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DOI: 10.3791/3395-v
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This study focuses on the quantitative measurement of gene regulatory activities of cis-regulatory elements (CREs) during Drosophila melanogaster metamorphic development. The methods involve generating transgenic lines with reporter transgenes to analyze gene expression patterns.
La variación fenotípica de rasgos puede ser consecuencia de mutaciones en cis-elemento regulador (CRE) secuencias de patrones genéticos que controlan la expresión. Métodos derivados de su uso en Drosophila melanogaster cuantitativamente se puede comparar los niveles de la distribución espacial y temporal de la expresión génica mediada por la modificación o naturales variantes CRE.
El objetivo general de este procedimiento es medir cuantitativamente las actividades reguladoras de los genes de los elementos reguladores de CIS o CRE activos durante el desarrollo gastrometamórfico de Drosophila melan. Comience con métodos de integración específicos del sitio para generar líneas de CRE incorporadas transgénicamente como transgenes reporteros. Usando un microscopio estereoscópico, obtenga especímenes transgénicos de la etapa de desarrollo correcta.
Retire las muestras del pub exterior y móntelas en un microscopio de vidrio. Proceda a registrar el nivel y el patrón de expresión de la proteína reportera fluorescente en muestras de montaje completo mediante análisis microscópico confocal. Por último, cuantifique el nivel de expresión de la proteína reportera fluorescente para las imágenes confocales grabadas utilizando la herramienta de software Image J.
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