Inmunotinción de neuronas en cortes de cerebro de ratón después de la hibridación fluorescente in situ

Tome cortes de cerebro de ratón fijos y permeabilizados que contengan neuronas, incluidas las neuronas colinérgicas que expresan colina acetiltransferasa.

Los cortes se someten a hibridación fluorescente in situ para detectar ARNm diana localizados en axones colinérgicos, lo que da como resultado señales amplificadas utilizando sondas fluorescentes, que se detectan con microscopía de fluorescencia.

Agregue una solución de bloqueo que contenga proteínas y un agente de enfriamiento. Las proteínas evitan la unión inespecífica y el agente de enfriamiento neutraliza los fijadores residuales.

Incubar con anticuerpos primarios que se dirigen a la colina acetiltransferasa neuronal.

Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.

Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unen a los anticuerpos primarios unidos a la colina acetiltransferasa.

Lavar con tampón para eliminar el exceso de anticuerpos, luego enjuagar con agua destilada para eliminar los residuos del tampón.

Monte las rodajas con un medio de montaje que contenga una tinción nuclear para etiquetar los núcleos.

Usando microscopía de fluorescencia, obtenga imágenes de los cortes para visualizar las señal