Name: Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: Aprende microdisección láser de tejidos de mamíferos para análisis de RNA usando el microscopio Leica A-S-L-M-D. Este método permite aislar células específicas con alta precisión para estudios de neurociencia.

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láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Microscopía láser captura, también conocido como la microdisección por láser (LMD), permite al usuario aislar un pequeño número de células o tejidos de congelados o fijados con formalina, cortes de tejidos incluidos en parafina. LMD técnicas se basan en una membrana termo lábil colocar ya sea en la parte superior de o por debajo, la sección de tejido. En un método, la energía se centró láser se utiliza para derretir la membrana en las células subyacentes, que pueden ser sacados de la sección de tejido. En el otro, la energía del láser vaporiza el papel de aluminio a lo largo de un camino &quot;dibujado&quot; en el tejido, permitiendo que las células seleccionadas para caer en un dispositivo de recogida. Cada técnica permite la selección de células con una resolución mínima de varias micras. DNA, RNA, proteínas, lípidos y las muestras pueden ser aislados y analizados a partir de micro-disección de muestras. En este vídeo, que muestran el uso de la Leica AS-LMD instrumento microdisección láser en siete segmentos, incluyendo una introducción a los principios de la LMD, la inicialización del instrumento para su uso, consideraciones generales para la preparación de la muestra, el montaje de la muestra y la creación de los tubos de la captura , alineando el microscopio, ajustar los controles de captura y la captura de muestras de tejido. Láser de captura de micro-disección permite al investigador para aislar muestras de poblaciones celulares puras tan pequeño como un celular pocos equivalentes. Esto permite el análisis de las células de interés que están libres de contaminantes vecinos, que pueda influir en los resultados experimentales.

Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

La microscopía de captura láser, también conocida como microdisección láser (LMD), permite al usuario aislar pequeñas cantidades de células o tejidos de muestras congeladas o...

Hola, mi nombre es Rob Edwards. Soy director de la instalación de microscopía de captura láser de la Universidad de California en Irvine. Voy a describirle el uso del microscopio de captura láser que tenemos aquí.Nuestro instrumento es un Leica A-S-L-M-D, que adquirimos hace aproximadamente tres años. Existen dos tipos diferentes de sistemas de captura láser. Uno puede compararse con un soldador puntual en el que se tiene un fragmento de tejido sobre un portaobjetos de vidrio recubierto por una membrana plástica, la cual se sitúa encima del tejido.Una fuente láser se utiliza entonces para fundir la membrana, soldando efectivamente el tejido a la membrana, y luego se retira dicha membrana, llevándose consigo el tejido capturado. Bien. Para iniciar el sistema de MAC, encendemos varios instrumentos en secuencia aquí. Comenzaremos con la caja de control A-S-L-M-D, que se enciende aquí.Luego encendemos la computadora, lo cual es bastante sencillo. Si se tiene una muestra que requiere óptica de fluorescencia para identificar las células que se van a capturar, se encendería la lámpara de mercurio para la iluminación de fluorescencia. No vamos a utilizar eso para esta demostración.Si desea

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El video describe la disección láser del modelo de cocultivo organotípico 3D con precisión a nivel de micras. En los modelos organotípicos 3D, los constituyentes del estroma, como los fibroblastos, se cocultivan tridimensionalmente con células epiteliales cancerosas. El modelo 3D sirve como una herramienta experimental que permite estudiar la invasión y las interacciones cáncer-estroma en condiciones casi fisiológicas.

Microdisección láser: una técnica para aislar células invasoras de cáncer colorrectal a partir de un modelo de cultivo organotípico en 3D

Microdisección se ha empleado ampliamente para el examen de ADN, ARN, y proteínas dentro del tejido. Microscopía de captura láser (LCM) es el método más comúnmente utilizado, pero una nueva técnica de fresado, mesodissection, es recientemente disponible. Demostramos la extracción de RNA de mesodissected formalina parafina fijo diapositivas de tejidos embebidos de granulomas de Mycobacterium tuberculosis.

Un nuevo enfoque para la recuperación Microdissection<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Las transcripciones específicas de formalina parafina fijo Embedded pulmón granulomas

El aislamiento de las neuronas de dopamina individuales o el área tegmental ventral con inmunohistoquímica directa o indirecta se demuestra utilizando láser captura microdissection. Se discuten los parámetros para el aislamiento de tejido de un portaobjetos de vidrio usando un láser de infrarrojos y a partir de diapositivas membrana utilizando la combinación de un láser infrarrojo y ultravioleta.

Microdisección de captura por láser - Una demostración del aislamiento individual de dopamina neuronas y el Área ventral tegmental completo

El objetivo de este protocolo es utilizar la microdisección de captura láser como un método eficaz para aislar poblaciones puras de tipos celulares de tejidos prostáticos heterogéneos para el análisis de ARN posterior.

Laser-captura microdisección de Human Prostática epitelio de Análisis de ARN

Aquí, describimos un protocolo para un microdissection de la captura del laser reproducible (LCM) para aislar la red trabecular (TM) para posteriores análisis de ARN. La capacidad de analizar los cambios en la expresión génica en el TM ayudarán en la comprensión de los mecanismos moleculares subyacentes de enfermedades oculares relacionadas con la TM.

Microdissection de la captura del laser de la malla Trabecular muy pura de ojos de ratón para análisis de expresión génica

Se desarrolló un protocolo de microdisección de captura láser (LCM) para obtener una cantidad suficiente de ARN de alta calidad para el análisis de la expresión génica en células óseas. El estudio actual se centra en las secciones del fémur del ratón. Sin embargo, el protocolo LCM reportado aquí se puede utilizar para estudiar la expresión génica en células de cualquier tejido duro.

Un protocolo de microdisección de captura láser que produce ARN de alta calidad a partir de huesos de ratón congelados

Este protocolo describe la microdisección de captura láser para el aislamiento del cartílago y el hueso de las secciones congeladas frescas del embrión del ratón. El cartílago y el hueso se pueden visualizar rápidamente mediante la tinción violeta de cresíl y se recogen con precisión para producir ARN de alta calidad para el análisis transcriptómico.

Microdisección de captura láser de cartílago embrionario de ratón y hueso para análisis de expresión génica

La microdisección láser (LMD) es una técnica sensible y altamente reproducible que se puede utilizar para descubrir vías que median la heterogeneidad e invasión del glioma. Aquí, describimos un protocolo optimizado para aislar áreas discretas del tejido glioma usando LMD láser seguido de análisis transcriptomático.

Microdisección de captura láser de las subregiones de Glioma para la caracterización espacial y molecular de la heterogeneidad intratumoral, los oncostreams y la invasión

Se describe un protocolo que utiliza la microdisección láser para aislar tejidos de nematodos individuales para la secuenciación de ARN. El protocolo no requiere kits de herramientas genéticas específicas de la especie, lo que permite comparar los perfiles de expresión génica entre diferentes especies a nivel de muestras de un solo tejido.

Microdisección láser para aplicaciones de un solo tejido independientes de la especie

Este protocolo describe un flujo de trabajo de alto rendimiento para la segmentación impulsada por inteligencia artificial de regiones de interés confirmadas por patología a partir de imágenes de sección de tejido delgado teñidas para el enriquecimiento de poblaciones celulares resueltas por histología utilizando microdisección láser. Esta estrategia incluye un algoritmo novedoso que permite la transferencia de demarcaciones que denotan poblaciones celulares de interés directamente a los...

Microdisección láser industrializada guiada por inteligencia artificial para el análisis proteómico a microescala del microambiente tumoral

Este protocolo describe un método para aislar ARN de regiones histológicas definidas de tejido hepático de ratón incrustado en compuesto de paraformaldehído y compuesto de Temperatura Óptima de Corte mediante microdissección por captura láser, permitiendo un análisis dirigido de expresión génica posterior.

Microdisección por captura láser de tejido hepático de ratón fijado con paraformaldehído para análisis de ARN

Aprende microdisección láser de tejidos de mamíferos para análisis de RNA usando el microscopio Leica A-S-L-M-D. Este método permite aislar células específicas con alta precisión para estudios de neurociencia.

Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

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