Obtención de imágenes de liberación de neurotransmisores mediante reporteros de ingeniería fluorescente de neurotransmisores basados en células
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:13 min. • June 17th, 2025
Tome un ratón con una ventana craneal que contiene una capa delgada del cráneo para permitir la visualización del cerebro.
El movimiento de la cabeza se restringe mediante una barra de cabeza adjunta.
La corteza está preinyectada con reporteros de ingeniería fluorescente de neurotransmisores basados en células, o CNiFER, que son células reporteras que permiten la detección en tiempo real de la liberación de neurotransmisores.
Los CNiFER expresan un receptor de neurotransmisores acoplado a proteína G y un detector de calcio citoplasmático, que consiste en un dominio de unión al calcio fusionado con fluoróforos donantes y aceptores.
Usando un microscopio de dos fotones, excite el detector para causar la emisión de fluorescencia del donante y permita la visualización de CNiFER.
La actividad neuronal que llega a la corteza provoca la liberación de neurotransmisores.
Estos neurotransmisores se unen a los receptores CNiFER y activan las vías de señalización que inducen la liberación de calcio del retículo endoplásmico.
El aumento del calcio citoplasmático se une al detector, provocando un cambio conformacional que acerca los fluoróforos.
El donante transfiere energía al aceptor para estimular la
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