El diagnóstico de tuberculosis pulmonar con el Xpert MTB / RIF prueba

El objetivo general de este procedimiento es detectar simultáneamente, en un plazo de dos horas, Mycobacterium tuberculosis y la resistencia a la rifampicina en esputo expulsado o en sedimentos de esputo concentrados. Comience con un protocolo sencillo y altamente eficaz de descontaminación de la muestra. Luego, transfiera cada muestra procesada a un cartucho desechable de uso único, experto en M-T-B-R-I-F, que contiene los reactivos para PCR y aloja el proceso de PCR.

Cargue los cartuchos en un sistema Gene Expert DX e inicie la PCR anidada ultra sensible HEMI para la detección simultánea de Mycobacterium tuberculosis y resistencia a la rifampicina. Finalmente, lea los resultados de la prueba y repórtelos al médico. El ensayo Expert MTPR está destinado para su uso con muestras de pacientes con sospecha clínica de tuberculosis pulmonar y que cumplen los criterios descritos en el texto de la compañía.

Téngase en cuenta que no debe utilizarse para monitorear los efectos de la terapia farmacológica. Crystal. Un técnico de mi laboratorio demostrará ahora el protocolo según el estándar dos de las normas internacionales para la atención de la tuberculosis. Recolecte dos muestras para examen bacteriológico de cada paciente sospechoso de tener tuberculosis pulmonar.

Asigne un módulo del sistema Gene Expert DX para cada muestra de prueba, etiquetando cada cartucho con el identificador de la muestra. A continuación, para cada ensayo de muestra, transfiera un mililitro de esputo a un tubo cónico de 15 mililitros con tapa de rosca, utilizando otra pipeta estéril de transferencia. Añada dos mililitros del reactivo de muestra M-T-B-R-I-F.

Cambie la tapa enérgicamente. Agite el tubo de 10 a 20 veces. Luego coloque el tubo en posición vertical durante cinco minutos a temperatura ambiente después de agitarlo enérgicamente.

Nuevamente, equilibre a temperatura ambiente durante 10 minutos. Verifique que todas las muestras estén ED sin grumos visibles de esputo. Primero, etiquete los cartuchos con el ID de la muestra de cada sedimento de esputo; a cada muestra de sedimento, añada 1,5 mililitros del reactivo para muestra M-T-B-R-I-F y transfiera 0,5 mililitros a un tubo cónico de 15 mililitros con tapa roscada. Reemplace la tapa, vortexee durante 30 segundos y coloque el tubo en posición vertical durante cinco minutos después de un segundo.

Agite por vórtex y coloque el tubo en posición vertical durante 10 minutos. Inspeccione las muestras licuadas para verificar la ausencia de grumos de esputo. Compare la etiqueta de los tubos con los cartuchos correspondientes.

No abra el cartucho hasta que esté listo para realizar la prueba y utilice el cartucho dentro de los 30 minutos posteriores a abrir la tapa. Con la pipeta estéril de transferencia, aspire la muestra licuada hasta que el menisco esté por encima de la marca mínima. Introduzca lentamente la muestra en el cartucho.

Cierre la tapa del cartucho. Inicie la prueba dentro de los 30 minutos posteriores a agregar la muestra al cartucho. Primero encienda la computadora y luego el instrumento sobre el escritorio.

Haga doble clic en el icono de Gene Expert DX. Inicie sesión en el software del sistema. Seleccione crear prueba para abrir el cuadro de diálogo de escaneo del código de barras del cartucho.

Luego escriba el ID de la muestra y escanee el código de barras en el cartucho. Cuando aparezca la ventana de creación de prueba, haga clic en iniciar prueba e ingrese la contraseña en el cuadro de diálogo. Ahora abra la puerta del módulo del instrumento y cargue el cartucho.

Cierre la puerta para comenzar la prueba. Cuando la luz verde se apague, la prueba habrá finalizado. Una vez que el sistema libere el cerrojo de la puerta, abra la puerta del módulo y retire el cartucho.

Finalmente, deseche los cartuchos usados en los contenedores de desecho adecuados. Cada cartucho de prueba incluye reactivos para la PCR cuantitativa del complejo de Mycobacterium tuberculosis y la resistencia a la rifampicina, así como los controles experimentales apropiados. El control de verificación de la sonda verifica la rehidratación de los reactivos, el llenado del tubo de PCR, la integridad de la sonda en el cartucho y la estabilidad del colorante.

La curva de procesamiento de la muestra sirve como control positivo para garantizar un procesamiento adecuado de las bacterias diana y también indica la presencia de inhibidores de la PCR. Los cebadores están diseñados para diferenciar entre la secuencia conservada de tipo silvestre y las mutaciones en la región central del gen RPOB asociadas con la resistencia a RIF. Los valores de CT son inversamente proporcionales a la concentración de la plantilla diana de ADN-M-T-B en la muestra analizada.

El cuadro de diálogo del resultado de la prueba concluye que se detectó el ADN diana de MTB y no se detectó resistencia a RIF en esta muestra del paciente. El ADN diana de MTB se detecta en niveles bajos con indicación de resistencia a rifampicina. Ambos controles, SPC y PCC, cumplen con los criterios de aceptación asignados.

Este resultado de ensayo se considera inválido ya que el control positivo de proceso (SPC) es negativo y no hay productos de PCR. O bien la muestra no se procesó adecuadamente o la PCR estuvo inhibida. Repita el ensayo.

Como se ha visto en la prueba del video, es un procedimiento estandarizado y requiere únicamente una infraestructura y capacitación de laboratorio moderadas. Por lo tanto, considero que el ensayo experto M-T-B-R-F tiene el potencial de llevar pruebas diagnósticas estandarizadas, sensibles y altamente específicas, tanto para la tuberculosis como para la resistencia a la rifampicina, a entornos universales de atención primaria.