Murino linfáticos superficiales Cirugía de los ganglios

El objetivo general de este procedimiento es extirpar quirúrgicamente los ganglios linfáticos de un ratón anestesiado. Esto se logra localizando primero los ganglios linfáticos. Se extraen los ganglios linfáticos y luego se cierra la incisión.

Finalmente, se puede obtener una suspensión de una sola célula para el análisis experimental. En última instancia, las poblaciones de linfocitos viables pueden evaluarse mediante citometría de flujo. La demostración visual de esta técnica es fundamental, ya que la localización y la extirpación de los ganglios linfáticos deben observarse para dominarlos.

Después de anestesiar al ratón, aplique ungüento para los ojos, inyecte buprenorfina y confirme la sedación con un pellizco en los dedos de los pies, luego gire el ratón de lado. Primero, localice el ganglio linfático braquial y luego raspe la región que se va a diseccionar. Después de cepillar los pelos sueltos, aplique un desinfectante en la región y luego haga una pequeña incisión de unos cinco milímetros en la parte posterior de los cuatro Legg.

Use dos pares de pinzas para estirar la incisión hasta que se pueda ver el ganglio linfático braquial, que puede parecer grisáceo o más oscuro que la grasa circundante. A continuación, pellizque la fascia que cubre el ganglio linfático con un par de pinzas. Coloque el segundo par de pinzas lo más abajo posible del ganglio linfático y tire ligeramente de la membrana sin romper el tejido circundante.

Luego, use el primer par de pinzas para romper la fascia y extirpar el ganglio linfático. Si el ganglio linfático se ha extraído con éxito, aparecerá una mancha de sangre donde se encontraba anteriormente el ganglio linfático. Coloque el ganglio linfático extirpado en una solución isotónica si se hunde, esto confirmará que el tejido extraído es un ganglio linfático, no grasa.

A continuación, verifique que no haya pelos en la herida y cierre la incisión pegando los dos interiores de la piel juntos y grapándolos con una o dos pinzas, dependiendo del tamaño de la incisión. Ahora localice un ganglio linfático inguinal y afeite la región que se va a diseccionar. Después de cepillar los pelos sueltos, aplique un desinfectante en la región y luego haga una pequeña incisión de unos cinco milímetros por encima de la pata trasera cerca del abdomen.

Después de abrir la incisión con dos pares de pinzas como se muestra para el ganglio linfático braquial, identifique el ganglio linfático inguinal ubicado dentro del tejido graso circundante. A continuación, extraiga el ganglio linfático con los dos pares de pinzas como se acaba de demostrar. Una vez más, confirme la recolección exitosa del ganglio linfático observando la mancha de sangre que aparece donde se encontraba anteriormente el ganglio linfático y luego coloque el ganglio linfático inguinal en un recipiente separado de solución isotónica.

Después de que se hayan extraído todos los ganglios linfáticos, coloque al ratón en una jaula y agregue comida húmeda para que el ratón pueda alimentarse fácilmente. Después de la cirugía, unas seis u ocho horas después, revise el ratón para asegurarse de que no experimente dolor. Observe cuidadosamente que la postura, la interacción de la marcha con el congénere y la apariencia del pelaje sean similares a las de un ratón sano normal.

Finalmente, disocie el ganglio linfático presionándolo contra portaobjetos esmerilados en una placa de Petri y luego transfiéralo a un tubo para obtener una suspensión de una sola célula. Después de teñir las células para los antígenos de superficie celular de interés, analice las células mediante citometría de flujo. Aquí, la muestra hacia adelante y hacia los lados, se muestran diagramas de dispersión para los ganglios linfáticos recolectados de animales anestesiados o sacrificados.

Los perfiles y porcentajes de células en las puertas de linfocitos vivos de los dos diagramas de dispersión son los mismos. Demostrando que la cirugía de ganglios linfáticos es una técnica adecuada para recolectar células: Una vez dominada la cirugía de ganglios linfáticos, se puede realizar en cinco a 10 minutos por ratón si se realiza correctamente.