Name: Medición de la presión del ventrículo izquierdo a finales de embriones de ratones y Neonatal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Aprende a medir la presión del ventrículo izquierdo en ratones embrionarios tardíos y neonatales mediante cateterización guiada por ultrasonido. Esta técnica permite evaluar la función cardíaca durante el desarrollo temprano con precisión.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue financiado, en parte, por las subvenciones del NIH HL087653 y HL105314. Algunos de los métodos se han desarrollado en el laboratorio del Dr. Robert Mecham en la Escuela de Medicina de la Universidad de Washington.

1. La ecografía y la presión del sistema <ol><li> Inicie el sistema de ultrasonido de acuerdo a las instrucciones del fabricante (Vevo 770, Visualsonics). Llene la sonda apropiada (años de edad E18 - P7 = modelo 708, edad&gt; = P7 modelo 707B) con agua destilada y conectar con el sistema de ultrasonido. Coloque la sonda en el soporte ajustable a la orientación aproximada necesaria para obtener un LV en el eje largo de un ratón montado en la plataforma de imágenes para que el ápex del VI es apuntada hacia el brazo de la inyección. </li><li> El sistema de presión consiste en un transductor de presión llena de líquido, un amplificador de puente, el sistema de adquisición de datos y software de grabación de datos (LabChart). Las conexiones consisten en llaves de paso de tres vías, tubos, cerraduras Luer y para tubos. Una jeringa de 20 ml se llenó con 10% de solución salina heparinizada para el lavado en un extremo. El otro extremo se conecta a una aguja y un cuerpo de jeringa de 3 ml se modificó para su uso como una envoltura para mantener el tubo de la aguja en el brazo de la inyección (Figura 1). </li><li&gt; Calibrar el sistema de transductor de presión con un manómetro. </li><li> Montar el tubo de la aguja y la carcasa en el brazo de inyección del sistema de ultrasonidos. Fijar el transductor de presión en un soporte de anillo a la altura aproximada de la plataforma de imágenes. Colocar una aguja apropiada para la edad del ratón (edad E18 - P3 = 30G, edad&gt; = 25G P3) al tubo de la aguja. Agujas más pequeñas se obstruyen más fácil, son más difíciles de avanzar a través de la pared torácica, y tienen un tiempo de respuesta más lento. Por lo tanto, el mayor tamaño de aguja que se ajusta en el lumen del VI se utiliza para cada edad. </li><li> Colocar un montículo de gel de ultrasonido en la plataforma de formación de imágenes y cuidadosamente alinear la sonda usando el soporte ajustable de modo que la aguja se puede avanzar directamente en el gel bajo el centro de la sonda de imagen (Figura 2). La aguja debe ser lo suficientemente debajo de la sonda para no romper la cubierta de la sonda, pero lo suficientemente cerca como para estar dentro de la profundidad de la sonda de coordinación. Si es necesario, la aguja puede ser doblada por la mano de modo que permanece en ªe plano correcto a lo largo de su recorrido. </li><li> El mantenimiento de la alineación, retraer la aguja y elevar la sonda de imagen para colocar un cursor sobre la plataforma de formación de imágenes. Lavar la aguja para eliminar cualquier gel que puede haber entrado en la punta. </li></ol> 2. Ratón de preparación <ol><li> Todos los métodos que se muestran en este protocolo ha sido aprobado por el Cuidado de Animales institucional y el empleo. Anestesie una madre embarazada cronometrado (E18) o el ratón recién nacido (P1 - 20) por inhalación continua de isoflurano del 1,5%. Tubería puede ser insertado en un cono de nariz estándar para acomodar la cabeza pequeña de un ratón neonatal temprana (P1 - 15). </li><li> Asegure el ratón a la plataforma de imágenes del sistema de ultrasonidos en una posición de decúbito dorsal, con el ápex del VI apuntando hacia el brazo de la inyección. Para las madres embarazadas, aplicar gel para ultrasonidos para monitorizar la frecuencia cardíaca con el adjunto detector de ECG e inserte el termómetro rectal para el control de retroalimentación de la temperatura del cuerpo. Ratones recién nacidos son muy pequeños fo estos detectores, por lo que el ritmo cardíaco se controla durante las mediciones de presión y la temperatura corporal se mantiene con una lámpara de calor externo. </li><li> Retire el cabello del abdomen de la madre embarazada o en el pecho de la joven ratón con una crema depilatoria. Ratones recién nacidos (P1 - 10) no requieren ningún tipo de depilación. </li><li> Para las madres embarazadas, cortar y abrir el abdomen con unas tijeras y pinzas de disección curvas. Externalizar un cuerno uterino y el lugar en una gasa humedecida con solución salina caliente. Cuidadosamente manipular un embrión en la posición adecuada para obtener una vista paraesternal eje largo del VI utilizando la sonda de ultrasonido. Medir la presión en todos los embriones de este lado antes de la externalización de la trompa uterina otro. Mantenga todos los embriones y el abdomen de la madre húmedo con adición periódica de solución salina caliente. </li></ol> 3. Medición de presión <ol><li> Lugar precalentado, gel de ultrasonido desgasificado del ratón embrionario o neonatal. Ratones recién nacidos que no han sido ddepilado debe tener una pequeña cantidad de gel de ultrasonido se frota sobre su pecho antes de que el gel de ultrasonido restante se aplica para mejorar el acoplamiento. Bajar la sonda de imagen y ajustar el ángulo de la plataforma de imágenes para obtener una óptima paraesternal vista LV largo del eje. No ajustar el ángulo de la sonda debido a que la alineación aguja se perderán. </li><li> Mientras que el control de la imagen de LV en la pantalla del ultrasonido, avanzar lentamente la aguja hasta que esté cerca de la parte inferior de la sonda. Ajustar la posición de la aguja y la sonda, si es necesario, para corregir los cambios de alineación. Lave suavemente la aguja con solución salina. Iniciar el registro de datos de presión y poner a cero el transductor de presión con el software LabChart. El transductor se desplaza con la temperatura y la posición, lo que es importante para que cero justo antes de medir la presión en cada ratón. </li><li> Lentamente avanzar la aguja hasta que pueda ser visto en el borde de la imagen de ultrasonidos, pero no todavía en el VI. Ajuste la posición de la aguja, si es necesario, para entrar en el ventrículo izquierdo en elápice. Ajustar la posición de la sonda, si es necesario, para mantener una imagen clara de la aguja. Avance la aguja en el lumen del VI (Figura 3), durante la grabación de los datos de presión y seguimiento de la localización de la aguja en la imagen de ultrasonido. El inicio de grabaciones pulsátiles del transductor de presión confirma la ubicación dentro del lumen del VI (Figura 4). </li><li> Si la aguja parece estar en el lumen del VI, pero los registros de presión no son pulsátil, a ras con un ligero golpe en el émbolo de la jeringa, sólo hasta un aumento de presión es detectado (alrededor de 5 a 10 l de volumen). Esto debería eliminar cualquier obstrucción que pueden ser evitadas con una lectura precisa. Si las lecturas de presión no son todavía pulsátil, la aguja puede estar por encima o por debajo del plano correcto y no se inserta en el lumen del VI. Retirar la aguja, lavar con solución salina, y avanzar de nuevo. Si las lecturas pulsátiles aún no se obtuvo, mueva el ratón a la próxima. Utilice una aguja nueva para cada ratón. </li><li> El éxito de las lecturas de presión puede obtenerse a partir de 75% delos ratones embrionarios y neonatales intentado. Las lecturas deben tomar 5 - 10 minutos cada uno y los datos de presión para un ratón no debe ser incluido si la frecuencia cardíaca son muy diferentes de lo esperado (Figura 5). La frecuencia cardíaca tiene un efecto significativo sobre las medidas cardiovasculares y las tasas de alteración del corazón son indicativos de angustia cardíaca. Malestar embrionario ocurre generalmente 1 - 1,5 horas después de la externalización primero del útero, por lo que la velocidad es importante para la medición de presiones en una camada entera. </li></ol> 4. Los resultados representativos Todos los resultados mostrados son para ratones C57BL6J. Una imagen de la aguja en el lumen LV para un ratón en P1 se muestra en la Figura 3. La aguja es necesario perforar la pared del pecho y tener acceso a la pequeña luz del VI, pero aumenta significativamente el tiempo de respuesta del sistema de presión. Cuando un aumento de paso aproximada de la presión se aplica manualmente al sistema, el tiempo para alcanzar el 67% de la presión máxima es de 0.067 síc con el tubo sólo (lo más probable indicativo del tiempo real para aplicar el paso de presión), 0,105 seg con una aguja 25 G y 0,529 seg con una aguja G 30. El retraso en alcanzar la presión máxima se puede ver en los trazados completos mostrados en la Figura 4A y 4C. Aunque el tiempo de respuesta es más lenta con la aguja 30G, la forma de onda está mejor capturado en las etapas embrionarias y neonatal precoz, debido a la frecuencia cardíaca aumenta con la edad en los ratones 5. A pesar de esta limitación, la presión sistólica puede ser calculado suponiendo que el verdadero diastólica (mínima) la presión es cero, y la presión sistólica (máxima) de presión del ventrículo izquierdo es dos veces la media de presión del VI determina a partir de las lecturas en estado estacionario (Figura 4B y 4D ) 6. En general se supone que la sistólica y la presión arterial son iguales. Los ritmos cardíacos medidos y calculados presiones LV para varias edades entre E18 y P14 se muestran en la Figura 5. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig1.jpg" /> Figura 1. Imagen del transductor de presión con los adjuntos de tres vías llaves de paso, del sexo masculino (M) y femenino (F) conexiones Luer, púas de mangueras, tubos, jeringas y agujas. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig2.jpg" /> Figura 2. Imagen de la. Creado para alinear la aguja con la sonda de imagen (A) La plataforma de imágenes se hace girar de modo que el ápice del VI del ratón que se enfrenta el brazo de la inyección. La sonda está montada en el soporte ajustable en la orientación necesaria para obtener una aproximación del VI eje largo de la imagen. La carcasa tubo de la aguja está montado en el brazo de la inyección. La aguja se introduce en un montículo de gel de ultrasonido en la plataforma de formación de imágenes para determinar el ángulo correcto y la posición vertical y horizontal con respecto a la sonda de imagen (B). <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig3.jpg" /> Figura 3. Imagen de la aguja (N) avanza a través de la pared del pecho (CW) yen el lumen del VI en un ratón P1. Barra de escala = 0,1 mm. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig4.jpg" /> Figura 4. Ejemplo de lecturas de la presión pulsátil que la aguja entra en el ventrículo izquierdo de un E18 (A) y P14 (C) del ratón. Existe un retraso en alcanzar un estado estacionario, debido al tiempo de respuesta del sistema con la aguja. Ampliación de puntos de vista de las lecturas en estado de equilibrio se muestran en la B y D. Nótese que las presiones mínimas E18 LV están cerca de cero, pero la forma de onda completa desde cero hasta la máxima presión no se puede grabar en los ritmos cardíacos más altos de p14 ratones. Las presiones medias se miden a partir de las lecturas de estado estable y se supone que la presión sistólica del VI = 2 x mide la presión media. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig5.jpg" /> Figura 5 medidos frecuencia cardíaca (A) y se calcularon las presiones sistólica del VI (B) para E18 -. P14 ratones. N = 7 para E18, 5 para P1, P3 para 22, 23 para P7 y P14 16 para <sup&gt; 7.5.

<ol><li>Ji, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+cardiac+function+during+early+mouse+embryogenesis+coincides+with+entry+of+primitive+erythroblasts+into+the+embryo+proper%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper.</a> Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).</li>
<li>Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+ventricular+diastolic+function+correlate+with+changes+in+ventricular+myoarchitecture+in+normal+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos.</a> Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).</li>
<li>Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axial+nonuniformity+of+geometric+and+mechanical+properties+of+mouse+aorta+is+increased+during+postnatal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).</li>
<li>Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+blood+pressure+and+baroreflex+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Auton.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice.</a> Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).</li>
<li>Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+aortic+diameter+and+compliance+precedes+blood+pressure+increases+in+postnatal+development+of+elastin-insufficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+vessel+elasticity+alters+cardiovascular+structure+and+function+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice.</a> Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+elastin+to+aortic+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of elastin to aortic development in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).</li>
<li>Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microfibrils+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular microfibrils in development and disease.</a> Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).</li>
<li>Li, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin+point+mutations+cause+an+obstructive+vascular+disease%2C+supravalvular+aortic+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis.</a> Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).</li>
<li>Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+cardiac+function+during+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El protocolo presentado aquí proporciona un método para medir la presión del VI en embrionario finales y principios de los ratones recién nacidos. La principal limitación de este protocolo es la resolución temporal del sistema de presión. La señal de presión se amortigua a medida que viaja desde el ventrículo izquierdo a través de la aguja al transductor, y sólo los valores medios de presión se puede grabar. La amortiguación puede minimizarse mediante el uso de la aguja más grande posible, pero la aguja debe encajar den...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo / equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> De alta resolución del sistema de ultrasonido </td><td> Visualsonics </td><td> Vevo 770 </td><td> U otro sistema de ultrasonido apropiado </td></tr><tr><td> Alta frecuencia de ultrasonido sondas </td><td> Visualsonics </td><td> 708 y 707B </td><td></td></tr><tr><td> Imagen de plataforma y el brazo de la inyección </td><td> Visualsonics </td><td> Imagen Station 2 </td><td> Con el ECG y control de la temperatura de la plataforma de información </td></tr><tr><td> Transductor de presión </td><td> AD Instruments </td><td> MLT 844 </td><td></td></tr><tr><td> Puente del amplificador </td><td> AD Instruments </td><td> ML221 </td><td></td></tr><tr><td> Sistema de adquisición de datos </td&gt; <td> AD Instruments </td><td> ML866 </td><td></td></tr><tr><td> Los datos del software de grabación </td><td> AD Instruments </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> Anillo de pie y sujetar </td><td> Varios proveedores </td><td></td><td> Para mantener transductor de presión durante las mediciones </td></tr><tr><td> Llaves de paso de 3 vías con conexión Luer lock macho </td><td> Cole Parmer </td><td> 30600-02 </td><td></td></tr><tr><td> 1/16 &quot;tubo Tygon de Identificación </td><td> Cole Parmer </td><td> 06408 </td><td></td></tr><tr><td> Luers masculinos y femeninos w / 1/16 &quot;lengüeta de la manguera </td><td> Cole Parmer </td><td> 45510-50 45510-00 </td><td></td></tr><tr><td> 24 &quot;tubos de macho y hembra Luer en cada extremo </td><td> Cole Parmer </td><td> 30600-60 </td><td></td></tr><tr><td> 3 y 10 ml jeringas </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 y 25G agujas </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td> 1,5 pulgadas de longitud </td></tr><tr><td> Big Ben manómetro </td><td> Riester </td><td> 1456-100 </td><td></td></tr><tr><td> Salina </td><td> Varios proveedores </td><td></td><td></td></tr><tr><td> La heparina </td><td> Varios proveedores </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultrasonido de gel </td><td> Parker </td><td> Aquasonic 100 </td><td></td></tr><tr><td> Lociones para el cabello removedor </td><td> Nair </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

medición de la presión del ventrículo izquierdo a finales de embriones de ratones y neonatal

Measuring Left Ventricular Pressure in Late Embryonic and Neonatal Mice

La presión arterial aumenta de forma significativa durante el desarrollo embrionario y postnatal en animales vertebrados. En el ratón, el flujo sanguíneo es detectable primero alrededor del día embrionario (E) 8,5 1. Sistólica del ventrículo izquierdo (VI) la presión es de 2 mmHg en E9.5 y E14.5 11 mmHg en dos. En estas etapas mediados de los embriones, el VI es claramente visible a través de la pared torácica para la medición de presión invasiva, porque las costillas y la piel no están completamente desarrollados. Entre E14.5 y el parto (aproximadamente E21) los métodos de imagen debe ser usado para ver el VI. Después del nacimiento, la media de aumento de la presión arterial de 30 a 70 mmHg desde el primer día postnatal (P) 2 - 35 3. Más allá de P20, la presión arterial se puede medir con catéteres de estado sólido (es decir, Millar o Scisense). Antes de P20, estos catéteres son demasiado grandes para el desarrollo de las arterias de ratones y la presión arterial debe ser medida con la costumbre sacó catéteres de plástico unidos a transductores de presión llenas de líquido o de vidrio 3 micropipetas attardía en deseos de servo transductores de presión nula 4. Nuestro trabajo reciente ha demostrado que el mayor aumento de la presión arterial se produce durante los fines de embriones con el período postnatal temprano en ratones de 5-7. Este gran aumento de la presión arterial puede influir en las células musculares lisas (SMC) fenotipo en las arterias en desarrollo y desencadenar eventos importantes mecanotransducción. En la enfermedad humana, donde las propiedades mecánicas de las arterias en desarrollo se ven comprometidos por defectos en las proteínas de la matriz extracelular (Síndrome de esto es de Marfan 8 y estenosis aórtica supravalvular 9) los rápidos cambios en la presión arterial durante este período puede contribuir a fenotipo de la enfermedad y la gravedad a través de alteraciones en mecanotransducción señales. Por lo tanto, es importante ser capaz de medir los cambios de presión sanguínea durante embrionario finales y los períodos neonatales en modelos de ratón de la enfermedad humana. Se describe un método para medir la presión del VI a finales deembrionario (E18) y postnatal (P1 - 20) ratones. Una aguja conectada a un transductor de presión llena de líquido se introduce en el ventrículo izquierdo bajo guía ecográfica. Hay que tener cuidado para mantener la función cardiaca normal durante el protocolo experimental, sobre todo para los embriones de ratones. Los datos representativos se presentan y las limitaciones del protocolo se discuten.

Medición de la presión del ventrículo izquierdo (VI) en embriones de ratones y neonatal se describe. La presión se mide mediante la inserción de una aguja conectada a un transductor lleno de líquido en el ventrículo izquierdo bajo la guía del ultrasonido. Se debe tener cuidado para mantener la función cardiaca normal durante el protocolo experimental.

Medición de la presión del ventrículo izquierdo a finales de embriones de ratones y Neonatal

La presión arterial aumenta significativamente durante el desarrollo embrionario y postnatal en los animales vertebrados. En el ratón, el flujo sanguíneo es detectable por primera vez...

El objetivo general de este procedimiento es medir la presión del ventrículo izquierdo o VI en ratones embrionarios tardíos y neonatos. Primero, se prepara el equipo. Una aguja conectada a un transductor de presión debe alinearse con una sonda de ultrasonido.Luego, se prepara un ratón y se obtiene una imagen de su VD mediante ultrasonido. A continuación, se avanza la aguja hacia la luz del VD y se registran mediciones de presión pulsátil. Finalmente, los resultados muestran presiones sistólicas en ratones embrionarios tardíos y neonatos tempranos mediante esta cateterización guiada por ultrasonido y rellena con líquido.La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como el servo, sin mediciones de presión o catéteres de estado sólido, es que la presión puede medirse en etapas tardías del embrión y en ratones neonatos de forma robusta y repetible. Por lo general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades porque es complicado mantener la orientación del embrión dentro de la cavidad embrionaria, ya que el embrión puede rotar. Con la aplicación de la sonda de ultrasonido, seleccione y llene una sonda con agua destilada según la etapa del ratón que se estudiará.Coloque la sonda en el soporte ajustable del sistema de ultrasonido. Ajuste el soporte para obtener una vista del eje largo del ventrículo izquierdo (VI) de un ratón montado en la plataforma, con el ápice del VI orientado hacia el brazo de inyección. El sistema de presión consta de un puente amplificador de transductor de presión lleno de líquido, un sistema de adquisición de datos y un registro de laboratorio.Se utiliza un paquete de software y una jeringa de 20 mililitros llena con solución salina heparinizada al 10 % para lavar el tubo. Asegúrese de que no queden burbujas atrapadas en el tubo ni sobre el transductor. El tubo al transductor se conecta mediante llaves de paso de tres vías, conectores tipo llave y puntas de manguera.Calibre el sistema de transductor de presión con un manómetro montando el tubo de aguja y el alojamiento en el brazo de inyección. Sustituya el manómetro por un alojamiento para sujetar el tubo al brazo de inyección. El alojamiento es simplemente un cuerpo de jeringa modificado de tres mililitros.Sujete el transductor de presión en un anillo. Colóquese aproximadamente a la altura de la plataforma de imagen para evitar obstrucciones. Coloque la aguja de mayor tamaño posible en el tubo de la aguja e inyecte más solución salina heparinizada hasta que salgan unas gotas.Retire la aguja nuevamente. Asegúrese de que no se hayan atrapado burbujas en el tubo o sobre el transductor. Ahora, coloque un montículo de gel de ultrasonido sobre la plataforma de imagen.Gire la aguja del cuerpo de la jeringa de tres mililitros de manera que el borde biselado de la aguja quede orientado hacia arriba. Luego, utilizando el soporte ajustable, alinee cuidadosamente la sonda para que la aguja pueda avanzar directamente hacia el gel. Debajo del centro de la sonda de imagen, la aguja debe estar lo suficientemente por debajo de la sonda como para no perforar la cubierta de la sonda, pero lo suficientemente cerca como para permanecer dentro de la profundidad focal de la sonda.Si es necesario, la aguja puede doblarse manualmente para que permanezca en el plano correcto durante todo su recorrido. Manteniendo la alineación, retire la aguja y eleve la sonda de imagen para colocar un ratón en la plataforma de imagen. Reemplace la aguja antes de proceder con la anestesia del ratón.Una madre gestante en tiempo programado o un ratón neonato mediante inhalación continua de 1,5 % de isoflurano, se puede insertar en un cono nasal estándar para acomodar la pequeña cabeza de un ratón neonato temprano. Para los ratones neonatos, sujete el ratón a la plataforma de imagen del sistema de ultrasonido en posición decúbito dorsal con el ápice del VI orientado hacia el brazo de inyección. Para los ratones neonatos, mantenga su temperatura corporal con una lámpara de calor externa.Los ratones preñados requieren más preparación. Aplique gel de ultrasonido en las extremidades para proporcionar acoplamiento al detector de ECG conectado y monitorear la frecuencia cardíaca. Inserte el termómetro rectal para obtener retroalimentación.Control de la temperatura corporal. Retire el vello del abdomen con crema depilatoria y enjuague con agua. Abra el abdomen utilizando tijeras de disección y pinzas curvas.Externe un cuerno uterino y colóquelo sobre una gasa humedecida con solución salina tibia. Durante todo el procedimiento, mantenga húmedos tanto a los embriones como al abdomen de su madre. Con adiciones periódicas de solución salina tibia, manipule cuidadosamente un embrión hasta colocarlo en la posición adecuada para obtener una vista longitudinal paraesternal del eje largo del VI. Utilizando la sonda de ultrasonido, se puede emplear un rollo de gasa para ayudar a mantener la orientación del embrión.Continúe midiendo la presión en todos los embriones de un cuerno uterino antes de repetir el proceso con el otro cuerno uterino. Comience colocando gel de ultrasonido Degas precalentado sobre un ratón embrionario o neonatal. Baje la sonda de imagen y ajuste el ángulo de la plataforma de imagen para obtener una vista óptima del eje largo paraesternal del VI.No ajuste el ángulo de la sonda porque se perderá la alineación de la aguja. Mientras observa la imagen del VI en la pantalla del ultrasonido, avance lentamente la aguja hasta que esté cerca de la base de la sonda. Ajuste la posición de la aguja y de la sonda si es necesario para corregir desviaciones en la alineación.La imagen del ratón recién nacido muestra una orientación ideal para el ventrículo izquierdo (lv), la cual es difícil de lograr con un embrión. Comience a registrar los datos de presión. Enjuague suavemente la aguja con suero fisiológico y cierre la llave de paso hacia la jeringa de 20 mililitros y hacia la atmósfera.Observe la presión. Aumente en el programa para asegurar que se aplique una presión mínima a la aguja. Avance lentamente la aguja hasta que pueda verse en el borde de la imagen de ultrasonido, pero aún no en el VI.Si es necesario, ajuste la posición de la aguja para ingresar al VI en el ápice. Ajuste la posición de la sonda si es necesario para mantener una imagen clara de la aguja. Avance la aguja hacia la luz del VI mientras registra datos de presión y monitorea la ubicación de la aguja en la imagen ecográfica.El inicio de las grabaciones pulsátiles desde el transductor de presión confirma la ubicación dentro de la luz del VI. Si la aguja parece estar en la luz del VI, pero las grabaciones de presión no son pulsátiles, enjuague la aguja con una ligera pulsación sobre el émbolo de la jeringa hasta que se detecte un aumento de presión. El enjuague con líquido debe ser mínimo para evitar alterar el comportamiento del corazón durante las mediciones de presión.Si las lecturas de presión aún no son pulsátiles, es posible que la aguja esté por encima o por debajo del plano correcto y no se haya insertado en la luz del ventrículo izquierdo. Retraiga la aguja, lávenla con solución salina y vuélvala a avanzar.Si aún no se obtienen lecturas pulsátiles, pase al siguiente ratón y siempre use una aguja nueva para cada ratón distinto. Todo el procedimiento debe realizarse lo más rápidamente posible para minimizar el estrés en los embriones y neonatos durante la duración del experimento. Se midió la presión ventricular de ratones C 57 Black six J en un ratón E 18.Como era de esperar, la presión fue cercana a cero cuando la aguja estaba fuera del VI y mostró una lectura pulsátil cuando estaba dentro del VI en un ratón P14 mayor. La lectura de presión se amortiguó porque la magnitud de la presión era mayor y la frecuencia cardíaca era más alta. Las frecuencias cardíacas se determinaron a partir de la frecuencia de las lecturas de presión pulsátil para diversas edades entre E18 y P14.Se midieron las frecuencias cardíacas y se calcularon las presiones sistólicas del ventrículo izquierdo. Durante la realización de este procedimiento, es importante recordar humedecer periódicamente los embriones y verificar el estado de la madre. Esta técnica allana el camino para que los investigadores en fisiología cardiovascular exploren los cambios de presión arterial en ratones en desarrollo.

measuring-left-ventricular-pressure-late-embryonic-neonatal

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

La muerte fetal y perinatal es una característica común en el estudio de las alteraciones genéticas que afectan el desarrollo cardíaco. Alta frecuencia de imágenes por ultrasonido ha mejorado en 2-D y resolución pueden proporcionar información relevante sobre el desarrollo cardíaco temprano y es un método ideal para detectar el impacto en la estructura y función cardíaca antes de la muerte.

La ecocardiografía fetal murino

Un protocolo específico y rápido para investigar simultáneamente la función del corazón derecho, inflamación pulmonar, y la respuesta inmune que se describe como una herramienta de aprendizaje. Vídeo y figuras describen la fisiología y técnicas de microdisección en un equipo organizado-enfoque que es adaptable para ser utilizado para pequeñas y grandes estudios de tamaño.

Ventricular derecha sistólica mediciones de presión en combinación con la cosecha de pulmón y muestras de tejido inmune en ratones

Este artículo proporciona un protocolo para la evaluación ecocardiográfica del tamaño ventricular derecha e hipertensión pulmonar en los ratones. Las aplicaciones incluyen la determinación del fenotipo y la evaluación de serie en modelos de ratón inducido por la toxina de la cardiomiopatía y la enfermedad vascular pulmonar transgénicos y.

Evaluación ecocardiográfica de la parte derecha del corazón en ratones

El ventrículo derecho (RV) La disfunción es fundamental para la patogénesis de la enfermedad cardiovascular, sin embargo, las metodologías limitadas están disponibles para su evaluación. Los recientes avances en la ecografía proporcionan una opción no invasiva y precisa para el estudio RV longitudinal. Aquí, un método paso a paso ecocardiográfico utilizando un modelo murino de la sobrecarga de presión del VD detalle.

Evaluación del ventrículo derecho Estructura y función en modelo de ratón de la constricción de la arteria pulmonar mediante ecocardiografía transtorácica

La insuficiencia cardíaca es la principal causa de hospitalización y una de las principales causas de mortalidad. Se aplica un modelo de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratones para investigar el remodelado ventricular y la disfunción cardíaca después del infarto de miocardio. Se presenta la técnica de mediciones hemodinámicas invasivas en ratones.

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

Este artículo describe la medición de la función ventricular izquierda murina mediante el análisis de presión/volumen a diferentes frecuencias cardíacas.

Cateterismo cardíaco en ratones para medir la relación de volumen Presión: Investigar el efecto Bowditch

Este manuscrito describe un protocolo detallado para la recogida de los datos de presión-volumen del ratón.

La medición de volumen de bucles de presión en el ratón

El siguiente protocolo describe la metodología para la adquisición y análisis de imágenes ecocardiográficas utilizadas para obtener el volumen de la aurícula izquierda (LAV) de diámetro, aorta (Ao), y el diámetro de la arteria pulmonar (AP) en ratones. Esta técnica es un procedimiento no invasivo, no terminal que permite la evaluación de la función cardiopulmonar.

Murino de Ecocardiografía del atrio izquierdo, la aorta y arteria pulmonar

Proyección de imagen de ultrasonido de alta frecuencia del ratón fetal ha mejorado la resolución de imagen y puede proporcionar la precisa caracterización no invasiva de desarrollo cardíaco y defectos estructurales. El protocolo descrito en este documento está diseñado para realizar la ecocardiografía ratones fetales en tiempo real en vivo.

Proyección de imagen usando un sistema del ultrasonido de alta frecuencia (30 / 45MHZ) Cardiovascular fetal ratón

Aquí describimos y comparamos dos posiciones para obtener la vista apical de cuatro cámaras en ratones. Estas posiciones permiten la cuantificación de la función ventricular derecha, proporcionan resultados comparables y se pueden utilizar indistintamente.

Medición ecocardiográfica de parámetros diastólicos ventriculares derecho en ratón

El presente protocolo describe la evaluación ecocardiográfica de la morfología, función y flujo sanguíneo coronario del ventrículo izquierdo en ratones neonatos de 7 días de edad.

Caracterización ecocardiográfica de la estructura, función y flujo coronario del ventrículo izquierdo en ratones neonatos

Aprende a medir la presión del ventrículo izquierdo en ratones embrionarios tardíos y neonatales mediante cateterización guiada por ultrasonido. Esta técnica permite evaluar la función cardíaca durante el desarrollo temprano con precisión.

Medición de la presión del ventrículo izquierdo a finales de embriones de ratones y Neonatal

Explorar más videos