y colocas tus huevos.
Así que buena suerte con tus experimentos.
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Visión general
Este artículo presenta un método para preparar huevos de pollo para varias manipulaciones en experimentos neurobiológicos. La técnica está optimizada para tiempos de supervivencia prolongados, facilitando estudios sobre el mapeo del destino celular.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurobiología
- Desarrollo embrionario
- Técnicas experimentales
Antecedentes
- Los embriones de pollo son accesibles para la manipulación experimental.
- El mapeo del destino celular es crucial para entender la biología del desarrollo.
- Existen varios métodos para manipular embriones, incluyendo el etiquetado con colorantes.
- Optimizar la preparación del huevo puede mejorar los resultados experimentales.
Propósito del estudio
- Demostrar un método de preparación de huevos para experimentos neurobiológicos.
- Mejorar el tiempo de supervivencia de los embriones durante las manipulaciones.
- Facilitar técnicas como la colocación de cuentas y la inyección de colorantes.
Métodos utilizados
- Limpiar el huevo para prevenir la contaminación.
- Preparar el huevo para la colocación de cuentas.
- Inyectar colorantes para propósitos de visualización.
- Realizar exploración in ovo para estudios de desarrollo.
Resultados principales
- El método de preparación del huevo mejora la viabilidad del embrión.
- Facilita varias manipulaciones con fines experimentales.
- Demuestra su efectividad en el mapeo del destino celular.
- Proporciona un protocolo confiable para los investigadores.
Conclusiones
- El método optimizado de preparación del huevo es beneficioso para la investigación neurobiológica.
- Los tiempos de supervivencia prolongados permiten una experimentación más extensa.
- Esta técnica puede aplicarse a varios diseños experimentales.
Preguntas frecuentes
Executive Industry Relevance
This method enables reliable access to chicken embryos for developmental studies, supporting target validation in neurobiology research. By optimizing survival times through a simple windowing technique, it reduces experimental variability and improves data consistency for mechanistic studies. The approach facilitates early-stage hypothesis testing in a disease-relevant system, enhancing predictive confidence in target engagement and pathway modulation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Supports interrogation of therapeutic hypotheses through direct embryo manipulation and observation.
- Operational Value: Enables functional target validation via bead placement, dye labeling, or genetic perturbation in a controlled environment.
- Predictive Value: Improves confidence in target mechanisms by allowing longitudinal observation of developmental phenotypes.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated biological systems for compound screening by ensuring embryo viability and accessibility.
- Operational Value: Standardizes embryo preparation, reducing variability across replicates and improving assay reproducibility.
- Scalability: Uses low-cost, widely available materials enabling high-throughput adaptation for screening campaigns.
Translational & Preclinical Research
- Translational Continuity: Provides a disease-relevant system for studying neurodevelopmental pathways conserved in vertebrates.
- Mechanistic De-risking: Allows testing of molecular perturbations (e.g., protein-coated beads, plasmid DNA) to assess target engagement and pathway effects.
- Preclinical Alignment: Supports progression from discovery to preclinical validation by enabling consistent phenotypic readouts.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the early discovery continuum, supporting hypothesis generation and mechanistic exploration before lead identification. It enables reproducible preparation of embryos for downstream applications in screening and validation workflows.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification through direct embryonic manipulation and live imaging.
- Screening: Delivers assay-ready embryos with standardized viability, enabling reliable compound or perturbation evaluation.
- Analytics: Enables quantitative dependent variable measurements (e.g., dye dispersion, bead localization, electroporation efficiency) for objective comparison across conditions.
- Translational Research: Connects early discovery to preclinical work by maintaining developmental continuity and supporting biomarker-aligned readouts.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for developmental neurobiology, reducing re-optimization costs across projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by reducing mechanistic ambiguity in developmental pathways.
- Operational Value: Enhances standardization and reproducibility across labs and experiments through a simple, robust protocol.
- Strategic Value: Supports better go/no-go decisions by improving data quality and reducing false negatives from embryo loss.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of targets based on consistent developmental phenotypes.
Implementation Considerations
- Requires basic embryology training and aseptic technique to prevent contamination.
- Needs standard lab tools: scissors, syringe, needle, gauze, alcohol, and adhesive tape.
- Demands consistent handling to maintain embryo orientation and viability across replicates.
- Requires adaptation for different developmental stages, as window size and positioning may vary.
- Limited by the natural incubation timeline of chicken embryos, restricting long-term culture beyond embryonic stages.
