Cuantificación de los somas de células ganglionares de la retina después de la hipertensión ocular inducida por cauterización
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:06 min. • April 28th, 2025
Tome una retina fijada químicamente aislada del ojo de una rata.
El ojo presenta daños inducidos por el calor en el plexo vascular limbal, una red de vasos sanguíneos que rodean la córnea.
Este daño bloquea el drenaje de líquidos, aumentando la presión intraocular (PIO) y causando degeneración de las células ganglionares de la retina (RGC).
Tratar la retina con una solución de permeabilización para permeabilizar las membranas celulares y nucleares.
Aplicar una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Eliminar la solución de bloqueo.
Introducir anticuerpos primarios que se dirigen a un factor de transcripción expresado predominantemente en RGC.
Wash para eliminar los anticuerpos no unidos.
Introducir anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unan a los anticuerpos primarios.
Wash para eliminar los anticuerpos no unidos.
Contratiña los núcleos con un colorante de unión al ADN.
Lave la retina y móntela en un portaobjetos de vidrio con un medio de montaje adecuado.
Visualice la retina bajo un microscopio de epifluorescencia.
Una densidad celular reducida en el ojo dañado en comparación con el control confirma la degeneración de RGC debido al aumento de
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