Name: La encapsulación de los cardiomiocitos en un hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos cardíacos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Aprende a encapsular cardiomiocitos de rata neonatal en hidrogel de fibrina para ingeniería de tejido cardíaco. Este método permite evaluar la funcionalidad del miocardio y desarrollar modelos in vitro para investigación cardiaca.

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Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de la Salud - Instituto Nacional del Corazón, los Pulmones y la Sangre (Premio # R00HL093358 a LDB).

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

La encapsulación de los cardiomiocitos de rata neonatal en fibrina resultados geles de forma coherente y viable en tres dimensiones en el modelo in vitro del sistema de miocardio. La fibrina es una biomaterial preferido porque cuando las células están atrapados, son metabólicamente activa y capaz de compactar, remodelación y volver a crear una matriz extracelular que está en consonancia con el tejido del corazón nativo de 12. Porque permitimos que los cardiomiocitos a alinearse en este entorno, su funcionalidad es más característico del músculo cardíaco que resulta en la fuerza de contracción mayor en comparación con los tejidos isotrópico 6. Para posibles aplicaciones terapéuticas, es necesario encapsular las células dentro de un material que promueve tanto la viabilidad y funcionalidad. Los protocolos se presentan demuestran un medio eficiente y preciso para la creación de una red de fibrina para controlar el comportamiento de las células cardíacas en un microambiente tridimensional. A los posibles problemas de unos pocos puedan surgir durante la creación y la cultura de estas construcciones. Un problema potencial es el mantenimiento de la viabilidad de las células antes de la encapsulación, que afectarán de manera significativa la funcionalidad de la construcción. Debería hacerse lo posible para limitar la muerte celular tras el aislamiento, reduciendo el tiempo entre el aislamiento y la encapsulación de las células dentro del gel de fibrina. Construcciones deben ser siempre los medios de comunicación cada dos días en un horario estricto. Además, es importante para asegurar la homogeneidad en todas las soluciones que se utilizan. Si la mezcla de fibrinógeno, trombina y células produce un entorno heterogéneo, la capacidad de las células de la remodelación de la MEC, mecánicamente par y el contrato es potencialmente obstruida. También es importante para prevenir la formación de burbujas de aire durante la inyección de las construcciones con el fin de evitar perturbaciones en la continuidad de la ingeniería tisular. Una forma de aliviar este problema es atraer a más gel que se necesita para hacer la construcción en la jeringa e inyectar lentamente. Por último, una vez que la matriz de fibrina ha establecido y ha estado en medio de cultivo durante 24 horas, es esencial para separar la construcción de los lados del molde de anillo para promover la compactación a base de células de gel de fibrina. Mantener la construcción en el centro del molde facilita el gas y el intercambio de nutrientes. La adhesión a los lados del molde de anillo también puede alterar la alineación deseada celular. Es importante tener en cuenta que la decapitación consciente se utiliza como método de eutanasia en este protocolo, que es un método aceptable con arreglo a las directrices tanto del Instituto Nacional de Salud y la American Veterinary Medical Association. Sin embargo, algunas instituciones recomiendan el uso de anestesia seguido por decapitación de ratas recién nacidas. Hemos elegido la decapitación consciente, ya que garantiza la mínima cantidad de tiempo bajo condiciones de hipoxia para el tejido extirpado el corazón / las células. Cantidades relativamente pequeñas de la hipoxia puede conducir a isquemia del miocito y potencialmente la muerte de miocitos, lo cual puede afectar los resultados de este protocolo.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios </th></tr><tr><td> Cloruro de sodio </td><td> Sigma </td><td> S7653 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Cloruro de potasio </td><td> Sigma </td><td> P9333 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Fosfato sódico dibásico </td><td> Sigma </td><td> S7907 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Fosfato de potasio monobásico </td><td> Sigma </td><td> P5655 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Glucosa </td><td> Sigma </td><td> G5400 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> hemostático </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 91308-12 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> pinzas finas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 11251-20 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> grandes tijeras </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 91401-14 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> micro-tijeras </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 91501-09 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> bisturí manejar </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 10008-13 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> hoja de bisturí </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-918-5A </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> Underpad banco absorbente </td><td> VWR </td><td> 56617-014 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> campo estéril </td><td> Fisher Scientific </td><td> GM42526 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> autoclave bolsa </td><td> Pescador </td><td> 01-812-54 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> gasa pad </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-761-52 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> betadine </td><td> Purdue Productos </td><td> 67618-150-01 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> guantes estériles </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-020 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> pipeta de transferencia estéril </td><td> Fisher Scientific </td><td> 9962 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> colagenasa </td><td> Worthington </td><td> CLS2 </td><td> Aislamiento </td></tr><tr><td> Teflon varilla 1 / 4 pulgada de diámetro </td><td> McMaster-Carr </td><td> 8546K11 </td><td> Molde de parte </td></tr><tr><td> Teflon ID tubo de 1 / 4 pulgadas, 1 / 2 pulgada OD </td><td> McMaster-Carr </td><td> 8547K31 </td><td> Molde de parte </td></tr><tr><td> O-Ring de silicona 1 / 4 pulgada ID, 1 / 2 pulgada OD </td><td> McMaster-Carr </td><td> 9396K204 </td><td> Molde de parte </td></tr><tr><td> Teflon tubo de 1 / 4 de pulgada ID, 5 / 16 pulgadas de diámetro exterior </td><td> McMaster-Carr </td><td> 52355K14 </td><td> Molde de parte </td></tr><tr><td> Kendall jeringas Monoject 6 cc </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-561-41 </td><td> Molde de parte </td></tr><tr><td> BD jeringa de 3 cc </td><td> Fisher Scientific </td><td> 309585 </td><td> Molde de parte </td></tr><tr><td> El fibrinógeno bovino </td><td> Sigma </td><td> F8630 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Trombina bovina </td><td> Sigma </td><td> T7513 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 1 M HEPES </td><td> Sigma </td><td> H0887 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Cloruro de sodio </td><td> Sigma </td><td> S7653 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 10569 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Pluronic F-127 </td><td> Sigma </td><td> P2443 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Cloruro de calcio </td><td> Sigma </td><td> 383147 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 0,2 micrones </td><td> Fisher Scientific </td><td> SCGVT05RE </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Filtros de 40 micras de células </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-363-547 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 0,45 micras botella superior del filtro </td><td> Corning </td><td> 430627 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> vidrio pre-filtro </td><td> Millipore </td><td> AP2007500 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 18G 1 1 / 2 pulgada aguja larga </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-826-5D </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 21G 1 pulgada aguja </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-826C </td><td> Construir </td></tr><tr><td> la construcción de botes </td><td> Fisher Scientific </td><td> 2116 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Penicilina-estreptomicina </td><td> Invitrogen </td><td> 15140 </td><td> Medios de comunicación </td></tr><tr><td> suero de caballo </td><td> Sigma </td><td> H1138 </td><td> Medios de comunicación </td></tr><tr><td> De suero fetal bovino </td><td> Invitrogen </td><td> 16000 </td><td> Medios de comunicación </td></tr><tr><td> ácido aminocaproico </td><td> Acros orgánicos </td><td> 103305000 </td><td> Medios de comunicación </td></tr><tr><td> de ácido ascórbico </td><td> Sigma </td><td> A5960 </td><td> Medios de comunicación </td></tr><tr><td> insulina </td><td> Sigma </td><td> I9278 </td><td> Medios de comunicación </td></tr><tr><td> Paraformaldehído, el 16% </td><td> Microscopía electrónica de Ciencias </td><td> 15710 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> La temperatura óptima de corte (OCT) </td><td> Ted Pella </td><td> 27050 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> 2-metilbutano </td><td> Pescador </td><td> 03551-4 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> Ratón MYH1/2/4/6 anticuerpo primario </td><td> Santa Cruz de Biotecnología </td><td> SC-32732 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> Conejo conexina 43 anticuerpo primario </td><td> Señalización Celular Tecnología </td><td> 3512 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> DyLight 549-burro conjugado anti-anticuerpo secundario del ratón </td><td> Jackson ImmunoResearch Laboratories </td><td> 715-505-151 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> DyLight 488-conjugado Donke anticuerpo anti-conejo secundaria </td><td> Jackson ImmunoResearch Laboratories </td><td> 711-485-152 </td><td> Histología </td></tr><tr><td> Live / Dead ensayo </td><td> Invitrogen </td><td> L-3224 </td><td> Análisis </td></tr></tbody></table>

la encapsulación de los cardiomiocitos en un hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos cardíacos

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering 

El cultivo de células en un ambiente de hidrogel tridimensional es una técnica importante para el desarrollo de estructuras para la ingeniería de tejidos, así como el estudio de la respuesta celular bajo condiciones de cultivo in vitro diferentes. El entorno de tres dimensiones más se asemeja mucho a lo que las células de observar en vivo debido a la aplicación de estímulos mecánicos y químicos en todas las dimensiones de 1. Tridimensional hidrogeles pueden ser hechas de polímeros sintéticos, tales como el PEG-DA 2 y 3 PLGA o un número de proteínas naturales como el colágeno 4, 5 o ácido hialurónico 6,7 fibrina. Hidrogeles creado a partir de la fibrina, una proteína de la sangre natural de coagulación, puede polimerizar para formar una malla que forma parte de la curación del cuerpo de los procesos naturales de la herida 8. La fibrina es la célula-degradables y potencialmente autólogo 9, por lo que es un ideal andamiaje temporal para la ingeniería de tejidos. A continuación se describe con detalle el aislamiento de los cardiomiocitos neonatales de tres crías de rata día de edad y la preparación de las células para la encapsulación en las construcciones de hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos. Miocitos neonatales son una fuente de células comunes que se utilizan para estudios in vitro en la formación de tejido cardíaco y la ingeniería de 4. Gel de fibrina se crea por el fibrinógeno se mezcla con la enzima trombina. Trombina escinde fibrinopéptidos FPA y FPB de fibrinógeno, revelando los sitios de unión que interactúan con otros monómeros 10. Estas interacciones causa de los monómeros que se auto-ensamblan en las fibras que forman la malla de hidrogel. Debido a que el calendario de esta reacción enzimática se puede ajustar alterando la relación de la trombina de fibrinógeno, o la proporción de calcio a la trombina, se puede moldear por inyección construye con un número de diferentes geometrías 11,12. De otra parte, puede generar la alineación del tejido resultante por la forma en que restringen el gel en la cultura 13. Después de cultivar las construcciones de ingeniería de tejido cardíaco para dos semanas bajo condiciones estáticas, las células cardíacas han comenzado a remodelar la construcción y puede generar una fuerza de contracción en condiciones de estimulación eléctrica 6. Como parte de este protocolo, también se describen los métodos para el análisis de la ingeniería tisular del miocardio después de que el período de cultivo, incluyendo el análisis funcional de la fuerza activa generada por el músculo cardíaco construir sobre la estimulación eléctrica, así como los métodos para la determinación de la viabilidad celular final (en vivo-muerto ensayo) y la tinción inmunohistoquímica para examinar la expresión y la morfología de las proteínas típicas importante para la contracción (cadena pesada de miosina o MHC) y el acoplamiento celular (conexina 43 o Cx43) entre los miocitos.

Se describe el aislamiento de los cardiomiocitos neonatales y la preparación de las células para la encapsulación en las construcciones de hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos. Se describen los métodos para el análisis de la ingeniería tisular miocardio después del período de la cultura como fuerza activa generada a la estimulación eléctrica y la viabilidad celular y tinción inmunohistoquímica.

La encapsulación de los cardiomiocitos en un hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos cardíacos

El cultivo de células en un entorno de hidrogel tridimensional es una técnica importante para desarrollar constructos destinados a la ingeniería de tejidos, así como para estudiar...

El objetivo general de este procedimiento es encapsular cardiomiocitos de rata neonatal en un hidrogel FI para la ingeniería de tejido cardíaco. Esto se logra primero aislado los corazones de ratas neonatales de dos a tres días de edad. A continuación, los corazones se digieren en colagenasa.Para separar las células cardíacas de la matriz extracelular, las células cardíacas se encapsulan entonces en un hidrogel de fibrina. Finalmente, los constructos se cultivan durante dos semanas. En última instancia, los resultados muestran que los constructos tienen la capacidad de generar una fuerza de contracción de aproximadamente 1,3 milinewtons en respuesta a la estimulación eléctrica.Además, la estructura alineada del constructo puede observarse mediante tinción histológica de proteínas de miocitos. Los constructos miocárdicos ingenierizados pueden servir como una terapia potencial para la infartación miocárdica al permitir la reparación o sustitución de tejido cicatrizado con tejido ingenierizado, mejorando así la función cardíaca tras una lesión o enfermedad. Estos constructos pueden servir como un sistema modelo in vitro valioso para estudiar los efectos de diversos estímulos sobre las fuerzas contráctiles y el desarrollo cardíaco normal y fisiopatológico.Después de preparar el medio y esterilizar los instrumentos quirúrgicos para cada persona, coloque una almohadilla absorbente para el banco debajo de la campana, en la superficie de trabajo, y cúbrala con un campo estéril. Coloque los instrumentos quirúrgicos estériles y una gasa de cuatro por cuatro sobre el campo estéril. Sin tocar los instrumentos, abra una hoja de bisturí estéril número 20 y colóquela sobre el campo.Después de decapitar a un cachorro, limpie el tórax con gasa empapada en Betadine. Sujete al cachorro presionando juntas las escápulas. Realice una toracotomía parcial para exponer el corazón, aumente la presión aplicada sobre las escápulas, lo que hará que el corazón sobrepase las costillas.Para la disección del escápula, pase la hoja del escalpelo detrás del corazón para seccionar los grandes vasos y extraer el órgano. Coloque el corazón sobre hielo en una placa de Petri que contenga glucosa en PBS. Una vez que los corazones hayan sido aislados, elimine la sangre residual y el tejido conectivo enjuagándolos con glucosa en PBS frío con hielo.Retire la tercera parte superior de cada corazón, de modo que permanezcan las dos terceras partes inferiores. Para aislar únicamente la mayor parte del tejido ventricular, coloque el tejido en una placa de Petri nueva con PBS frío con glucosa. Utilizando tijeras y pinzas microesteriles, corte cuidadosamente los corazones en trozos de aproximadamente un milímetro cúbico.Transfiera el tejido a un tubo cónico de 50 mililitros y retire todo el tampón excepto 10 mililitros. Añada siete mililitros de solución de colagenasa. Agite la mezcla de tejido con colagenasa a 37 grados Celsius durante siete minutos.Pipetee suavemente 10 veces para desagregar los trozos de tejido. Deje que los trozos se sedimenten y luego aspire el líquido y deséchelo. Añada siete mililitros de colagenasa a los trozos de tejido y realice una nueva digestión durante siete minutos.Para cada paso restante, pipetee suavemente 10 veces para desagregar los fragmentos de tejido. Después de que se asienten, retire el sobrenadante y recójalo en un tubo cónico separado de 50 mililitros, agregue siete mililitros de colagenasa a los fragmentos de tejido y vuelva a digerir durante siete minutos. A cada tubo de sobrenadante, agregue 10 mililitros de solución de paro con una pipeta serológica diferente tras cada adición de sobrenadante proveniente de la digestión.Para preparar la elaboración de constructos de gel de fibrina, consulte la sección escrita del protocolo. Coloque los mandriles previamente construidos dentro de las carcasas de jeringas de seis cc utilizando la jeringa de tres cc como émbolo para obtener un sello hermético entre las arandelas tóricas y las arandelas de teflón. Para preparar un mililitro de gel de fibrina, prepare la solución F en un tubo cónico añadiendo 112 microlitros del stock de fibrinógeno a 558 microlitros de HEPES 20 milimolar.Tamponar en solución salina al 0,9 % en un tubo cónico separado. Prepare una solución T añadiendo 17 microlitros del stock de trombina y 1,3 microlitros de solución de calcio normal dos a 135 microlitros de DMEM. En un tercer tubo cónico, centrifugue las células y resuspenda hasta una concentración de 29,4 millones de células por mililitro, es decir, seis veces la concentración final deseada de células en el constructo.Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades con el paso de fabricación del constructo. Después de mezclar las soluciones de fibrinógeno y trombina, la polimerización del fibrinógeno ocurre rápidamente. Por lo tanto, las personas deben trabajar con rapidez para asegurar una solución homogénea y evitar la incorporación de burbujas de aire en el hidrogel durante su inyección en el molde.Cuando esté listo para moldear el constructo de gel de fibrina, prepare una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 18 y una pulgada y media. Tenga también lista una aguja de calibre 21 de una pulgada. Para preparar un mililitro de solución de gel de fibrina, agregue 667 microlitros de la solución F en un tubo cónico de 50 mililitros, seguido de 167 microlitros de la solución celular.Y por último, 167 microlitros de solución T. Pipetee cuidadosamente la mezcla para no introducir burbujas de aire. En este momento, la reacción ha comenzado y la inyección del constructo debe realizarse inmediatamente.Utilice la jeringa y la aguja de calibre 18 y aspire la solución de fibrina. Tenga cuidado de no invertir la jeringa para evitar que entren burbujas en la aguja. Reemplace la aguja de calibre 18 por una aguja de calibre 21.Toque suavemente la jeringa para expulsar cualquier burbuja de aire. A continuación, inserte la jeringa en el molde entre el tapón que recubre, siguiendo la ranura del anillo tórico de teflón, e inyecte la solución en el molde. Incline el molde para asegurar un llenado completo.Luego, rellene los moldes restantes. Envuelva los moldes en película de parafina en grupos de tres y colóquelos en el incubador o horno a 37 grados Celsius. Incube los geles durante 20 minutos para permitir que la fibrina tenga suficiente tiempo para polimerizarse completamente.Llene cada frasco de cultivo con 21 mililitros de medio para constructos miocárdicos por cada constructo. Utilice la carcasa estéril de una jeringa de tres cc como émbolo para introducir el mandril con el constructo en una placa de Petri grande con DMEM. A continuación, coloque el constructo en el frasco de muestra.Incube los frascos a 37 grados Celsius durante dos semanas. Para comenzar el análisis de un constructo de fibrina, sujete con pinzas cocodrilo los cables que salen del estimulador a los alambres de los electrodos en el baño. Encienda la placa de adquisición de datos, el generador de pulsos y el transductor de fuerza.Configure el transductor de fuerza en la posición 5G y póngalo a cero. Abra un programa personalizado de LabView que muestre y guarde los datos del transductor de fuerza. Cree un archivo de texto nuevo y vacío en la carpeta de datos para cada muestra; utilizando pinzas, retire el constructo del soporte mandibular deslizando suavemente el anillo del constructo desde el soporte de teflón y colóquelo sobre el poste metálico fijo en el sistema de medición de fuerza.Baño de medio. Utilice las pinzas para empujar y levantar el constructo alrededor del poste del transductor de fuerza. Coloque el otro extremo del constructo sobre el brazo del transductor y apriete hasta que el transductor indique lectura.1.0 G de fuerza sobre el estimulador cardíaco. Ajuste el voltaje del pulso a 20 voltios, la duración a seis milisegundos y la frecuencia a un hercio. Inicie el marcapasos eléctrico presionando el botón de activación de salida.Comience a grabar hasta que la forma de onda se vuelva regular. Analice la forma de onda en MATLAB para determinar la velocidad de contracción y la velocidad de relajación. El constructo de cardiomiocito con fibrina inicialmente cubre todo el ancho del molde.Después de dos semanas de cultivo, se contrae hasta aproximadamente un quinto del ancho inicial. La estimulación eléctrica del constructo genera datos de fuerza de contracción como se muestra aquí. Se espera una fuerza de contracción de aproximadamente 1,3 milinewtons.La viabilidad celular del constructo depende de la distancia a la que se encuentran las células de la superficie del constructo en contacto con el medio de cultivo, debido a las limitaciones de difusión del oxígeno hacia el interior del constructo. En la superficie del constructo, se observa una alta viabilidad celular mediante microscopía confocal. La estructura alineada del constructo se observa mediante tinción de la cadena pesada de miosina en rojo y de la conexina 43 en verde, esta última necesaria para el acoplamiento celular entre los miocitos.Una vez dominado, todo el protocolo debería llevar aproximadamente cinco horas. La parte de aislamiento de I llevará aproximadamente tres horas, mientras que la parte de fabricación del constructo tomará aproximadamente dos horas. Al realizar este procedimiento, es importante mantener siempre la aguja apuntando hacia abajo para evitar la incorporación de burbujas de aire en la red de fibrina.Además, al inclinar el molde se mantendrá siempre el orificio de la aguja en el punto más alto durante la inyección, lo que garantizará que la colada del molde se llene completamente con la solución de fibrina. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo encapsular cardiomiocitos en hidrogeles de fibrina con forma de anillo, primero aislándolos de ratas neonatas y luego moldeándolos por inyección en moldes cilíndricos de fácil ensamblaje.

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Este protocolo se centra en la utilización de la capacidad inherente de las células madre para tomar el ejemplo de su matriz extracelular circundante y ser inducidas a diferenciarse en múltiples fenotipos. Este manuscrito métodos extiende nuestra descripción y caracterización de un modelo utilizando un hidrogel bicapa, compuesto de PEG-fibrina y colágeno, a la vez co-diferenciar derivadas de tejido adiposo células...

Ingeniería de un hidrogel de dos capas para el control de la diferenciación ASC

Este sistema modelo se inicia a partir de un gel de fibrina-miofibroblastos poblado que se puede utilizar para estudiar colágeno endógeno (re) organización en tiempo real de una manera no destructiva. El modelo de sistema es muy sintonizable, ya que se puede utilizar con diferentes fuentes de células, aditivos de medio, y se puede adaptar fácilmente a las necesidades específicas.

Ingeniería fibrina basado en construcciones de tejido de miofibroblastos y de aplicación de las restricciones y la tensión para inducir la organización de células y colágeno (Re)

Implantación de un biograft para tratar el infarto de miocardio inducido por ligadura de LAD en un modelo de roedor ha requerido convencionalmente dos cirugías a corazón abierto. Con el fin de reducir la mortalidad y proporcionar las condiciones óptimas para la fijación de biomatrices sólidos gelatinosos y asociados con las células, se han desarrollado procedimientos mínimamente invasivos.

Terapia basada en células de la insuficiencia cardiaca en rata: Doble toracotomía para infarto de miocardio y epicardio implantación de células y Biomatrix

Este protocolo tiene como objetivo aliviar la limitación del injerto celular deficiente para el tratamiento con células madre de infartos de miocardio mediante el uso de un sistema de hidrogel y un pegamento a base de fibrina. Con este enfoque, se puede mantener el contacto célula con tejido después del infarto, aumentando el potencial terapéutico de los agentes beneficiosos en el sitio de la lesión.

Un hidrogel Construct y fibrina enfoque basado Pegamento para ofrecer Terapéutica en un infarto de miocardio modelo murino.

Este protocolo describe la descelularización completa del miocardio humano conservando sus componentes de matriz extracelular. Tratamiento posterior de los resultados de la matriz extracelular en la producción de micropartículas y un hidrogel de uno mismo-montaje de citoprotectores.

Procesamiento de tejido cardiaco humano hacia la matriz extracelular autoensamblada hidrogel para aplicaciones In Vivo y In Vitro

Aquí presentamos un método rápido, fácil y de bajo costo para la fabricación de moldes de polidimetilsiloxano personalizadas que pueden utilizarse para la producción de tejidos de ingeniería base de hidrogel con geometrías complejas. Asimismo, se describen los resultados de evaluaciones mecánicas e histológicos realizadas en ingeniería tejidos cardiacos producidos mediante esta técnica.

Custom diseñado moldes de cultivo de tejidos de maestros grabado a láser

La terapia basada en células madre ha surgido como una estrategia eficiente para reparar los tejidos cardíacos lesionados después del infarto de miocardio. Proporcionamos una aplicación in vivo óptima para el trasplante de células madre utilizando hidrogeles de gelatina que son capaces de ser enzimáticamente cruzados.

Trasplante intramiocardio de hidrogeles inyectables msc-loading después de infarto de miocardio en un modelo murino

El objetivo de este protocolo es explicar y demostrar el desarrollo de un modelo microfluídico tridimensional (3D) de tejido cardíaco humano altamente alineado, compuesto por cardiomiocitos derivados de células madre co-cultivados con fibroblastos cardíacos (CF) dentro de un hidrogel biomimético a base de colágeno, para aplicaciones en ingeniería de tejido cardíaco, detección de fármacos y modelado de enfermedades.

Desarrollo de tejido cardíaco humano organizado en 3D dentro de una plataforma microfluídica

Se presenta un método reproducible para generar tejidos miocárdicos en 3D combinando andamios de escritura por electrohilatura por fusión (MEW), policaprolactona (PCL) e hidrogeles de fibrina con cardiomiocitos y fibroblastos derivados de hiPSC. Esta técnica ofrece un control preciso sobre la arquitectura del andamio y se puede aplicar en pruebas preclínicas de medicamentos y modelado de enfermedades cardíacas.

Generación de tejido miocárdico humano en 3D mediante escritura por electrohilado de fusión de andamios de policaprolactona y células cardíacas derivadas de hiPSC

Aprende a encapsular cardiomiocitos de rata neonatal en hidrogel de fibrina para ingeniería de tejido cardíaco. Este método permite evaluar la funcionalidad del miocardio y desarrollar modelos in vitro para investigación cardiaca.

La encapsulación de los cardiomiocitos en un hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos cardíacos

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