Imágenes de la dinámica subcelular del calcio en neuronas de Caenorhabditis elegans
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:17 min. • June 17th, 2025
Tome dos cepas transgénicas separadas de Caenorhabditis elegans en portaobjetos con almohadillas de agar. Las almohadillas contienen una solución de rodadura con un agente paralizante que minimiza el movimiento.
El cordón nervioso ventral de los gusanos, o VNC, contiene interneuronas excitadoras que expresan indicadores de calcio citoplasmático en una cepa e indicadores de calcio mitocondrial en la otra.
Coloque un cubreobjetos para enrollar los gusanos, orientando el VNC para su visualización, luego colóquelos bajo un microscopio de fluorescencia.
Use luz visible para localizar los gusanos, luego cambie al modo de fluorescencia.
En las neuronas en reposo, el bajo calcio intracelular mantiene los indicadores libres, lo que resulta en una fluorescencia débil.
La actividad neuronal espontánea abre canales de calcio dependientes de voltaje, lo que permite la entrada de calcio.
En la cepa con indicadores citoplasmáticos, el calcio se une a los indicadores, mejorando la fluorescencia citoplasmática.
El exceso de calcio citoplasmático ingresa a las mitocondrias a través de canales. En la cepa con indicadores mitocondriales, la unión al calcio aumenta la fluorescencia mitocondrial.
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