Name: Los huevos de ventanas de pollo para Estudios del Desarrollo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Aprende a preparar huevos de pollo con ventana para experimentos neurobiológicos usando embriones de Gallus gallus. Este método optimiza la supervivencia del embrión y facilita la inyección de colorantes y el mapeo del destino celular.

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1. Eliminar los huevos de la incubadora <ol><li> Mantener a 37 ° C con una humedad relativa superior al 60% establecido. </li><li> Eliminar los huevos; a su vez los huevos a 90 ° para que la gran base se encuentra horizontal. </li></ol> 2. Hisopo para esterilizar los huevos <ol><li> Saturar un montón de no-gasa estéril con 70% de etanol. </li><li> Usar dos o tres piezas para limpiar hasta 5 huevos. Descartar la gasa cuando está sucia. </li></ol> 3. Albúmina de la preparación del sitio eliminación <ol><li> Corte y el lugar de 1 &quot;x 1&quot; pedazo de cinta de plástico de 3M acaba de salir de la base para proteger el área donde la albúmina se extraerán. </li></ol> 4. La eliminación de la albúmina <ol><li> Use la punta de un par de tijeras para hacer un pequeño agujero en el centro de la cinta. </li><li> Con una jeringa de 10 cc con un calibre 18, aguja de 1 pulgada, poco a poco de perforación de la aguja a través del agujero hecho por las tijeras. </li><li> Unidad de la aguja hacia abajo en un ángulo de 45 ° C hacia la parte inferior del huevo. </li><li> Inclinación de la aguja hacia el centro y sacar un 3 a 4 ml de albúmina. </li></ol> 5. Ventanas <ol><li> Corte de 3 &quot;x 3&quot; pedazo de cinta de plástico y se extienden para que quepa en la parte superior del huevo. Extender las esquinas de la plaza alrededor de los extremos redondeados de la superficie horizontal de los huevos, con cuidado de no tirar con demasiada fuerza. Tire de la cinta para que quede apretada contra la superficie de los huevos sin pliegues. </li><li> Con un par de afiladas tijeras de disección rectas 4 &quot;, giro de un agujero en el centro de la parte inferior de la zona donde se colocó la cinta. Lentamente guía de la cuchilla inferior de las tijeras en el óvulo y asegúrese de mantener la punta contra el interior de la cáscara. directa de la hoja hacia la base y poco a poco comienzan a cortar la cáscara. Proceda de forma hacia la izquierda, deteniéndose justo antes de llegar a la parte superior central. Retire las tijeras y repetir va en la dirección opuesta hasta que sólo una pequeña porción de la huevo permanece unido. Verifique que el óvulo es fecundado. Cierra la ventana. </li></ol> 6. De cierre, la reapertura y el sellado del huevo. <ol><li> Corte de un 3.2 &quot;de largo por 1 / 2&quot; de ancho de cinta de plástico y cierre la ventana de lo que cabe en el agujero que fue cortado. Tome otra de 1 x 1 &quot;pedazo de cinta y sellar el agujero desde el que se drena el huevo. Use un par de pinzas para volver a abrir el huevo para hacer cualquier manipulación. Cuando esté listo para volver los huevos a la incubadora, corte un pedazo de la cinta que es lo suficientemente grande como para sellar la ventana y cubrir toda la superficie horizontal del huevo. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Este método permite que el tiempo de supervivencia a largo después de las manipulaciones experimentales. Por ejemplo, el etiquetado de tinte estudios permitieron la supervivencia de E10 o más tarde en un estudio de mapeo destino (1). Además, se ha utilizado en estudios de electroporación in ovo que proporcionan la alteración de los niveles de expresión génica y el desarrollo necesario para proceder a las etapas posteriores del desarrollo (2-6). Esta técnica de ventanas se pueden utilizar en combinación con cualquier otro procedimiento que r...

<table><tbody><tr><td>Incubadora rotatoria</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Mantener a 37&amp;deg; grados con humedad relativa superior al 60 %</td></tr><tr><td>EtOH al 70 %</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Gasas</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Cinta plástica de 3M</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Jeringa de 10 cc</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/jeringa</td></tr><tr><td>Agujas de 18G</td><td> </td><td></td><td></td><td>Aguja de 1&amp;#189; pulgada, 1 por jeringa</td></tr><tr><td>Tijeras de disección</td><td> </td><td></td><td></td><td>Cuchillas rectas afiladas de 4&quot;</td></tr><tr><td>Huevos fertilizados</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

los huevos de ventanas de pollo para estudios del desarrollo

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

El estudio de desarrollo ha sido muy favorecida por el uso del embrión de pollo como modelo experimental. La facilidad de acceso del embrión ha permitido experimentos para trazar los destinos de células usando varios métodos, incluyendo pollo codorniz quimeras y tinte de etiquetado focal. Además, permite que las perturbaciones moleculares de varios tipos, incluyendo la colocación de revestimiento de proteínas cuentas y la introducción de ADN plásmido en el uso de la electroporación in ovo. Estos experimentos han arrojado datos importantes en el desarrollo de los sistemas nerviosos central y periférico. Para muchos de estos estudios, es necesario para abrir la cáscara del huevo y volver a cerrar sin perturbar el crecimiento del embrión. El embrión puede ser examinado en las sucesivas etapas de desarrollo en la reapertura de la cáscara del huevo. Aunque existen varios métodos excelentes para la apertura de los huevos de gallina, en este artículo se demuestra un método que se ha optimizado el tiempo de supervivencia de largo. En este método, el huevo descansa sobre un costado y una pequeña ventana se corta en la cáscara. Después del procedimiento experimental, la cáscara se usa para cubrir el huevo de la duración de su desarrollo. Cinta de plástico transparente que recubre la cáscara del huevo protege al embrión y ayuda a retener la hidratación durante el resto del período de incubación. Este método ha sido utilizado a partir de dos días de incubación, y ha permitido la supervivencia a través de las edades maduras de embriones.

La facilidad de acceso del embrión ha permitido experimentos para trazar los destinos de células usando varios métodos, incluyendo pollo codorniz quimeras y tinte de etiquetado focal. En este artículo se demuestra un método de preparación de huevo que se ha optimizado el tiempo de supervivencia de largo.

Los huevos de ventanas de pollo para Estudios del Desarrollo

El estudio del desarrollo se ha visto enormemente favorecido por el uso del embrión de pollo como modelo experimental. La facilidad de acceso al embrión ha...

Bienvenido al Laboratorio Kramer. Soy Matt Korn, del departamento de Neurobiología y Conducta de la Universidad de California en Irvine. Hoy les mostraré cómo preparar huevos de pollo para una variedad de manipulaciones, incluyendo la colocación de cuentas, la inyección de colorantes o la exploración in ovo.Así que, sin más preámbulos, comencemos. Bien, vamos a proceder a limpiar el huevo. La razón es que hay muchas cosas que podrían depositarse en él durante la incubación.Vamos a sellar esto con cinta. No queremos que entren pequeñas partículas en el área donde la ventana permitirá acceder al huevo, lo que aumentaría la probabilidad de que el embrión muera antes de que deseemos extraerlo. Entonces, si observaron desde el incubador, los huevos están colocados con el lado más grande hacia arriba.Lo que vamos a hacer es tomar el huevo y girarlo hacia un lado. Esto tendrá dos efectos: primero, nuestra ventana quedará justo aquí; y segundo, el embrión necesita flotar hacia la parte superior para que podamos realizar cualquier tipo de manipulación.Así que voy a colocar algunos de estos desde el estante que estaba en el incubador hasta un portahuevos de cartón. Esta pieza en realidad vie

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Un enfoque para el análisis de la migración y el destino final de las aves las células de la cresta neural en la codorniz, pollo embriones quiméricos se describe. Este método es una técnica simple y directa para el seguimiento de las células de la cresta neural durante la migración y la diferenciación que son difíciles de distinguir dentro de un embrión de pollo no manipulado.

Análisis de la migración de la cresta neural y la diferenciación de las especies cruzadas Trasplante

En este video, describimos una técnica para abrir la cáscara de un huevo de gallina fertilizado para exponer su membrana corioalantoidea o CAM portadora de una red de vasos sanguíneos ramificados. La CAM expuesta se puede utilizar para el modelado tumoral in ovo.

Ventana de huevo: un método para abrir la cáscara del huevo de gallina fertilizado para exponer la vasculatura de la membrana corioalantoidea

Ver y acceder al embrión de pollo durante el desarrollo puede ser un desafío. Hemos desarrollado un método ex ovo que es simple, rentable y se puede usar fácilmente en un aula o en un entorno de investigación. Este método proporciona acceso al embrión en etapas tardías del desarrollo embrionario (HH 40).

Optimizado Ex-ovo El cultivo de embriones del polluelo a etapas avanzadas de desarrollo

Este protocolo describe tres métodos sobre cómo obtener y utilizar embriones de pollo de 5 a 8 días de edad y su membrana corioalantoidea (CAM) como modelo in vivo para estudiar imágenes de ultrasonido con contraste y administración de fármacos mediada por microburbujas.

La preparación de embriones de pollo ex ovo y vasos de membrana corioalantoicos como modelo in vivo para imágenes de ultrasonido con contraste y estudios de administración de fármacos mediados por microburbujas

Este es un método eficaz para detectar supresores o impulsores de metástasis del cáncer. Las células, transducidas con una biblioteca de expresión, se inyectan en la vasculatura de la membrana corioalantoica del pollo para formar colonias metastásicas. Las colonias que han disminuido o aumentado la invasividad se extirpan, se expanden, se reinyectan para confirmar su fenotipo y, finalmente, se analizan mediante secuenciación de alto rendimiento.

Descubrimiento de reguladores metastásicos utilizando un modelo de membrana corioalantoica intravital de pollitos rápido y cuantitativo

Los embriones de pollo, como modelo de desarrollo clásico, se utilizan en nuestro laboratorio para evaluar las cardiotoxicidades del desarrollo después de la exposición a diversos contaminantes ambientales. Los métodos de exposición y los métodos de evaluación morfológica/funcional establecidos se describen en este manuscrito.

Uso del embrión de pollo como una herramienta poderosa en la evaluación de cardiotoxicidades del desarrollo

Se ha desarrollado una metodología robusta para llevar a cabo ensayos de investigación de alimentación en ovo utilizando huevos de pollos de engorde comerciales no incluidos para probar la capacidad de los compuestos naturales y sintéticos, en este caso, el ribósido de nicotinamida, para influir en el desarrollo y crecimiento muscular.

En Ovo Alimentación de huevos de pollos de engorde comerciales: un método preciso y reproducible para afectar el desarrollo y el crecimiento muscular

El ensayo de perla empapada implica la entrega dirigida de reactivo de prueba en cualquier punto de tiempo de desarrollo para estudiar la regulación de la diferenciación celular y la morfogénesis. Se presenta un protocolo detallado, aplicable a cualquier modelo animal experimental, para preparar tres tipos diferentes de perlas remojadas e implantarlas en el interdigito de un embrión de pollo.

Análisis de la diferenciación celular, la morfogénesis y el patrón durante la embriogénesis del pollo utilizando el ensayo de cuentas empapadas

Hemos utilizado técnicas estándar de respuesta auditiva del tronco encefálico (ABR) y las hemos aplicado a pollos lactantes, un modelo aviar precoz para la función auditiva. El protocolo describe en detalle las técnicas de preparación animal y adquisición de ABR, con pasos que podrían traducirse a otros modelos de aves o roedores.

Evaluación de la respuesta auditiva del tronco encefálico en crías de pollo

El pollito es un organismo modelo rentable, accesible y ampliamente disponible para una variedad de estudios. Aquí, se detalla una serie de protocolos para comprender los mecanismos moleculares que subyacen al desarrollo y la regeneración del oído interno aviar.

Métodos In Ovo y Ex Ovo para estudiar el desarrollo del oído interno aviar

Aprende a preparar huevos de pollo con ventana para experimentos neurobiológicos usando embriones de Gallus gallus. Este método optimiza la supervivencia del embrión y facilita la inyección de colorantes y el mapeo del destino celular.

Los huevos de ventanas de pollo para Estudios del Desarrollo

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