Name: La detección de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes con neoplasia hematológica maligna, mediante el uso de la tecnología de flujo lateral (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Aprenda a detectar aspergilosis pulmonar invasiva mediante tecnología de flujo lateral en suero y líquido de lavado broncoalveolar. Este método ofrece resultados rápidos en 15 minutos para diagnóstico clínico.

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La financiación para el Dr. Thornton de Pfizer Limited se agradece.

1. Recolección, almacenamiento y preparación de los líquidos de lavado broncoalveolar y suero <ol><li> Recoger el suero de las muestras de sangre sin tratar al permitir que la sangre coagule a 4 ° C, y el suero como almacén de alícuotas a -20 ° C antes de su uso. Los líquidos de lavado broncoalveolar (LBA) también se debe almacenar en alícuotas a -20 ° C. Nota: El almacenamiento de suero y BAL como alícuotas limita el potencial de la degradación del antígeno diana por repetidos de congelación-descongelación de las muestras durante las pruebas de repetición. </li><li> Descongelar las muestras y se mezclan las muestras de suero y BAL bien y centrifugue durante 1 min a 14.000 rpm. </li><li> Para las pruebas de rutina de muestras de suero humano, diluir el suero 01:01 (v / v) con medio de cultivo tisular (MTC). MTC consta de medio RPMI-1640, 10% (v / v) de suero fetal de ternera, 1% (v / v) de 200 mM de L-glutamina solución, y azida de sodio (0,02% w / v) como conservante. El medio se prepara de antemano y se puede almacenar a 4 ° C durante varios meses. Echar 100 l de la diluted suero a la LFD. </li><li> Por BAL fluidos humanos, y para los fluidos de BAL de los modelos animales, se aplican 100 l de muestra pura a la LFD, sin pre-tratamiento. </li><li> Para el suero de los modelos animales, diluir suero 1:2 (v / v) con tampón fosfato salino que contiene 4% (w / v) de EDTA, el calor para 3min en un baño de agua hirviendo, de centrifugación durante 5 min a 14.000 rpm, y se aplican 100 l de sobrenadante ordenada al dispositivo LFD. </li></ol> 2. La aplicación de suero y BAL en el dispositivo de flujo lateral <ol><li> Almacenar los dispositivos de flujo lateral a temperatura ambiente (23 ° C). A esta temperatura, los dispositivos son estables durante 12 meses. Retire los dispositivos de las bolsas y colocar en una superficie plana. </li><li> Usando una punta de pipeta estéril, se aplican 100 l de pre-tratado muestra de suero o BAL ordenada al puerto de liberación del dispositivo. </li><li> Permitir el ensayo para ejecutar durante 15 minutos a temperatura ambiente, momento en el cual los resultados de las pruebas debe ser registrada. Nota: En cuestión de segundos el líquido se hace a traES a migrar por acción capilar a lo largo de la membrana de nitrocelulosa en la ventana de observación. </li></ol> 3. Registrar e interpretar los resultados LFD <ol><li> El LFD consta de una línea de control interno (indicado por la letra C en la carcasa de plástico) y una línea de prueba (indicado por la letra T). La línea de control siempre debe aparecer independientemente de antígeno de Aspergillus en la muestra de suero o BAL. Esto demuestra que el ensayo ha funcionar correctamente. </li><li> Si el antígeno de Aspergillus está presente en la muestra de suero o BAL, la línea de prueba aparecerá también dentro de 15 minutos de aplicación de la muestra. Debido a la intensidad de la línea de prueba es proporcional a la cantidad de antígeno presente en la muestra de Aspergillus, la línea de prueba puede aparecer como un positivo débil (+), una moderada positivo (+ +) o como una fuerte positivo (+ + +) . Sin embargo, cualquier línea de prueba positiva, independientemente de la intensidad, que indicaría la presencia de antígeno de Aspergillus en la muestra. En ªla ausencia del antígeno e de Aspergillus, ninguna línea de prueba aparecerá, y el resultado se registrará como negativo (-). </li></ol> 4. Los resultados representativos Ejemplos representativos de negativos, positivo débil, positivo moderado, y fuertes resultados positivos LFD con muestras de BAL y el suero se muestra en la Figura 1. Los resultados de las pruebas de antígeno-positivas UDF (débil y fuerte) o negativas las pruebas de LFD con BAL fluidos de la leucemia mieloide aguda (LMA) de los pacientes diagnosticados de acuerdo a la EORTC / MSG criterios de diagnóstico se muestran en la Tabla 1. Se incluyen en esta tabla son los correspondientes clínica y micológica (galactomanano y la cultura) de datos, y los resultados de una prueba de Aspergillus PCR específica desarrollada en el St. Bartholomew Hospital de 8, para cada paciente. El diagnóstico de la enfermedad se basa en los factores del huésped (neutropenia, el uso prolongado de corticoides, el tratamiento con otros reconocidos de células T immunosuppressants), criterios clínicos y la positividad de GM para BAL (en este caso definida como un valor de índice de GM&gt; 0,8). En el 2002 EORTC / MSG directrices 10, 12 pacientes, 13 y 16 fueron diagnosticados con &quot;posible&quot; IA sobre la base de los factores del huésped y los criterios clínicos o de positividad de GM. De acuerdo con la versión revisada (2008) EORTC / MSG directrices 2, factores del huésped y la positividad de GM por sí solos o factores del huésped y los criterios clínicos por sí solos no indican &quot;posible&quot; infección micótica invasiva, a menos acompañada de la evidencia de los datos clínicos y micología, respectivamente. Paciente 6 fue diagnosticado con &quot;probable&quot; IA, con los dos años 2002 y 2008 debido a las directrices de los factores del huésped, las características clínicas mayores y menores y la positividad de GM. Tenga en cuenta que, si bien ni la LFD, ni los ensayos de PCR están actualmente incluidas en las directrices de EORTC / MSG, hay un fuerte acuerdo entre los dos ensayos y la prueba comercial de galactomanano que indican la presencia de antígeno de Aspergillus y el ácido nucleico en la muestra de BAL<html> s de los pacientes 6 y 12. Los resultados adicionales de los ensayos demuestran la eficacia de los ensayos LFD y PCR en el diagnóstico de IPA se pueden encontrar en Johnson et al 8. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3721/3721fig1.jpg" /> Figura 1. Negativo (línea de control) y positivo (el control y la línea de la prueba) los resultados de las pruebas de LFD con suero y BAL. Las intensidades de las reacciones de prueba de línea son proporcionales a las concentraciones del antígeno diana en las muestras de suero y BAL. Las reacciones suelen oscilar entre débil (+) a través de moderada (+ +) a fuerte (+ + +). Independientemente de la intensidad de prueba de línea, las tres reacciones positivas de suero que indicaría la enfermedad invasiva aspergilosis pulmonar debido a la presencia de antígeno de Aspergillus que circula en el torrente sanguíneo. Reacciones positivas BAL (débil, moderada o fuerte) podría indicar la germinación de las esporas y el desarrollo de las hifas potencialmente patógeno en los pulmones. pdflinebreak &quot;&gt; <table border="1"><tbody><tr><td> Paciente no. </td><td> Patient información </td><td> Criterios clínicos 1 </td><td> BAL cultura 2 </td><td> GM EIA índice 3 </td><td> EORTC / MSG (2002) 4 </td><td> EORTC / MSG (2008) 5 </td><td> Aspergillus PCR resultado </td><td> Resultado LFD </td></tr><tr><td> 6 </td><td> - </td><td> Los principales signos de TC (nódulo y el halo) y un menor </td><td> Negativo </td><td> 0,9 (positivo) </td><td> Probable </td><td> Probable </td><td> Positiva </td><td> Débil positivo (+) </td></tr><tr><td> 12 </td><td> Presunto infección por hongos anterior </td><td> No mayor, menor un </td><td> Candida glabrata </td><td> 6,43 (muy positiva) </td><td> Posible </td><td> Ninguno </td><td> Positiva </td><td> Fuerte positivo (+ + +) </td></tr><tr><td> 13 </td><td> El estafilococo coagulasa-negativosylococcus y E. coli en sangre </td><td> N mayor, dos menores </td><td> Negativo </td><td> 0,25 (negativo) </td><td> Posible </td><td> Ninguno </td><td> Negativo </td><td> Negativo (-) </td></tr><tr><td> 16 </td><td> Infección del tórax; </td><td> 3 criterios menores incluyen nueva efusión plural infiltrarse en más </td><td> Negativo </td><td> 0,16 (negativo) </td><td> Posible </td><td> Ninguno </td><td> Negativo </td><td> Negativo (-) </td></tr></tbody></table> 1 Los nódulos o halos en una tomografía computarizada es sugestivo de infección por hongos 2 Candida glabrata en el líquido de BAL, se consideraría como un contaminante como lo es la levadura segundo más común aislado como parte de la flora normal humanos 9 3 Un índice de&gt; 0,8 en la prueba de evaluación del impacto ambiental de GM de BAL es un indicador de infección por Aspergillus 4 A partir de los 2002 EORTC / MSG criterios de diagnóstico para &#39;posible &quot;,&quot; probable &quot;o&quot; probado &quot;la enfermedad invasiva por hongos 10 5 Basado en la versión revisada (2008) EORTC / MSG criterios para el diagnóstico de &quot;posible&quot;, &quot;probable&quot; o &quot;probado&quot; la enfermedad invasiva por hongos 2 Tabla 1. Resultados de las pruebas LFD de muestras de BAL de pacientes con leucemia mieloide aguda con IPA probable y de control de los pacientes con LMA (sin evidencia de infección) y EORTC / MSG diagnóstico de la infección.

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</ol>

No tenemos nada que revelar.

La identificación definitiva de la API sólo puede ser verdaderamente alcanzado por el aislamiento del agente etiológico a partir de muestras de biopsia, pero la recuperación de muestras adecuadas a menudo no es posible en pacientes muy enfermos y Aspergillus rara vez es objeto de reembolso a partir de sangre. Mientras los mayores avances se han hecho en el uso de tomografías axiales computarizadas del tórax en el diagnóstico de la API, características que son indicativos de la API pulmonar, tales como el &quot;halo&quot; o &quot;Media Luna&quot; signos de aire son o transitorio o se puede atribuir a los artefactos de respiración u otras infecciones por hongos 11,12. Estos datos son por lo tanto, complementado con técnicas serológicas que tienen como objetivo identificar las moléculas de la firma (GM y β-glucano) de hongos que están circulando en el suero del paciente o que están presentes en los fluidos del LBA, esputo o muestras de orina 13. Aunque estos ensayos muestran sensibilidad satisfactoria, carecen de suficiente especificidad o sufren de interferencia bajo ciertas condiciones 1,6 </sup&gt;. La prueba para la detección de LFD IPA que aquí se presenta permite el diagnóstico del &quot;punto de atención&quot; de la tecnología de la API y las hazañas que se ha utilizado hasta la fecha en las pruebas para la detección de virus, bacterias, parásitos y toxinas 14-19 y, lo más famoso, para la prueba de embarazo casera introdujo por primera vez Unipath en 1988. En la LFD Aspergillus se describe aquí, los géneros Aspergillus-MAb específico JF5 se inmoviliza a una zona de captura (la línea de prueba) en una membrana de nitrocelulosa poroso. Anti-inmunoglobulina de ratón inmovilizado en la membrana en una zona separada sirvió como un control interno (línea de control). En adición de suero o líquido BAL al puerto de liberación, el MAb JF5-coloidal conjugado de oro en la almohadilla de liberación se une al antígeno diana y el complejo a continuación, pasa a lo largo de la membrana porosa por acción capilar. MAb JF5 inmovilizado en la zona de captura se une a la JF5-oro coloidal-antígeno complejo resultante en una línea de prueba de color rojo. Cualquier JF5 sin consolidar-oro coloidalconjugado se une al control interno que indica que el ensayo ha funcionar correctamente. Esto da como resultado una línea de control rojo. La prueba es rápida, teniendo tan sólo 15 minutos para llevar a cabo, es barato en comparación con las pruebas de suero y BAL sobre la base de GM y la detección de β-glucano, y no requiere de equipos costosos o amplias instalaciones de laboratorio para correr. Por otra parte, el MAb JF5 no presenta reacción cruzada con los fármacos o contaminantes que se han demostrado para causar falsos positivos en la reacción de GM y β-glucano pruebas 1,4,6. Una ventaja adicional importante sobre las pruebas de diagnóstico actuales es la capacidad para detectar la actividad LFD que es indicativo del crecimiento invasivo de las especies de Aspergillus. Un paso crítico en el procedimiento LFD es la necesidad de leer los resultados 15 minutos después de la aplicación de la muestra de suero o BAL al dispositivo. La prueba no se debe dejar por más de 15 minutos antes de registrar los resultados, ya que este resultado puede sesgo interpretatisucesivamente. Una reacción débil no se verá reforzada por la ampliación del período de incubación. El tratamiento térmico de suero de modelos animales de la infección se ha encontrado para mejorar la sensibilidad del ensayo. Una limitación de la prueba es que es cualitativa, y se basa en el operador para hacer una evaluación subjetiva de la positividad. La intensidad de la línea de prueba varía de acuerdo con el contenido de antígeno de las muestras de suero y BAL (Figura 1). Sin embargo, cualquier reacción positiva (determinado por comparación con los negativos conocidos) indica la presencia de antígeno de Aspergillus y por lo tanto la infección. Para limitar la subjetividad de los ensayos de LFD, los dispositivos de mano disponibles que permiten la cuantificación de la LFD intensidades de prueba de línea y permitir el establecimiento de valores umbral para la detección de antígeno 20. La evolución futura de la LFD incluyen su comercialización y el desarrollo de un LFD múltiple que permite la detección simultánea de otros patógenos fúngicos invasivosutilizando anticuerpos monoclonales altamente específicos 3.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Aspergillus LFD </td><td> Universidad de Exeter </td><td></td><td> Disponible en el autor correspondiente solicitud de </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> Sigma </td><td> R0883 </td><td></td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> Sigma </td><td> G7513 </td><td></td></tr><tr><td> Suero de ternera fetal </td><td> Biosera </td><td> S9100 </td><td> Otras fuentes de suero fetal de ternera se puede utilizar en la preparación de TCM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Fisher Scientific </td><td> BPE120-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

la detección de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes con neoplasia hematológica maligna, mediante el uso de la tecnología de flujo lateral

Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

Aspergilosis pulmonar invasiva (API) es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en los pacientes hematológicos y tumores malignos madre hematopoyéticas receptores de trasplante de células 1. Detección de la API representa un reto diagnóstico formidable y, en ausencia de un &quot;estándar de oro&quot;, se basa en una combinación de datos clínicos y de microbiología e histopatología cuando sea posible. El diagnóstico de la IPA debe ajustarse a la Organización Europea para la Investigación y Tratamiento del Cáncer y el Instituto Nacional de (EORTC / MSG) Alergias y Enfermedades Grupo de Infecciosas Micología estudio de consenso la definición de &quot;probada&quot;, &quot;probable&quot; y &quot;posible&quot; Las infecciones fúngicas invasivas 2 . En la actualidad, no a base de ácidos nucleicos, las pruebas han sido validados externamente para la detección de la API y por lo tanto la reacción en cadena de polimerasa (PCR) no está incluido en las actuales EORTC / MSG criterios diagnósticos. La identificación de Aspergillus en las secciones histológicas es problemático debido a Simiirregularidades en las morfologías de hifas con otros patógenos fúngicos invasivos 3, y la identificación comprobada requiere el aislamiento del agente etiológico en cultivo puro. Basada en el cultivo enfoques se basan en la disponibilidad de muestras de biopsia, pero éstos no siempre son accesibles en los pacientes enfermos, y no siempre producen propágulos viables para el cultivo cuando se obtienen. Una característica importante en la patogénesis de Aspergillus es la angio-invasión, un rasgo que ofrece oportunidades para realizar un seguimiento del hongo mediante pruebas inmunológicas que detectan las moléculas antigénicas características de las firmas en el suero y lavado broncoalveolar (LBA) líquidos. Esto ha conducido al desarrollo de la inmunoensayo enzimático Platelia (GM-EIA) que detecta Aspergillus galactomanano y una &quot;pan-hongos &#39;ensayo (ensayo Fungitell) que detecta la conservada componente fúngico pared celular (1 → 3)-β-D- glucano, pero no en los Mucorales que carecen de este componente en sus paredes celulares 1,4. Esdemanda que rodea a la exactitud de estas pruebas de 1,4-6 ha llevado a la reciente desarrollo de la próxima generación de anticuerpos monoclonales (Mab)-basados ​​en ensayos que detectan marcadores de infección 1,5. Thornton 5 describió recientemente la generación de un anticuerpo monoclonal específico de Aspergillus (JF5) utilizando tecnología de hibridoma y su uso para desarrollar un ensayo inmuno-cromatográfico de flujo lateral del dispositivo (LFD) para el punto de atención (PDA) el diagnóstico de la API. Una ventaja importante de la LFD es su capacidad para detectar la actividad desde el MAb JF5 se une a un antígeno glucoproteína extracelular que es secretada durante el crecimiento activo del hongo sólo 5. Esta es una consideración importante cuando se utilizan líquidos como BAL pulmonar para el diagnóstico de la API ya que las esporas de Aspergillus son un componente común de aire inhalado. La utilidad del dispositivo en el diagnóstico de IPA se ha demostrado utilizando un modelo animal de infección, donde la LFD muestra sensibilidad mejorada y especificacionesificity en comparación con el MM Platelia y Fungitell (1 → 3)-β-D-glucano ensayos 7. A continuación, presentamos un procedimiento sencillo LFD para detectar el antígeno de Aspergillus en el suero y fluidos humanos BAL. Su velocidad y precisión proporciona un complemento de la novela en el punto de atención de la prueba para el diagnóstico de la API en pacientes con neoplasias malignas hematológicas.

Una rápida y precisa en el punto de atención de la prueba para la aspergilosis pulmonar invasiva se presenta. Se aprovecha de flujo lateral tecnología utilizando un anticuerpo monoclonal específico que se une a un<em&gt; Aspergillus</emAntígeno&gt; secretada durante las infecciones pulmonares. El ensayo es compatible con el lavado de suero y brochoalveolar y representa una prueba adyuvante novedoso para el diagnóstico de enfermedades.

La detección de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes con neoplasia hematológica maligna, mediante el uso de la tecnología de flujo lateral

La aspergilosis pulmonar invasiva (API) es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en pacientes con neoplasias hematológicas y trasplantes de células madre hematopoyéticas...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar el uso de un dispositivo de flujo lateral para la detección rápida del antígeno diagnóstico de Aspergillus en suero humano y en muestras de lavado broncoalveolar (BAL). Esto se logra primero aplicando la muestra de suero o BAL en el puerto de liberación del dispositivo de flujo lateral. El segundo paso consiste en permitir que la solución migre a lo largo de la membrana.El siguiente paso consiste en determinar si la prueba es válida mediante el examen de la línea de control interno. El paso final es interpretar el resultado de la prueba examinando la línea de prueba. En última instancia, el dispositivo de flujo lateral se utiliza para detectar la presencia del antígeno diagnóstico de Aspergillus en suero o en líquidos de lavado broncoalveolar (BAL).La prueba de flujo lateral para aspergillus puede utilizarse como una prueba complementaria para el diagnóstico de aspergilosis pulmonar invasiva. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como el inmunoensayo enzimático para galactomanano de aspergillus, la prueba de beta-glucano panfúngica, la prueba de fondo ocular y la prueba de PCR para aspergillus, es que se trata de una prueba diagnóstica rápida realizada en el lugar de atención que requiere instalaciones de laboratorio y capacitación mínimas. Aunque la prueba de flujo lateral ha sido desarrollada para la detección de especies de aspergillus, la tecnología de flujo lateral también puede aplicarse a la detección de otros patógenos infecciosos, como especies de cetosporium, fusarium y riser.Al incorporar anticuerpos monoclonales específicos para estos organismos, la demostración visual de este método es fundamental. Dado que la interpretación de los resultados de la prueba de flujo lateral requiere familiaridad con el formato del ensayo, para obtener suero a partir de muestras de sangre no tratadas, permita que la sangre se coagule a cuatro grados Celsius. El suero y los lavados broncoalveolares, o fluidos BAL, deben almacenarse en alícuotas a menos veinte grados Celsius antes de su uso; el almacenamiento en alícuotas limita el potencial de degradación del antígeno diana debido a ciclos repetidos de congelación y descongelación durante pruebas repetidas. Para preparar las muestras de suero y BAL para su análisis, descongele las muestras a temperatura ambiente y luego manténgalas sobre hielo. Mezcle bien mediante vortex y luego centrifugue durante un minuto a 14.000 RPM. Para pruebas rutinarias de muestras humanas, diluya el suero uno a uno con medio de cultivo de tejidos; alternativamente, para disociar el antígeno diana de los complejos inmunes séricos, diluya el suero uno a dos con PBS que contenga 4% EDTA, caliente durante tres minutos en un baño de agua hirviendo y centrifugue durante cinco minutos a 14.000 RPM.Los fluidos de lavado broncoalveolar humanos no requieren pretratamientos. Una muestra de lavado broncoalveolar ha sido descongelada, agitada mediante vortex y centrifugada, y es una muestra limpia que puede aplicarse directamente al dispositivo de flujo lateral. Para su uso, los dispositivos de fluo lateral, o LFD, se almacenan a temperatura ambiente o 23 grados Celsius, temperatura a la cual permanecen estables durante 12 meses.Para comenzar el ensayo, retire los dispositivos de sus envoltorios y colóquelos sobre una superficie nivelada. Utilizando una punta de pipeta estéril, aplique 100 microlitros de suero pretratado en el puerto de liberación del dispositivo en cuestión de segundos. El líquido debe migrar por acción capilar a lo largo de la membrana de celulosa nítrica en la ventana de observación.De la misma manera, aplique 100 microlitros de una muestra de BAL pura en el puerto de liberación del dispositivo. Permita que el ensayo se desarrolle durante 15 minutos a temperatura ambiente, momento en el cual se deben registrar los resultados de la prueba. La prueba no debe dejarse más de 15 minutos antes de registrar los resultados.Dado que esto podría sesgar la interpretación de los resultados, una reacción débil no se verá potenciada al prolongar el período de incubación. La prueba de flujo lateral consta de una línea de control interno indicada con la letra C en la carcasa de plástico y una línea de prueba indicada con la letra T. La línea de control siempre debe aparecer independientemente de la presencia del antígeno de aspergillus en la muestra de suero o de lavado broncoalveolar (BAL). Esto indica que la prueba ha funcionado correctamente si el antígeno de aspergillus está presente en la muestra de suero o de BAL.La línea de prueba también aparecerá dentro de los 15 minutos posteriores a la aplicación de la muestra. Las intensidades de la prueba, las reacciones de Lyme, son proporcionales a las concentraciones del antígeno diana en las muestras de suero y VAL. El aspecto más complicado de este procedimiento es la interpretación de los resultados de la prueba.Los resultados de la LFD deben leerse a los 15 minutos y compararse con el ejemplo representativo mostrado aquí. En esta figura se muestran ejemplos representativos de resultados LFD débil positivo, moderadamente positivo y fuertemente positivo con muestras de LBA y suero. Cualquier línea de prueba positiva en la muestra de suero, independientemente de su intensidad, indicaría aspergilosis pulmonar invasiva o enfermedad IPA debido a la presencia de antígeno de Aspergillus circulante en el torrente sanguíneo. Las reacciones positivas en LBA, independientemente de su intensidad, indicarían germinación de esporas y desarrollo de hifas potencialmente patógenas en los pulmones.En ausencia del antígeno de aspergillus, no aparecerá ninguna línea de prueba y el resultado se registra como negativo. Esta tabla muestra los resultados de las pruebas de LFD utilizando líquidos de lavado broncoalveolar de pacientes con leucemia mieloide aguda o con leucemia ML diagnosticados según los criterios diagnósticos del Grupo de Estudio de la Organización Europea para la Investigación y el Tratamiento del Cáncer y del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas. En esta tabla se incluyen los datos clínicos y psicológicos correspondientes, así como los resultados de una prueba de PCR específica para ASPERIA en cada paciente.Según las directrices E-O-R-T-C-M-S-G de 2002, a los pacientes 12, 13 y 16 se les diagnosticó una IPA posible con base en factores del huésped y criterios clínicos o positividad para GM. De acuerdo con las directrices revisadas de E-O-R-T-C-M-S-G de 2008, los factores del huésped y la positividad para GM por sí solos, o los factores del huésped y los criterios clínicos por sí solos, no indicarían una infección fúngica invasora posible a menos que se acompañen de evidencia de apoyo proveniente de datos clínicos y micología, respectivamente. Al paciente seis se le diagnosticó una IPA probable según ambas directrices de 2002 y 2008 debido a factores del huésped, características clínicas mayores y menores, y positividad para GM.Finalmente, tenga en cuenta que, si bien ni el ensayo LFD ni el ensayo PCR se incluyen actualmente en las guías E-O-R-T-C-M-S-G en las muestras de LBA de los pacientes seis y doce, existe un fuerte acuerdo entre ambos ensayos y la prueba comercial de gala manina que indica la presencia de antígeno y ácido nucleico de aspergillus tras seguir este procedimiento. Otros métodos como el ensayo enzimático de pella galactomanano, panf, la prueba de beta-glucano fúngico o las pruebas de PCR para aspergillus pueden realizarse en paralelo para confirmar la enfermedad fúngica invasiva. No olvide que trabajar con suero sanguíneo humano y líquidos de LBA puede ser extremadamente peligroso y que los operadores del dispositivo siempre deben estar vacunados contra enfermedades como la hepatitis B y la tuberculosis.I.

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Research

Investigación

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Immunology and Infection

Inmunología e Infección

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Aquí se describe un protocolo para determinar la carga micótica pulmonar en ratones con aspergilosis invasiva por cuantificación de la coloración en cortes histológicos de plata de methanamine modificado de Gomori. Uso de este método dio lugar a resultados comparables con menos animales en comparación con evaluación de la carga de hongos por PCR cuantitativa de ADN fúngico de pulmón.

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Medición de la fagocitosis de Aspergillus fumigatus Conidia por leucocitos humanos utilizando citometría de flujo

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La detección de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes con neoplasia hematológica maligna, mediante el uso de la tecnología de flujo lateral (Video) | JoVE Journal

La detección de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes con neoplasia hematológica maligna, mediante el uso de la tecnología de flujo lateral

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