Name: حيوية قبل المشبكي الدوبامين في الدماغ العقدة المخططة مع شرائح Voltammetry دائرى سريع التفحص (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: اكتشف ديناميكيات الدوبامين قبل المشبكي في شرائح الدماغ العقدة المخططة باستخدام الفولتاميترية الدائرية السريعة. يوضح هذا البروتوكول كيفية قياس إطلاق وامتصاص الدوبامين في الوقت الفعلي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

التمويل المقدم من قبل المعهد الوطني لتعاطي الكحول والإدمان على الكحول (NIAAA ؛ AA - 016967 وAA016967 01S1 ؛ TAM) ، جامعة واين ستيت بدء الأموال ، وجامعة واين ستيت برنامج منح البحوث. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل وجهة النظر الرسمية للNIAAA أو المعاهد الوطنية للصحة.

<ol><li>Pike, C. M., Grabner, C. P., Harkins, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+Amperometric+Electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Fabrication of Amperometric Electrodes.</a> J. Vis. Exp. (27), e1040-e1040 (2009).</li>
<li>Lack, A. K., Diaz, M. R., Chappell, A., DuBois, D. W., McCool, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ethanol+and+withdrawal+differentially+modulate+pre-+and+postsynaptic+function+at+glutamatergic+synapses+in+rat+basolateral+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropyhysiol%22%5BJournal%5D)">Chronic ethanol and withdrawal differentially modulate pre- and postsynaptic function at glutamatergic synapses in rat basolateral amygdala.</a> J. Neuropyhysiol. 98, 3185-3196 (2007).</li>
<li>John, C. E., Jones, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltammetric+characterization+of+the+effect+of+monoamine+uptake+inhibitors+and+release+on+dopamine+and+serotonin+uptake+in+mouse+caudate-putamen+and+substantia+nigra+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Voltammetric characterization of the effect of monoamine uptake inhibitors and release on dopamine and serotonin uptake in mouse caudate-putamen and substantia nigra slices.</a> Neuropharmacology. 52, 1596-1605 (2007).</li>
<li>Wightman, R. M., Amatore, C., Engstrom, R. C., Hale, P. D., Kistensen, E. W., Kuhr, W. G., May, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+characterization+of+dopamine+overflow+and+uptake+in+the+rat+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Real-time characterization of dopamine overflow and uptake in the rat striatum.</a> Neuroscience. 25, 513-523 (1988).</li>
<li>Wightman, R. M., Zimmerman, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+dopamine+extracellular+concentration+in+rat+striatum+by+impulse+flow+and+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res.+Brain.+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Control of dopamine extracellular concentration in rat striatum by impulse flow and uptake.</a> Brain. Res. Brain. Res. Rev. 15, 135-144 (1990).</li>
<li>Jones, S. R., Garris, P. A., Kilts, C. D., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+dopamine+uptake+in+the+basolateral+amygdaloid+nucleus%2C+caudate-putamen%2C+and+nucleus+accumbens+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Comparison of dopamine uptake in the basolateral amygdaloid nucleus, caudate-putamen, and nucleus accumbens of the rat.</a> J. Neurochem. 64, 2581-2589 (1995).</li>
<li>Michael, D. J., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemical+monitoring+of+biogenic+amine+neurotransmission+in+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Biomed.+Anal%22%5BJournal%5D)">Electrochemical monitoring of biogenic amine neurotransmission in real time.</a> J. Pharm. Biomed. Anal. 19, 33-46 (1999).</li>
<li>Pajski, M. L., Venton, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+release+evoked+by+short+electrical+stimulations+in+striatal+brain+slices+is+primarily+activity+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22A.C.S.+Chem.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Adenosine release evoked by short electrical stimulations in striatal brain slices is primarily activity dependent.</a> A.C.S. Chem. Neurosci. 1, 775-787 (2010).</li>
<li>Sanford, A. L., Morton, S. W., Whitehouse, K. L., Oara, H. M., Lugo-Morales, L. Z., Roberts, J. G., Sombers, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltammetric+detection+of+hydrogen+peroxide+at+carbon+fiber+microelectrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Voltammetric detection of hydrogen peroxide at carbon fiber microelectrodes.</a> Anal. Chem. 82, 5205-5210 (2010).</li>
<li>Park, J., Kile, B. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+voltammetric+monitoring+of+norepinephrine+release+in+the+rat+ventral+bed+nucleus+of+the+stria+terminalis+and+anteroventral+thalamic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo voltammetric monitoring of norepinephrine release in the rat ventral bed nucleus of the stria terminalis and anteroventral thalamic nucleus.</a> Eur. J. Neurosci. 30, 2121-2133 (2009).</li>
<li>Hashemi, P., Dankoski, E. C., Petrovic, J., Keithley, R. B., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltammetric+detection+of+5-hydroxytryptamine+release+in+the+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Voltammetric detection of 5-hydroxytryptamine release in the rat brain.</a> Anal. Chem. 81, 9462-9471 (2009).</li>
<li>Borue, X., Cooper, S., Hirsh, J., Condron, B., Venton, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+serotonin+release+and+clearnece+in+drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroscience.+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of serotonin release and clearnece in drosophila.</a> J. Neuroscience. Methods. 179, 300-308 (2009).</li>
<li>Vickrey, T. L., Condron, B., Venton, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+endogenous+dopamine+changes+in+drosophila+melanogaster+using+fast-scan+cyclic+voltammetry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection of endogenous dopamine changes in drosophila melanogaster using fast-scan cyclic voltammetry.</a> Anal. Chem. 81, 9306-9313 (2009).</li>
<li>Makos, M. A., Han, K. A., Heien, M. L., Ewing, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+in+vivo+electrochemistry+to+study+the+physiological+effects+of+cocaine+and+other+stimulants+on+the+drosophila+melanogaster+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22A.C.S.+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Using in vivo electrochemistry to study the physiological effects of cocaine and other stimulants on the drosophila melanogaster dopamine transporter.</a> A.C.S. Chem Neurosci. 1, 74-83 (2009).</li>
<li>Budygin, E. A., John, C. E., Mateo, Y., Daunais, J. B., Friedman, D. P., Grant, K. A., Jones, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ethanol+exposure+alters+presynaptic+dopamine+function+in+striatum+of+monkeys%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Chronic ethanol exposure alters presynaptic dopamine function in striatum of monkeys: a preliminary study.</a> Synapse. 50, 266-268 (2003).</li>
<li>Jones, S. R., Gainetdinov, R. R., Jaber, M., Giros, B., Wightman, R. M., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+neuronal+plasticity+in+response+to+inactivation+of+the+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Profound neuronal plasticity in response to inactivation of the dopamine transporter.</a> PNAS. 95, 4029-4034 (1998).</li>
<li>Kennedy, R. T., Jones, S. R., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+observation+of+dopamine+autoreceptor+effects+in+rat+striatal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Dynamic observation of dopamine autoreceptor effects in rat striatal slices.</a> J. Neurochem. 59, 449-445 (1992).</li>
<li>Rice, M. E., Cragg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotine+amplifies+reward-related+dopamine+signals+in+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Nicotine amplifies reward-related dopamine signals in striatum.</a> Nat. Neurosci. 7, 583-584 (2004).</li>
<li>Zhang, L., Doyon, W. M., Clark, J. J., Phillips, P. E., Dani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controls+of+tonic+and+phasic+dopamine+transmission+in+the+dorsal+and+ventral%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Controls of tonic and phasic dopamine transmission in the dorsal and ventral.</a> 76, 396-404 (2009).</li>
<li>Paredes, D., Grnaholm, A. C., Bickford, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+NGF+and+BDNF+on+baseline+glutamate+and+dopamine+release+in+the+hippocampal+formation+of+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of NGF and BDNF on baseline glutamate and dopamine release in the hippocampal formation of the adult rat.</a> Brain. Res. 11141, 56-64 (2007).</li>
<li>Goggi, J., Puller, I. A., Carney, S. L., Bradford, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signalling+pathways+involved+in+the+short-term+potentiation+of+dopamine+release+by+BDNF%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res%22%5BJournal%5D)">Signalling pathways involved in the short-term potentiation of dopamine release by BDNF.</a> Brain. Res. 968, 156-161 (2003).</li>
<li>Cheer, J. F., Wassum, K. M., Heien, M. L., Phillips, P. E., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoids+enhance+subsecond+doapmine+relese+in+the+nucleus+accumbens+of+awake+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cannabinoids enhance subsecond doapmine relese in the nucleus accumbens of awake rats.</a> J. Neurosci. 24, 4393-4400 (2004).</li>
<li>Phillips, P. E., Stuber, G. D., Heien, M. L., Wightman, R. M., Carelli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subsecond+dopamine+release+promotes+cocaine+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Subsecond dopamine release promotes cocaine seeking.</a> Nature. 422, 614-618 (2003).</li>
<li>Robinson, D. L., Heien, M. L., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+dopamine+concentration+transients+increases+in+dorsal+and+ventral+striatum+of+male+rats+duing+introduction+of+conspecifics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Frequency of dopamine concentration transients increases in dorsal and ventral striatum of male rats duing introduction of conspecifics.</a> J. Neurosci. 22, 10477-10486 (2002).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

بروتوكول المعروضة هنا يوضح كيفية إعداد واستخدام شرائح دماغ الفأر الاكليلية للتجارب FSCV. على الرغم من أن هذا الأسلوب هو الحصول على ومحددة لقياس ديناميكية الدوبامين ، الناقلات العصبية الأخرى مثل الأدينوزين ، وقد تم رصد بيروكسيد الهيدروجين ، بافراز ، والسيروتونين في الجسم الحي أو في المختبر مع FSCV 3 ، 8 -- 11. ويمكن استخدام FSCV لرصد بعض هذه neurochemicals غيرها من التعديلات البسيطة للالموجي تطبيقها على مسرى العمل 3 و 11. لأن العديد من هذه ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> عدد CAS </td></tr><tr><td width="274"> الكاشف </td><td></td><td></td></tr><tr><td width="274"> كلوريد البوتاسيوم </td><td> الصياد </td><td width="142" valign="top"> 7447407 </td></tr><tr><td width="274"> كلوريد الصوديوم </td><td> EMD كيماويات </td><td width="142" valign="top"> 7647145 </td></tr><tr><td width="274"> كلوريد المغنيسيوم </td><td width="194" valign="top"> الصياد </td><td width="142" valign="top"> 7791186 </td></tr><tr><td width="274"> كلوريد الكالسيوم </td><td width="194" valign="top"> الصياد </td><td width="142" valign="top"> 10035048 </td></tr><tr><td width="274"> بيكربونات الصوديوم </td><td width="194" valign="top"> EMD كيماويات </td><td width="142" valign="top"> 144558 </td></tr><tr><td width="274"> فوسفات الصوديوم ، ثنائي القاعدة </td><td width="194" valign="top"> EMD الكيميائيةق </td><td width="142" valign="top"> 7558794 </td></tr><tr><td width="274"> D - غلوكوز </td><td width="194" valign="top"> الصياد </td><td width="142" valign="top"> 50997 </td></tr><tr><td width="274"> حمض الاسكوربيك </td><td width="194" valign="top"> الصياد </td><td width="142" valign="top"> 50817 </td></tr><tr><td width="274"> السكروز </td><td width="194" valign="top"> الصياد </td><td> 57501 </td></tr><tr><td width="274">&nbsp;</td><td width="194" valign="top">&nbsp;</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td width="274"> المواد </td><td width="194" valign="top"> بائع </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td width="274"> ألياف الكربون </td><td> Goodfellow أكدل ، والسلطة الفلسطينية </td><td></td></tr><tr><td width="274"> الزجاج الشعرية </td><td> نظم AM Carlsborg WA. </td><td> 602000 </td></tr><tr><td width="274"> أسلاك الفضة </td><td> A -م نظم Carlsborg WA. </td><td> 787000 </td></tr><tr><td width="274"> التنغستن القطب حفز </td><td> البلاستيك واحد ، رونوك ، VA </td><td></td></tr><tr><td width="274"> سلك البلاتين </td><td></td><td></td></tr><tr><td width="274"> تؤدي الأسلاك </td><td> سكوايرز إلكترونيات ، كورنيليوس ، OR </td><td></td></tr><tr><td width="274"> وكتايت اصقة الفورية 404 </td><td> Hankal شركة روكي هيل CT. </td><td></td></tr><tr><td width="274"> موس </td><td> العالم الآلات الدقيقة شركة فلوريدا. </td><td></td></tr><tr><td width="274"> دينار بحريني العمود الفقري إبرة </td><td> أنظمة الطبية دينار بحريني ، Franlin بحيرة ، NJ </td><td> REF 405234 </td></tr><tr><td width="274"> بليد الجراحية </td><td> ريشة السلامة الشائكة المحدودة. اليابان </td><td></td></tr><tr><td width="274"></td><td></td><td></td></tr><tr><td width="274"> البرنامج </td><td width="194" valiGN = &quot;أعلى&quot;&gt; بائع </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td width="274"> TH البرمجيات </td><td> وكالة الفضاء الأوروبية ، وشركة تشيلمسفورد ، MA </td><td></td></tr><tr><td width="274"> صك </td><td width="194" valign="top"> بائع </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td width="274"> غمر غرفة تسجيل </td><td> عرف العلم ، ودنفر ، أول أكسيد الكربون </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Neorolog التحفيز المعزل </td><td> Digitmeter ، هيرتفوردشاير ، إنجلترا </td><td></td></tr><tr><td width="274"> درجة الحرارة التلقائي تحكم </td><td> شركة وارنر الصك </td><td></td></tr><tr><td width="274"> مجهر (SZX7) </td><td> اوليمبوس </td><td></td></tr><tr><td width="274"> مجهر </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Vibratome نظام sectioning 3000 </td><td> سانت لوهو ، MO. </td><td></td></tr><tr><td width="274"> مضخة نضح </td><td> مارلو واتسون المحدودة ، فالماوث كورنوال -- إنجلترا </td><td> H110708 </td></tr><tr><td width="274"> Micropipette مجتذب </td><td> Narishige ، طوكيو ، اليابان </td><td></td></tr><tr><td width="274"> ChemClamp potentiostat </td><td> الشركات داغان ، مينيابوليس ، مينيسوتا. </td><td></td></tr></tbody></table>

حيوية قبل المشبكي الدوبامين في الدماغ العقدة المخططة مع شرائح voltammetry دائرى سريع التفحص

Presynaptic Dopamine Dynamics in Striatal Brain Slices with Fast-scan Cyclic Voltammetry

وقد تركزت أبحاث مستفيضة حول الدوبامين ناقل عصبي نظرا لأهميته في آلية عمل لتعاطي المخدرات (الكوكايين والأمفيتامين مثلا) ، والدور الذي تلعبه في الأمراض النفسية (مثل الفصام واضطراب نقص الانتباه فرط النشاط) ، ومشاركتها في التنكسية اضطرابات مثل مرض باركنسون ومرض هنتنغتون. في ظل الظروف الفسيولوجية الطبيعية ، ويعرف الدوبامين لتنظيم النشاط الحركي ، والإدراك ، والتعلم ، وتؤثر العاطفي ، والغدد الصم العصبية إفراز الهرمونات. واحدة من أكبر كثافة من الخلايا العصبية الدوبامين هو ضمن المخطط ، والتي يمكن تقسيمها في المنطقتين تشريحي عصبي متميزة تعرف باسم النواة المتكئة وputamen المذنبة. الهدف هو توضيح بروتوكول عام لشريحة voltammetry دوري سريع الفحص (FSCV) ضمن المخطط الماوس. FSCV هي تقنية كهربائية محددة جيدا وإتاحة الفرصة لقياس امتصاص الدوبامين والافراج في الوقت الحقيقي في دiscrete مناطق الدماغ. وتستخدم ألياف الكربون microelectrodes (قطرها ميكرون 7 ~) في FSCV للكشف عن الأكسدة الدوبامين. ميزة استخدام FSCV التحليلية للكشف عن الدوبامين هو قرارها الزمنية معززة من 100 ميلي ثانية ، والقرار المكاني لأقل من عشرة ميكرون ، وتوفير معلومات تكميلية لmicrodialysis في الجسم الحي.

مسح سريع باستخدام voltammetry دوري لقياس أثار كهربائيا ديناميات الدوبامين في الدماغ قبل المشبكي في شرائح الجسم المخطط.

حيوية قبل المشبكي الدوبامين في الدماغ العقدة المخططة مع شرائح Voltammetry دائرى سريع التفحص

ركزت أبحاث مستفيضة على الناقل العصبي دوبامين نظراً لأهميته في آلية عمل العقاقير المسببة للإدمان (على سبيل المثال، الكوكايين و...

الهدف العام من هذا الإجراء هو توضيح بروتوكول عام للمسح السريع لشرائح القياس البعيد لـ V الدوري. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تحضير أنسجة الدماغ للتقطيع الإكليلي، ثم يتم وضع الأقطاب الكهربائية على المنطقة المحددة من الدماغ محل الاهتمام.تتمثل الخطوة التالية في تسليط جهد كهربائي على شكل موجة مثلثية عبر القطب الكهربائي للكشف عن الدوبامين. وأخيراً، يتم تطبيق عامل دوائي مستهدف على شريحة الدماغ ومراقبة تأثيره على ديناميكيات الدوبامين قبل التشابكية. وفي نهاية المطاف، يوضح هذا البروتوكول التغيرات في ديناميكيات الدوبامين قبل التشابكية، مثل تحفيز إفراز الدوبامين ومعدلات استيعابه عبر قياس الفولتية الحلقي سريع المسح.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر رؤية حول ديناميكيات الدوبامين قبل التشابكية، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضاً على أنظمة أخرى، بما في ذلك حيوانات ونواقل عصبية أخرى، مثل الجرذان وذباب الفاكهة، والسيروتونين والنورإبينفرين على التوالي؛ حيث سيقوم فرانسيس مينا، وMEA خالد، وإيرين أو، طلاب الدراسات العليا في مختبري، بتوضيح هذا الإجراء. لبدء هذا الإجراء، ووفقاً للمخطوطة المرفقة، يتم تحضير ثلاثة أنواع من محاليل السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي: محلول السكروز A-C-S-F-A-C-S-F للتسجيلات الفولتمترية، ومحلول A CSF المعدل لمعايرة القطب الكهربائي. بعد ذلك، يتم نقل 10 milliliters من محلول السكروز A CSF إلى دورق صغير ووضعه في دلو ثلج. ثم يوضع لاصق Loctite الفوري في دلو الثلج.بعد ذلك، قم بتجهيز شفرة حلاقة والأدوات اللازمة للتشريح، مثل الملاقط والملعقة والمقص، عن طريق مسحها بمسحة كحولية. ثم قم بالتضحية بالفأر عن طريق قطع الرأس واستخرج الدماغ بسرعة. ضع الدماغ في دورق يحتوي على محلول سكروز مبرد بالثلج، A CSF لمدة 10 دقائق تقريباً.في هذه الأثناء، قم بتجهيز جهاز VIBRAM للتقطيع. ضع بعض الثلج المجروش في حمام العينات. ثم ضع حجرة العينة في جهاز Vibram وثبتها بإحكام.أضف المزيد من الثلج حول غرفة العينة لملء الفراغات، وتأكد من عدم دخول أي ثلج إلى داخل الغرفة. بعد ذلك، ضع شفرة حلاقة نظيفة في حامل الشفرات. ثم املأ غرفة العينة بسائل sucrose A CSF مبرد بالثلج.بعد ذلك، صب كمية من سائل sucrose A CSF البارد على قطعة من المناديل الورقية موضوعة فوق طبق بتري مقلوب. انقل دماغ الفأر الذي تم تشريحه حديثاً إليها باستخدام ملقط. ثم قم بإزالة المخيخ عن طريق القطع على طول المحور الإنسي الجانبي باستخدام شفرة حلاقة.يؤدي ذلك إلى تكوين قاعدة مسطحة يمكن تثبيتها على منصة الاهتزاز. بعد ذلك، أضف قطرة من لاصق Loctite على منصة العينة. قم بتثبيت الطرف المسطح للدماغ المُجهز على المنصة فوراً، وحافظ على وضعيته قائمة قدر الإمكان.بعد ذلك، ضع المنصة في غرفة العينة وأحكم ربط المسمار. تأكد من غمر الدماغ تماماً في sucrose A CSF داخل الغرفة. بعد ذلك، اضبط المنصة باستخدام أداة التحكم بحيث تتماشى شفرة الحلاقة مع الجزء العلوي من الدماغ.يتم الحصول على المعلمات المثالية للهزاز عن طريق ضبط التردد والسرعة على المستوى المنخفض. بعد ذلك، يتم ضبط سمك الشريحة على 400 micrometers. وعادةً لا تحتوي الشرائح القليلة الأولى على الجسم المخطط.كرر عملية التقطيع حتى يتم الحصول على الشرائح التي تحتوي على المخطط. وبمجرد الوصول إلى منطقة stri AAL، استخدم فرشاة رسم لرفع الشريحة ووضعها في دورق يحتوي على CSF مؤكسج في درجة حرارة الغرفة.عادةً، يمكن الحصول على ثلاث إلى أربع شرائح تحتوي على المعقد المخطط (striatal complex) بحيث تشمل النواة المذنبة والputamen والنواة المتكئة. اترك الشرائح لتتأقلم في A CSF مع فقاعات من 95%O2 5%CO2 في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل البدء في التجربة. لبدء هذا الإجراء، قم بتوصيل الأنابيب بغرفة التسجيل المغمورة.بعد ذلك، يتم ضخ A CSF المؤكسج في درجة حرارة الغرفة بمعدل 1 mL/min. يتم ضبط متحكم درجة الحرارة على 32 °C بعد أن يملأ A CSF حامل الشرائح المصمم خصيصاً. ثم تتم إزالة أي فقاعات هواء من تحت الشبكة باستخدام سرنجة إبرية.قم بتوليد ضغط سلبي في أنابيب التصريف باستخدام حقنة لبدء التدفق من أجل التحكم في فائض المحلول المنظم. ضع منديل كيم (Kim wipe) على حافة حامل الشريحة ليعمل كفتيلة. ثم انقل شريحة إلى حامل الشريحة في غرفة التسجيل، والتي يتم ترويتها باستمرار بسائل CSF مؤكسج في درجة حرارة الغرفة.اغمر قطب الفضة/كلوريد الفضة المرجعي في حامل الشريحة وقم بتوصيله بمرحلة الرأس باستخدام مشبك تمساح. ثبّت القطب الكهربائي الدقيق من ألياف الكربون في الملاعب الدقيق وقم بتوصيله بمرحلة الرأس باستخدام مشبك تمساح. بعد ذلك، قم بخفض قطب التحفيز التنجستني والقطب الكهربائي الدقيق من ألياف الكربون حتى يصلا إلى سطح شريحة دماغ السلمون.سيتم استخدام القطب المحفز لإيصال نبضة واحدة أو نبضات متعددة من التحفيز الكهربائي إلى الشريحة لاستثارة إطلاق الناقل العصبي، وذلك لقياس الدوبامين المستثار كهربائياً باستخدام قياس الفولتية الحلقي سريع المسح أو FSCV، حيث يتم تطبيق جهد بشكل موجة مثلثية على القطب. يتم تثبيت جهد القطب الدقيق المصنوع من ألياف الكربون عند -0.4 فولت، ثم رفعه تدريجياً وصولاً إلى الحد الموجب البالغ 1.2 فولت.ثم قم بخفض الجهد مرة أخرى إلى -0.4 فولت بمعدل مسح قدره 400 فولت في الثانية. قم بتحفيز الشريحة كل خمس دقائق وقم بإجراء القياس الحجمي لـ dopamine FLX الناتج لمدة 15 ثانية في كل مرة، وذلك بعد الحصول على ثلاث تسجيلات على الأقل لإفراز الدوبامين المستقر الناتج عن التحفيز الكهربائي، والتي تُعرف بأن الفرق بين ارتفاعات القمم فيها أقل من 10%.انتقل إلى تروية الشريحة بسائل CSF يحتوي على العامل الدوائي المطلوب بمعدل تدفق قدره 1 mL/min لمدة 30 دقيقة لتحقيق أقصى تأثير مشابه لتسجيل خط الأساس. قم بقياس إطلاق الدوبامين المحفز كهربائيًا كل خمس دقائق أثناء التروية الدوائية. يمثل الشكل A مثالاً لقياس إطلاق الدوبامين المستحث كهربائيًا باستخدام تقنية FSCV، وذلك بعد تحفيز بنبضة واحدة في النواة المذنبة والبطانة.يوضح الشكل B مخططاً ثلاثي الأبعاد بالألوان الزائفة يدمج المعلومات المستخلصة من كل من مخططات التيار مقابل الزمن ومخطط الفولتاميتري الحلقي. وبالمثل، يوضح الشكلان A و C تحرر الدوبامين الناتج عن نبضة تحفيز كهربائي واحدة في نواة الأكومبانس (القشرة والقشرة الخارجية) على التوالي، كما تظهر المخططات ثلاثية الأبعاد بالألوان الزائفة لنواة الأكومبانس (القشرة والقشرة الخارجية) في الشكلين B و D على التوالي. وتظهر هنا المخططات التمثيلية بعد معالجة الشريحة بعامل دوائي لمدة 30 دقيقة، تلتها نبضات تحفيز أحادية لتحفيز تحرر الدوبامين في النواة المخططة (المنطقة المذيلة والبطامة).العوامل المستخدمة في التجارب هي كينول، وميثامفيتامين، والعامل العصبي المشتق من الدماغ. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير شرائح دماغية إكليلية للفئران للحصول على ديناميكيات الدوبامين قبل التشابكية وقياسها باستخدام تقنيتي fast و likely will telemetry.

presynaptic-dopamine-dynamics-striatal-brain-slices-with-fast-scan

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

وسائل جديدة لقياس العصبي الدوبامين بصريا باستخدام النظير الفلورسنت.

متصور النسخة الدوبامين في محطات قبل المشبكي فردية مع FFNs

تقنية amperometric يقيس الإفراج الدوبامين من خلية واحدة عن طريق الكشف عن الأكسدة الحالية التي تنتجها أكسدة الدوبامين عفوية. في وقت واحد المشبك الجهد ومنهجية amperometry الكشف عن العلاقة بين الآلية "النشاط" الشاملة لنقل الدوبامين والدور التنظيمي لهذا النشاط على النقل العكسي للدوبامين.

واحدة من خلية قياس إفراز الدوبامين في وقت واحد مع المشبك الجهد وAmperometry

يوضح هذا الفيديو زرع أقطاب كهربائية وقنية في فأر مخدر لقياس إفراز الدوبامين في النواة المتكئة باستخدام potentiostat وتسريب الأدوية لتعديل نشاط الدوبامين في المنطقة الستيقية البطنية.

مراقبة إطلاق الدوبامين في نموذج الفئران مع VTA دوبامين التلاعب مستقبلات الخلايا العصبية الدوبامين

تتوسط التقلبات السريعة في الدوبامين خارج الخلية (DA) في كل من معالجة المكافأة والسلوك المحفز في الثدييات. تصف هذه المخطوطة الاستخدام المشترك لقياس الفولتامين الدوري السريع (FSCV) وإعطاء الصبغة داخل الفم لتحديد كيفية تغيير الطعم للدوبامين السريع في الفئران المستيقظة التي تتحرك بحرية.

فحص السريع الدوبامين حيوية مع المسح الضوئي السريع Voltammetry دوري أثناء داخل الفم إدارة منبهة للذوق في الجرذان الصحوة

سريع المسح الضوئي فولتامتري دوري يمكن رصد في العصبي الدوبامين العصبي في سياق المخدرات، والمرض، والتلاعب التجريبية الأخرى. ويصف هذا العمل تنفيذ QNsim1.0، وهو برنامج لنموذج استجابات الدوبامين حفز كهربائيا وفقا لنموذج نيوروبيبيولوجيكال الكمي لتحديد تقديرات الإفراج الدوبامين وديناميكيات إعادة الامتصاص.

النمذجة سريع مسح بيانات فولتامتري دوري من تحفيز الدوبامين كهربائيا نقل البيانات باستخدام QNsim1.0

الهدف من هذا البروتوكول هو التعامل مباشرة مستقبلات منطقة tegmental البطني لدراسة مساهمتها في إطلاق الدوبامين تحت الثانوي.

ضخ جنبا إلى جنب والتحفيز مع المسح السريع قياس فولتامتري الحلقي (CIS-FSCV) لتقييم تنظيم مستقبلات منطقة تيغمنتال البطنية من الدوبامين التدريجي

هذا التقرير يوضح تقنية لعزل الخلايا العصبية ميكانيكية قابلة للحياة الفردية الاحتفاظ حبات قبل المشبكي المرفقة. Vibrodissociated الخلايا العصبية لديها مزايا الإنتاج السريع ، ومراقبة الدوائية ممتازة وتحسين الفضاء المشبك دون تأثير من الخلايا المجاورة. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتصوير وتسجيل العناصر متشابك التصحيح ، المشبك.

Vibrodissociation من الخلايا العصبية من الدماغ القوارض شرائح لدراسة نقل صورة متشابك ومحطات قبل المشبكي

وهناك طريقة قوية لدراسة الانهيارات العصبية ، أي الحجم ثابتة رشقات نارية النشاط المكانية والزمانية ، مما يدل على دينامية حالة حرجة في القشرة. الانهيارات الثلجية تظهر تلقائيا في وضع طبقات القشرة السطحية للمثقف الذي يسمح على المدى الطويل قياسات للنشاط متكامل مع المصفوفات مستو متعددة القطب (MEA) في ظل الظروف تسيطر على وجه التحديد.

تسجيلات صفيف متعدد القطب من الانهيارات الجليدية الخلايا العصبية في الثقافات عضوي النمط

ويمكن وصف واجهة قطب من الأقطاب الكهربائية الأنسجة العصبية مع تسجيل الطيفي المعاوقة الكهربائية (EIS) ودوري voltammetry (السيرة الذاتية). تطبيق الجهد قدرة تسجيل يتحامل التغييرات خصائص الكهروكيميائية واجهة قطب النسيج وتحسين يمكن. يتحامل التيار الكهربائي، EIS، السيرة الذاتية، والتسجيلات العصبية متكاملان.

يتحامل التيار الكهربائي، Voltammetry دوري، والتحليل الطيفي المعاوقة الكهربائية للواجهات العصبية

التسجيلات الزوجية عبارة عن تسجيلات متزامنة لمشبك تصحيح الخلية بأكملها من خليتين خليتين عصبيتين متصلتين متشابكيا ، مما يتيح التوصيف الفيزيولوجي الكهربي والدوائي الدقيق للمشابك بين الخلايا العصبية الفردية. نصف هنا المنهجية التفصيلية والمتطلبات لإنشاء هذه التقنية في مزارع شرائح الحصين العضوية في أي مختبر مجهز للفيزيولوجيا الكهربية.

تقرن تسجيلات خلية كاملة في عضوي شرائح الحصين

اكتشف ديناميكيات الدوبامين قبل المشبكي في شرائح الدماغ العقدة المخططة باستخدام الفولتاميترية الدائرية السريعة. يوضح هذا البروتوكول كيفية قياس إطلاق وامتصاص الدوبامين في الوقت الفعلي.

حيوية قبل المشبكي الدوبامين في الدماغ العقدة المخططة مع شرائح Voltammetry دائرى سريع التفحص

استكشف المزيد من الفيديوهات