Name: La Ex vivo Preparación aislada Microvessel esquelético para la Investigación de la reactividad vascular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprende a aislar y canular arteriolas de resistencia ex vivo para estudiar reactividad vascular. Este método permite evaluar respuestas a estímulos farmacológicos y propiedades estructurales en biología vascular.

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Este trabajo fue apoyado por la American Heart Association (EIA 0740129N) y NIH HL90610 T32.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El protocolo presentado describe la canulación de aislamiento, la eliminación y de un doble microvasos del músculo esquelético, aunque esta técnica general puede aplicarse fácilmente a la mayoría de los tejidos. Para el manuscrito actual, el término &quot;arteriola&quot; ha sido utilizado por los autores para describir a un buque de la resistencia que oscila entre 70-120 micras de diámetro, bajo tono activo de reposo, que es también una importante contribución a la regulación de la resistencia a la perfusión de un órgan...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivos y Equipos </td><td> Empresa </td><td> Comentarios / Catálogo # </td></tr><tr><td> Buque Cámara </td><td> Costumbre </td><td> David Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Baño caliente de recirculación de agua </td><td> PolyScience y Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetas </td><td> Federico Haer &amp; Co. </td><td> Tubo capilar de 2,0 mm x 1,0 mm de diámetro externo de identificación (27-33-1) </td></tr><tr><td> Monitor de presión </td><td> World Precision Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Camisa de agua depósito </td><td> Costumbre </td><td></td></tr><tr><td> Fuente de luz externa </td><td> World Precision Instruments </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipetear Extractor </td><td> Microdatos de Instrumentos </td><td> PMP102 Micropipeta Extractor </td></tr><tr><td> Complementa completadesarrollo de herramientas quirúrgicas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra unas pinzas finas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Seda hilo de sutura </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 o 9-0 </td></tr><tr><td> Microscopio estéreo </td><td> Olimpo </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Calibres de vídeo analógico </td><td> Boeckeler </td><td> A través del controlador (Via-100) </td></tr><tr><td> Cámara analógica de alta resolución </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Tanque de Oxígeno </td><td> Regional </td><td> 21% el balance de nitrógeno y un 5% de CO 2 el balance de nitrógeno </td></tr><tr><td> Tubería </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Drene la bomba </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Modificados PSS Rata </td><td> Ver receta a continuación </td><td></td&gt; </tr><tr><td> PSS Relajante van Breemen de </td><td> Ver receta a continuación </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Una lista de los principales componentes de la instalación aislada estación de microvasos se presenta en las figuras. <table border="1"><tbody><tr><td> Rata Modificado Receta PSS </td><td> Para hacer dos litros de PSS </td><td> 20X sal para el ganado (2L) </td><td> 20X Reserva de Estabilización (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucosa </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x sal para el ganado </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Reserva de Estabilización </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Agua destilada </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 2. Composición de la solución estándar salina fisiológica (PSS) utilizado en los protocolos microvasos aislados. Comentarios sobre receta: Hacer 2 l de caldo de sal y 2 litros de reserva de estabilización. Estos cun ser refrigerado cuando no se utilicen, pero agite bien y con frecuencia antes de la preparación de PSS. Los ingredientes adicionales se añaden en el momento de la preparación de PSS finales. <table border="1"><tbody><tr><td> PSS Relajante van Breemen de </td><td> Para hacer 2 litros de PSS </td><td> 20X sal para el ganado (1 litro) </td><td> 20X Reserva de Estabilización (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO $ 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucosa </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x sal para el ganado </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Reserva de Estabilización </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Agua destilada </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 3. Receta para relajante Van Breemen de solución salina fisiológica (PSS) utilizado en los protocolos microvasos aislados bajo condiciones de tono activo cero. Comentarios sobre receta: Hacer 1 l de caldo de salº 1 L de la Reserva de Estabilización. Estos pueden ser refrigerado cuando no se utilicen, pero agite bien y con frecuencia antes de la preparación de PSS. Los ingredientes adicionales se añaden en el momento de la preparación de finales PSS relajantes.

la ex vivo preparación aislada microvessel esquelético para la investigación de la reactividad vascular

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

La preparación microvasos aislado es una preparación ex vivo, que permite el examen de las contribuciones de diferentes factores que diámetro de control del buque, y por lo tanto, la resistencia a la perfusión 1-5. Esta es una preparación clásica experimental que fue, en gran medida, descrita inicialmente por Uchida et al. 15 hace varias décadas. Esta descripción inicial sirvió de base para las técnicas que se ha modificado y mejorado ampliamente, principalmente en el laboratorio del Dr. Brian Duling en la Universidad de Virginia, 6-8, y se presenta un enfoque actual en las páginas siguientes. Esta preparación se referirá específicamente a la arteriola gracilis en una rata como la microvasos de elección, pero la preparación de base pueden aplicarse fácilmente a los buques aisladas a partir de casi cualquier otro tejido u órgano a través de especies 9-13. Mecánica (es decir, dimensiones) cambios en la microvasculatura aislado puede ser evaluado fácilmenteen respuesta a una amplia gama de fisiológico (por ejemplo, presión hipoxia, intravascular, o cizallamiento) o retos farmacológicos, y puede dar una idea de elementos mecánicos que comprenden las respuestas integradas en una intacta, aunque ex vivo, el tejido. La importancia de este método es que permite la fácil manipulación de las influencias sobre la regulación integrada del diámetro de los microvasos, mientras que también permite el control de muchas de las contribuciones de otras fuentes, incluyendo la presión intravascular (miogénica), inervación autónoma, hemodinámica ( por ejemplo, el esfuerzo cortante), estímulos endoteliales dependientes o independientes, hormonales e influencias del parénquima, para proporcionar una lista parcial. Bajo condiciones experimentales adecuadas y con objetivos adecuados, esto puede servir como una ventaja sobre in vivo o in situ tejido / órgano preparaciones, que no permiten fácilmente para el control fácil de amplios variables sistémicas. La maJor limitación de esta preparación es básicamente la consecuencia de sus puntos fuertes. Por definición, el comportamiento de estos buques se está estudiando en condiciones en muchos de los que más contribuyen a la regulación de la resistencia vascular se han eliminado, incluso neuronales, humorales, metabólicas, etc Por lo tanto, el investigador recibe una tarjeta amarilla para evitar la sobre- interpretación y extrapolación de los datos que se recogen la utilización de esta preparación. La otra área importante de preocupación con respecto a esta preparación es que puede ser muy fácil de dañar los componentes celulares, tales como el revestimiento endotelial o el músculo liso vascular, de tal manera que la fuente variable de error puede ser introducido. Se recomienda encarecidamente que el investigador individual utilizan las medidas apropiadas para garantizar la calidad de la preparación, tanto en el inicio del experimento y periódicamente durante el curso de un protocolo.

Un<em&gt; Ex vivo</emPreparación&gt; se describe para el aislamiento de las arteriolas de resistencia del músculo gracilis más grandes para los interrogatorios tanto de las respuestas vasculares a los estímulos vasoactivos y la evaluación de las propiedades básicas estructurales a través de la mecánica de la pared pasivos.

La Ex vivo Preparación aislada Microvessel esquelético para la Investigación de la reactividad vascular

La preparación de microvasos aislados es una preparación ex vivo que permite examinar las diferentes contribuciones de los factores que controlan el vaso...

El objetivo general de este procedimiento es aislar quirúrgicamente, extraer y canular doblemente arterias de resistencia individuales. Para su estudio en un entorno ex vivo, esto se logra primero identificando y aislando quirúrgicamente un vaso microscópico en un animal anestesiado. Después de transferir el vaso microscópico a una cámara para vasos, los extremos proximal y distal del vaso microscópico se canulan ambos.Finalmente, los microvasos se exponen a desafíos farmacológicos o fisiológicos e intervenciones experimentales para evaluar los mecanismos subyacentes a la función o disfunción intrínsecos al propio vaso. En última instancia, los resultados muestran los patrones y mecanismos contribuyentes subyacentes a la reactividad vascular en un entorno aislado, mediante estímulos e intervenciones adecuadamente dirigidos. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades, ya que este procedimiento requiere no solo el desarrollo de excelentes habilidades quirúrgicas que deben realizarse bajo microscopio, sino también la paciencia y el control motor fino necesarios para canular doblemente un microvaso aislado con un diámetro que frecuentemente es mucho menor a cien micrómetros.Esto debe realizarse con un trauma absoluto mínimo para el vaso, o todo el procedimiento dará como resultado únicamente un vaso sin respuesta, demostrando que el procedimiento será Joshua Butcher, un estudiante de posgrado de mi laboratorio antes de llevar a cabo vasos microscópicos aislados. Preparación. Comience doblando micropipetas de vidrio previamente preparadas hasta una configuración adecuada calentándolas sobre una llama de butano. Luego, utilice pinzas finas para romper las puntas hasta un diámetro apropiado.Coloque dos micropipetas enfrentadas en los porta-pipetas de la cámara para vasos microscópicos, orientándolas de modo que las puntas queden en el mismo plano vertical y horizontal dentro de la cámara del vaso. A continuación, prepare una solución salina fisiológica o PSS y verifique que el pH se encuentre ajustado a los niveles adecuados para las condiciones experimentales específicas. Utilice un hemocitómetro o un micrómetro para microscopio para calibrar las pinzas de video digital que se usarán para medir el diámetro del vaso.Utilice sutura oftálmica del número ocho o más pequeña para preparar lazos de punta simple para fijar los microvasos a las pipetas. Almacene los lazos en una placa de Petri sobre una tira pequeña de cinta adhesiva enrollada alrededor de una portaobjetos el día del experimento. Encienda los gases de equilibración en la cámara de vasos y en los depósitos PERFUSE eight y SUSE eight.Llene todos los depósitos, tubos y cámaras con la solución PSS. Si es necesario, utilice una jeringa para empujar suavemente la solución PSS a través de la pipeta para asegurarse de que no esté obstruida y esté completamente llena. Mantenga la presión de entrada dentro de límites razonables para evitar dañar los transductores de presión.Después de anestesiar al animal y exponer los microvasos, retire los microvasos utilizando pinzas finas para sujetar el lado exterior y corte a lo largo de la longitud del vaso. Tenga extremo cuidado de no tirar ni jalar el vaso. A continuación, coloque el vaso en el baño de agua lleno y, utilizando un par de pinzas finas y una velocidad de perfusión moderada, sostenga cada lado de la pared del lumen proximal del vaso y canule el extremo proximal en la pipeta de entrada.Luego deslice el vaso sobre las puntas de la cánula y avance el vaso sobre la punta hasta el punto en que los bucles en T puedan sujetar el vaso. Coloque el bucle en T en el extremo distal del vaso y cánulelo en la pipeta de salida, asegurándolo con los bucles en T. Ajuste la cánula hasta que haya una distorsión mínima en el vaso y el vaso se aproxime a la longitud in vivo.Coloque una pequeña piedra de burbujas que suministre la mezcla de gas adecuada en el baño y colóquela. Cubra el recipiente con papel de plástico o una tapa de vidrio para evitar salpicaduras sobre el objetivo del microscopio. Periodicamente, oprima el tubo de salida para determinar si el vaso está desarrollando un tono de oxidación.Verifique las fuentes vasculares en busca de fugas aumentando la presión en el vaso y ocluyendo primero las líneas de salida y luego las de entrada. Si la presión intraluminal es estable, entonces no hay fugas evidentes. Si el vaso tiene una pequeña rama lateral que presenta fugas, átela con un lazo simple de sutura oftálmica 10-0 tras la canulación de los vasos microscópicos, la equilibración y la validación; luego, inicie el experimento para determinar las respuestas iniciales de control.Por ejemplo, para un estímulo fisiológico como la activación miógena o la constricción inducida por presión, modifique aleatoriamente la presión intraluminal dentro de un rango deseado y permita que el vaso tiempo para responder al desafío con fenilefrina en el fármaco a concentraciones variables en orden aleatorio. Después de un tiempo de intervención adecuado, inicie una segunda ronda de recopilación de datos realizando intervenciones adicionales o lavando la solución inicial o eliminando el desafío fisiológico y verificando que el vaso haya regresado al equilibrio. Una vez que el vaso pierda el tono activo, finalice el experimento o, si se desea, recolecte datos sobre la mecánica de la pared del vaso.Una vez finalizado el experimento, enjuague todas las líneas y cámaras con PSS y grandes cantidades de agua destilada o desionizada, y luego déjelas secar completamente. Aquí se muestra un microvaso canulado con pipetas de entrada y salida, así como bucles a alto aumento. Aquí es evidente el diámetro interno de cien 12 micrómetros determinado mediante calibradores digitales.Se muestra un microvaso canulado tras la equilibración. Aquí se observa el mismo vaso después de la dilatación en respuesta a la administración de acetilcolina. Y finalmente, este es el vaso contraído tras la administración de fenilefrina.Estos gráficos resumen las respuestas de un microvaso aislado ante desafíos con hipoxia, concentraciones crecientes de acetilcolina o cambios en la presión intravascular bajo condiciones controladas. Luego, en presencia de PSS sin calcio. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en aproximadamente una hora si se lleva a cabo correctamente, y el vaso puede mantenerse fácilmente viable durante muchas horas en la cámara con un mantenimiento adecuado de la temperatura, el gas y las condiciones SUSE ocho o perfusión ocho.

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Research

Investigación

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Biology

Biología

Un método nuevo y versátil para la observación de la microcirculación se presenta. Se considera adecuado para observación a largo plazo, y para la combinación con intervenciones biológicas pharmacophysiological o molecular.

En vivo la micro-circulación de medición en el músculo esquelético de Intra-vital Microscopía

Presentamos una preparación para la visualización y manipulación de la señalización del calcio en el endotelio microvascular intacta nativo. Tubos endoteliales recién aisladas de las arterias de resistencia de ratones que suministran el músculo esquelético a retener en la morfología vivo y señalización dinámica dentro y entre las células vecinas. Tubos endoteliales pueden prepararse a partir de los microvasos de otros tejidos y órganos.

Aislamiento de microvascular endotelial Tubos de arterias de resistencia Ratón

El intestino delgado se expone frecuentemente a las toxinas que pueden influir en el flujo sanguíneo y afectar negativamente a la absorción de nutrientes. El uso de una arteria multimyograph y mesentérica y la vena aislados, compuestos o toxinas de interés puede ser examinado para vasoactividad.

El aislamiento y uso de las Secciones de bovino mesentérica arteria y la vena como un bioensayo para la Prueba de Vasoactividad en el intestino delgado

Se presenta un protocolo para estudiar las interacciones del endotelio de pericitos humanos en ratón usando una variación del ensayo de angiogénesis tapón de gel de matriz.

Estudio in vivo de Interacción Humano-endotelial de pericitos Utilización de Plug Ensayo matriz de gel en el ratón

Se describe un procedimiento para preparar preparaciones en la cara de la arteria carótida de ratón y la aorta. Tales preparaciones, cuando se tiñen inmunofluorescentemente con anticuerpos específicos, nos permiten estudiar la localización de proteínas y la identificación de tipos de células dentro de toda la pared vascular por microscopía confocal.

En Face Preparación de los vasos sanguíneos del ratón

Sistemas de videomicroscopía se utilizan para examinar propiedades funcionales de las arteriolas aisladas de tejido adiposo en respuesta a estímulos fisiológicos y farmacológicos. Esta técnica se puede utilizar para examinar fenotipos microvasculares en dominios diferentes de tejido adiposo en humanos obesos.

Evaluación de la función Microvascular del tejido adiposo humano mediante videomicroscopía

Este manuscrito describe en vitro protocolos video microscopia para evaluar la función vascular en las arterias de resistencia cerebral de rata. El manuscrito también describe técnicas para evaluar la densidad de microvessel con fluorescencia marcada perfusión lectinas y tejido mediante flujometría Doppler láser.

Evaluación de mecanismos de Control Vascular utilizando microscopia Video de arterias de resistencia aislada de ratas

Este manuscrito describe un protocolo simple para el aislamiento de las arteriolas de la retina de rata que puede utilizarse en, calcio presión y proyección de imagen de miografía estudios electrofisiológicos.

Aislamiento de arteriolas retinianas por estudios de fisiología celular Ex Vivo

Aquí, presentamos un protocolo para la tinción de inmunofluorescencia para observar las células endoteliales de la aorta del ratón directamente. Esta técnica es útil cuando se estudia el fenotipo celular y molecular de las células endoteliales en diferentes patrones de flujo y en el desarrollo de la aterosclerosis.

Uso de la tinción de inmunofluorescencia en la cara para observar directamente las células endoteliales vasculares

El objetivo de este protocolo es aislar los microvasculares de múltiples regiones del sistema nervioso central de vertebrados lisencéfalos y gyrencéfalos.

Aislamiento confiable de microvasculares del sistema nervioso central en cinco grupos de vertebrados

La preparación intensiva de "tubos" endoteliales cerebrales intactos de ratón de las arteriolas del parénquima cerebral se ilustra para estudiar la regulación del flujo sanguíneo cerebral. Además, demostramos las fortalezas experimentales de este modelo de estudio endotelial para imágenes de fluorescencia y medición electrofisiológica de vías clave de señalización celular, incluidos los cambios en el [Ca2+] intracelular y el potencial de membrana.

Aislamiento y análisis funcional del endotelio arteriolar del parénquima cerebral de ratón

Aprende a aislar y canular arteriolas de resistencia ex vivo para estudiar reactividad vascular. Este método permite evaluar respuestas a estímulos farmacológicos y propiedades estructurales en biología vascular.

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