Cultivo de explantes de neuronas espirales murinas en matrices de electrodos múltiples

Comience con un segmento del oído interno de ratón disecado que contiene el ganglio espiral y el órgano de Corti, estructuras especializadas del oído interno.

El órgano de Corti contiene células ciliadas que actúan como receptores de señales auditivas.

El ganglio espiral está formado por cuerpos celulares neuronales que extienden procesos para inervar las células ciliadas del órgano de Corti.

Separe el ganglio espiral del órgano de Corti y obtenga pequeñas secciones de tejido o explantes de él.

Ahora, tome una matriz multielectrodo recubierta de matriz extracelular que contiene medios de cultivo.

Coloque los explantes en la matriz y coloque el órgano de Corti fuera del área del electrodo. Incubar.

Los explantes se adhieren a la superficie multielectrodo recubierta.

Agregue regularmente medios que contengan proteínas séricas y factores de crecimiento.

Durante el cultivo, los componentes del medio y el órgano de Corti proporcionan soporte neurotrófico, promoviendo el crecimiento de neuritas de las neuronas ganglionares espirales sobre el multielectrodo.

Separe el órgano de Corti del ganglio espiral en modiolus sosteniendo la porción basal del ganglio espiral y el órgano de Corti con fórceps, y desenrollando lentamente el órgano de Corti desde la base hasta el ápice. Luego, corte los explantes laterales del ganglio espiral con fórceps o tijeras o cuchillos finos de microdisección.

Ahora, transfiera los explantes del ganglio espiral y el órgano de Corti al MEA. Luego, coloque los explantes SG sobre el área del electrodo y el órgano de Corti, aproximadamente a 5 milímetros del área del electrodo. Coloque los explantes y el órgano de Corti en los MEA evitando dañar el tejido. Luego, coloque los MEA con cuidado en la incubadora y cultive a 37 grados Celsius y 5% de CO₂.

Al día siguiente, inspeccione visualmente los explantes para ver si se unen a los MEA. Luego, agregue 100 microlitros de medio de cultivo que contenga 10% de FBS y BDNF diariamente durante cinco días consecutivos. El día 6, agregue 2 mililitros de medio de cultivo, que contenga 10% de FBS y 5 nanogramos por mililitro de BDNF, y cultive el tejido durante 13 días adicionales.