Aislamiento y cultivo de neuronas dopaminérgicas embrionarias primarias de ratón en el mesencéfalo

Tome tejido del piso del mesencéfalo aislado de la región ventral del mesencéfalo de embriones de ratón.

El tejido es rico en neuronas de dopamina en desarrollo, que liberan el neurotransmisor dopamina.

Agregue una solución enzimática para descomponer la matriz del tejido, aflojando así las células.

Agregue una solución de suero que contenga ADNasa I y disocie mecánicamente el tejido digerido para generar una suspensión celular. Las proteínas séricas inhiben las enzimas, mientras que la ADNasa I degrada el ADN extracelular liberado durante la lisis celular, evitando la aglomeración celular.

Deje que los restos de tejido se asienten y transfiera las células suspendidas a un tubo nuevo.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante, luego volver a suspender las células en un medio neuronal de dopamina o DPM.

Tome una microplaca recubierta con un sustrato de cultivo celular en el centro de los pocillos, creando microislas.

Transfiera las células al centro de las microislas para cultivarlas a alta densidad.

Incubar, permitiendo que las células se adhieran a las microislas.

Llene los pocillos con DPM e incube, facilitando el crecimiento de las neuronas de dopamina.

Para configurar cultivos emb