Inyección estereotáxica de vectores virales para la reprogramación de células gliales en un modelo de ratón

Asegure un ratón transgénico anestesiado en un marco estereotáxico con el cráneo expuesto.

Este ratón expresa Cre recombinasa en células gliales.

Coloque el brazo estereotáxico que sostiene el tubo capilar sobre el cráneo y alinéelo por encima del bregma.

Ajuste los ejes estereotácticos para una orientación precisa.

Taladre un agujero en el sitio objetivo, asegurándose de que la duramadre permanezca intacta. Retire los fragmentos de hueso.

Enjuague el tubo capilar con tampón. Dibuje una burbuja de aire, luego cargue el virus adenoasociado que lleva genes de proteínas fluorescentes y reprogramación neuronal inactiva.

Baje el tubo capilar a la profundidad objetivo e inyecte la solución viral en la región rica en células gliales.

Retraiga con cuidado el tubo para evitar el reflujo.

Cierre la incisión y permita la recuperación.

Los virus internalizados entregan genes inactivados flanqueados por loxP al núcleo glial. La cre recombinasa los invierte, activando genes de reprogramación neuronal e impulsando la conversión neuronal. Las interneuronas reprogramadas expresan la proteína fluorescente bajo el promotor específico de la neurona.

Para inyectar factores de reprogramación, coloque un ratón an