La colocación de crecimiento recubierto Factor-bolas en los embriones tempranos de la etapa de pollo

Bienvenido al laboratorio Raburn. Soy Matt Korn, del departamento de Neurobiología y Conducta de la Universidad de California en Irvine. Hoy vamos a tomar un huevo, abrirlo y colocar una perla que ha sido sumergida en un factor de crecimiento.

La maravillosa preparación de un huevo nos permitirá introducir un factor de crecimiento para cambiar el destino de varios tipos de tejidos en esta etapa temprana del desarrollo embrionario. Día dos y medio, o estadio 17. Bien, entonces estamos aquí, en el microscopio.

Tengo mis huevos y todas mis herramientas. Así que adelante, tome un huevo aquí y podrá ver dónde está nuestra cinta. Sello de ventana.

Tengo esta bonita donita pequeña. Está hecha simplemente de arcilla artística que se puede conseguir en una tienda de arte. Y voy a tomar un par de pinzas de cinco puntas realmente malas.

Estos han existido durante mucho tiempo. Las puntas son bastante romas, pero funcionan muy bien para levantar la cinta lo suficiente como para que aparezca la ventana. Puedo colocarlos.

Voy a doblar esto y colocar el huevo, esta ventana detrás, así. Ahora puedo colocarlo bajo el microscopio y realizar cualquier tipo de manipulación. En este caso, vamos a usar las cuentas, y voy a tomar mi tinta china ahora mismo, aunque sin la tinta china.

Puede observarse un pequeño disco embrionario justo aquí, un poco desplazado hacia un lado. Así que si giro el huevo, puedo ver dónde parte de la sangre está formando un círculo aquí. Y luego puedo tomar mi aguja con la tinta de la India.

Y voy a salirme un poco hacia un lado aquí, y voy a pasar por debajo del disco y allí hay un embrión. No quiero colocarlo demasiado, solo lo suficiente para ver el contraste del embrión contra el fondo negro. Luego, simplemente voy a girar esto para que la parte dorsal del embrión quede orientada hacia adelante.

Y lo que pueden ver aquí es la región cefálica. Aquí regresa el tubo neural y tenemos algunos somitos que nos permiten determinar su edad. Y si aumento la imagen, podemos observar que el corazón tiene un latido muy lento pero constante, lo cual es excelente.

El corazón estaba allí, pero sin latir. Tendríamos que preocuparnos un poco por si esta muestra era o no vital. Dado que no hay una membrana gruesa que la recubra, puedo proceder directamente con mi sonda de tungsteno aquí.

Yo, y hay una membrana delgada, y simplemente voy a moverme aquí para poder acceder al embrión. Colocamos cuentas en el prosencéfalo, así como en el rombencéfalo. Y en este caso, voy a dirigirme al prosencéfalo.

Ahora, para llegar hasta él, tengo que atravesar una membrana. Cuando los embriones son más jóvenes, puedo usar simplemente una sonda de tungsteno e introducirme a través del tubo neural, y así tendré acceso a la región donde deseo colocar la perla. Ahora voy a proceder con mi sonda de tungsteno.

Y estoy usando ambas manos solo para estabilizar mi mano. Voy a proceder a manipular el embrión. Entonces, una vez que tenga la perla aquí, puedo colocarla directamente dentro del tubo neural y hasta el prosencéfalo.

Vale, ahora que tengo el embrión abierto, puedo proceder a prepararlo y colocar la perla. Lo que haré es introducir un poco más la sonda y abrir el tubo neural, lo cual ya he hecho allí. Procederé a acercar un poco más la imagen.

Simplemente cambio un poco aquí mi enfoque. Y se puede ver que hay una pequeña abertura allí, pero aún no he hecho un agujero por encima de donde está el cefalón de la cola, y eso es porque allí es donde irá la cuenta. Por lo tanto, no quiero un agujero donde la cuenta pudiera salir flotando.

Quiero que esté un poco hacia atrás, para poder colocar la perla e impulsarla hacia adelante. Ahora voy a proceder a tomar una perla. Puedes ver que hay muchos tamaños diferentes.

Estos son acrílicos con heparina, están en PBS. Voy a tomar un par de pinzas de fuerza 55. Pueden ver que voy a introducirme en el PBS y simplemente voy a buscar uno que me guste.

Y una vez que está fuera del PBS, por lo general se adhiere a la pinza allí, se puede ver. Proceda a cubrir las perlas. Devuelva mi huevo.

Voy a enfocar el huevo. Así que voy a adelantarme y colocar la perla con la pinza de 55. Está un poco más alta en la pinza de lo que me gusta, pero ahí está.

Y voy a guiarlo hacia donde hice ese orificio en el tubo neural. Una vez que lo introduzca en el tubo neural, será fácil manipularlo hacia la parte frontal del cerebro en desarrollo. Así que voy a tomar mi sonda de tungsteno e impulsarla suavemente.

Al colocar la perla en el cefalón, debe tener cuidado porque lo que sucederá es que, a medida que el embrión envejece, comenzará a doblarse hacia adelante y luego hacia un lado. Y muchas veces lo que ocurre es que, cuando se coloca una perla en el cerebro anterior indicando Cefalón, esta caerá hacia el pico porque el pico se forma en la porción ventral del embrión, donde el cerebro se encuentra en la región dorsal. Pero esto se ve bastante bien.

Estoy bastante satisfecho con esto. Voy a proceder a tomar una pipeta con 10 microlitros de PBS estéril, y simplemente voy a colocar unas cuantas gotas aquí. Bien, ahora podemos proceder a cerrar el huevo.

Y lo que voy a hacer es simplemente levantar la ventana aquí arriba, hacia arriba y por encima, y el huevo aún no está sellado. Entonces, para que no se seque, lo que quiero hacer es tomar un poco de esta cinta plástica que hemos estado usando y cortar un trozo. Tiene aproximadamente el tamaño, un poco más grande que la ventana.

Y voy a estirarlo un poco, y lo voy a colocar justo encima de la ventana aquí y asegurarme de que quede bien ajustado. De este modo, todos los orificios que hayamos hecho, ya sea al drenar la albúmina o al cortar la ventana, quedan sellados. Ahora el huevo está sellado, no puede perder ninguna umin, y no se secará.

Debería poder envejecer normalmente. Eso es todo en cuanto a la colocación de las cuentas. Buena suerte con sus experimentos con pollos, y espero que obtenga los resultados que desea.