Name: CD4 + T-linfocitos capturar usando un chip de microfluidos desechables para el VIH (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Aprenda a capturar linfocitos T CD4+ usando un dispositivo microfluídico de PDMS diseñado para entornos con recursos limitados. Este método permite cuantificar células T helper con alta precisión para investigación inmunológica.

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<ol><li> Prepare canal de microfluidos con anti-CD4 + biotinlayted superficie. </li><li> Inyectar 10 ml de muestra de sangre a 5 ml / min en el canal de microfluidos con bomba de jeringa. </li><li> Expulsar la sangre a 20 ml / min durante 20 minutos con PBS. </li><li> Inyectar la solución diluida FACS lisis (diluido al 10% de la solución madre con PBS) a 5ul/min durante 15 minutos. </li><li> Incubar durante 15 min. </li><li> Inyectar primaria CD3 + solución de anticuerpos (diluido al 10% de la solución madre con PBS) a 5 ml / min durante 20 min. </li><li> Incubar durante 2 horas. </li><li> Enjuague con canal PBS a 5 ml / min durante 15 min. </li><li> Inyectar 20% AF488 anticuerpos CD4 +, 0,2% de solución madre DAPI, y el 10% CD3 + secundaria de anticuerpos en 5 ml / min durante 20 minutos a la vez. </li><li> Incubar durante 20 min. </li><li> Limpiar los canales de PBS a 5 ml / min durante 15 min. </li><li> Recuento de células bajo microscopio de fluorescencia: <ol><li> Blanco (óptico) - Negro y blanco: la célula y el polvo </li><li> UV (DAPI) - Azul: células sólo </li><li> Azul (CD4 +) - Verde: los linfocitos T y monocitos </li><li> Verde (CD3 +) - Red: los linfocitos T sólo </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>Microcanal de PDMS</td><td></td><td></td><td></td><td>Elaborado mediante molde de SU-8</td></tr><tr><td>Sangre</td><td></td><td></td><td></td><td>Sangre donada de un sujeto humano normal. Hospital General de Massachusetts, 10 X leucocitos de alta densidad o Hospital Brigham y Mujer&amp;rsquo;s.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Tampón</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>Solución salina tamponada con fosfatos de Dulbecco&amp;rsquo;s 1x.</td></tr><tr><td>Solución lisadora FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Diluida al 10 % a partir de la solución madre con PBS.</td></tr><tr><td>Ac biotinilado anti-CD4+</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Superficie preparada con Ac biotinilado anti-CD4+, diluido al 10 % a partir de la solución madre con PBS/BSA tras mezclar 0,2 mg de la solución madre y 1 ml de agua desionizada.</td></tr><tr><td>anti-hCD3delta de cabra</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotecnología, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Diluido al 10 % a partir de la solución madre con PBS</td></tr><tr><td>IgG de cabra anti-conejo PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotecnología, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Ac secundario para Ac anti-CD3, diluido al 10 % a partir de la solución madre con PBS</td></tr><tr><td>anti-CD4+ humano</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Etiquetado con Alexa Fluor 488, diluido al 20 % a partir de la solución madre con PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>Solución de 4&amp;rsquo;,6-diamino-2-fenilindol dihidrocloruro, diluida al 0,2 % a partir de la solución madre con PBS.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-linfocitos capturar usando un chip de microfluidos desechables para el vih

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-linfocitos capturar usando un chip de microfluidos desechables para el VIH

Hola, mi nombre es Richard Lin y soy investigador en el grupo de la profesora TI Mercy en la División de Ciencias e Ingeniería Médica de Harvard y MIT. El proyecto en el que estoy trabajando consiste en cuantificar y capturar linfocitos T positivos para CD4 y positivos para C3. En sangre de pacientes, esto se utilizará en entornos con recursos limitados.Justo delante de mí tenemos un dispositivo microfill compuesto de PDMS, que es polidimetilsiloxano. El dispositivo, el canal en sí, tiene una altura de 50 micrómetros y el volumen total en el dispositivo es de 10 microlitros. Así que este es un dispositivo extremadamente preciso que vamos a utilizar para capturar linfocitos T auxiliares.Básicamente, el estándar de referencia diagnóstico para pacientes con VIH. La superficie del dispositivo microfluídico ya ha sido preparada con proteína y anticuerpos positivos para CD4 en la jeringa. En este momento tenemos solo tampón biológico PBS a un pH de 7,4 y ahora lo haremos fluir a través del canal para eliminar el anticuerpo positivo para CD4 en exceso.En esta etapa, no es necesario controlar la velocidad porque solo intentamos eliminar el material sobrante, y realmente no importa cuál sea

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Captura de células utilizando un dispositivo de microfluidos

Este experimento visualizado es una guía para la utilización de un clon de fluorescencia molecular del VIH para vivir experimentos de imagen confocal.

Visualización de la célula a célula de Transmisión del VIH utilizando clones fluorescente del VIH y la microscopía confocal en vivo

Hemos desarrollado un vector lentiviral que posee, además de la LTR-Tat respuesta, el elemento de respuesta Rev (RRE) que pueden regular la expresión del gen de una forma del VIH-1 Tat y Rev-dependiente. El vector permite la detección específica de la replicación del VIH en las células vivas a través de la expresión de GFP.

Marcado específico del VIH-1 células positivas utilizando un vector lentiviral Ap-dependientes que expresan la proteína verde fluorescente

Un sistema integrado de chip microfluídico termoplástico ha sido desarrollado para su uso como un diagnóstico molecular. El chip realiza la extracción de ácido nucleico, la transcriptasa inversa y la PCR. Los métodos para fabricar y ejecutar el chip se describen.

Fabricación de chips de microfluidos y método para detectar la influenza

En este artículo se presenta un chip de microfluidos para el análisis de células individuales. Permite la cuantificación de las proteínas intracelulares, enzimas, cofactores, y segundos mensajeros por medio de ensayos fluorescentes o inmunoensayos.

Un chip de microfluidos para el análisis químico versátil de células individuales

Este protocolo describe los métodos para construir un modelo de ratón humanizado de médula ósea/hígado/timo con inmunidad modificada basada en células madre contra la infección por VIH.

-Base de células madre Inmunidad Diseñado frente a la infección por VIH en el modelo de ratón humanizado

Descrito es una metodología para cuantificar la expresión de 96 genes y 18 proteínas de la superficie de células ex vivo, lo que permite la identificación de diferencialmente expresan genes y proteínas en células virus-infectadas en comparación con las células no infectadas. Aplicamos el enfoque de estudio CD4 infectados por SIV+ T las células aisladas de macaques del macaco de la India.

Sola célula cuantificación del mRNA y la expresión de la proteína de superficie de CD4 infectados por el Virus de la inmunodeficiencia de los simios+ T las células aisladas de macaques del macaco de la India

Aquí se presenta un protocolo para un enfoque de imágenes de fluorescencia, multiplex immunofluorescent cell-based detection of DNA, RNA y protein (MICDDRP), un método capaz de la visualización simultánea de fluorescencia unicelular de proteínas virales y ácidos nucleicos de diferente tipo y varamiento. Este enfoque se puede aplicar a una amplia gama de sistemas.

Imágenes de fluorescencia multiplexada de una sola célula para visualizar ácidos nucleicos y proteínas virales y monitorear el VIH, el HTLV, el VHB, el VHC, el virus del Zika y la infección por influenza

Aquí, presentamos un protocolo en el cual las solas células se supervisan para los eventos agudos y la infección productiva HIV-1 en un dispositivo nanofluidic. Los datos de imágenes definen las interacciones virus-receptor huésped y la dinámica de la vía de señalización. Este es el primer método para el cultivo unicelular longitudinal nanofluídico de alto rendimiento y las imágenes para estudiar la cinética de señalización y las interacciones moleculares.

Caracterización Unicelular De La Afluencia De Calcio Y La Infección Por VIH-1 Utilizando Una Plataforma Optofluídica Multiparámetro

El chip microfluídico clínico es una importante técnica de análisis biomédico que simplifica el preprocesamiento clínico de las muestras de sangre de los pacientes y tiñe inmunofluorescentemente las células tumorales circulantes (CTC) in situ en el chip, lo que permite la rápida detección e identificación de una sola CTC.

Plataforma de chip microfluídico clínico para el aislamiento de células tumorales circulantes versátiles

Las células tumorales circulantes (CTC) son fundamentales para el estudio de la progresión y la metástasis del cáncer. Este artículo presenta un protocolo integrado de alto rendimiento para el enriquecimiento de CTC y la secuenciación de CTC única, mejorando la eficiencia de captura y la pureza de CTC al tiempo que reduce la contaminación y los costos de secuenciación, avanzando así en la investigación oncológica de precisión y las aplicaciones clínicas.

Tecnología de clasificación de células tumorales circulantes de alto rendimiento basada en microfluidos y secuenciación de células individuales

Aprenda a capturar linfocitos T CD4+ usando un dispositivo microfluídico de PDMS diseñado para entornos con recursos limitados. Este método permite cuantificar células T helper con alta precisión para investigación inmunológica.

CD4 + T-linfocitos capturar usando un chip de microfluidos desechables para el VIH

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