Name: GC-basado en la detección de ácido Aldononitrile acetato derivado de glucosamina y murámico de la determinación de residuos microbiana en el suelo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Aprende a analizar glucosamina y ácido murámico en suelos mediante cromatografía de gases de derivados aldonitrilo acetato. Este método permite detectar residuos microbianos con precisión y sensibilidad óptimas.

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Este trabajo fue apoyado por becas de los Grandes Lagos DOE Centro de Investigación en Bioenergía (DOE BER Oficina de Ciencia-DE-FC02 07ER64494). Estamos muy agradecidos con el Dr. Zhang Xudong y sus miembros del grupo para las discusiones técnicas útiles y valiosos comentarios sobre la finalización del protocolo.

1. Preparación de la muestra y la extracción de ácido <ol><li> Liofilizar las muestras de suelo después de la recolección de campo. </li><li> Triturar y homogeneizar muestras de suelo utilizando un molino de bolas, molino de suelo, o un mortero y almirez. </li><li> Pesar muestras de suelo (que contiene&gt; 0,3 mg de N) en un matraz de 25 ml hidrólisis. </li><li> Añadir 10 ml de HCl 6 M en cada frasco de la hidrólisis, llene N 2 gas en los frascos, y la tapa. </li><li> Hidrolizar a 105 ° C en una incubadora durante 8 horas utilizando un interruptor de tiempo automático. </li></ol> 2. Purificación de la muestra <ol><li> Retirar los frascos de la incubadora y dejar enfriar a temperatura ambiente. </li><li> Añadir 100 ml de patrón interno de myo-inositol (1 mg mL -1 de agua) a cada matraz, mezclar por agitación. </li><li> Establecer embudos de plástico que desembocan en 200 ml en forma de pera frascos con ST / NS 24/40 articulaciones, establecidos en las tazas de plástico para la estabilidad. </li><li> Doble Whatman # 2 Círculos cualitativos (11 cm de diámetro) en cuartos y poner en embudos. </li&gt; <li> Agitar cada matraz hidrólisis, y verter purines en el embudo para filtrar (que además puede Enjuagar con ~ 3 ml de agua). </li><li> Secar el filtrado utilizando un evaporador rotatorio a ~ 45 ° C, aplicando vacío. </li><li> Volver a suspender el residuo seco de cada matraz pera con 3 ~ 5 ml de agua (uso de baño de ultrasonidos, si lo desea), y se vierte en un tubo de 40 ml de teflón, enjuagar el matraz con una segunda parte alícuota de agua. </li><li> Ajustar el pH a 6,6 a 6,8 con solución 1M de KOH para precipitar los iones metálicos y otras moléculas orgánicas. </li><li> Retirar los precipitados por centrifugación a 2000 rcf durante 10 minutos. </li><li> Verter el sobrenadante en un tubo de vidrio 40 ml, cubrir la abertura del tubo con parafilm, congelación a -20 ° C, a continuación, hacer agujeros en la parafina. </li><li> Liofilizar el sobrenadante congelado para eliminar todo el líquido. </li><li> Disolver el residuo con 3 ml de metanol seco, agitación a fondo (uso de baño de ultrasonidos, si lo desea), tapar el tubo, y centrifugar a 2000 fcr durante 10 minutos para resolverlas sales. </li><li> Transferir el sobrenadante a un vial de reacción 3 ml cónico; evaporar a sequedad por la máquina RapidVap a 45 ° C (o bajo una suave corriente de gas nitrógeno seco, si se desea). </li><li> Para cada vial, añadir 100 ml de recuperación estándar de N-metilglucamina (1 mg mL -1 en agua) y 1 ml de H 2 O, cubrir la boca del vial con Parafilm, congelar a -20 ° C, perforar la parafina, y luego congelar en seco . </li><li> Hacer normas: añadir 100 l de ácido murámico (0,5 mg mL -1 en metanol), 100 l de glucosamina (1 mg mL -1 de agua), 100 l de myo-inositol (1 mg mL -1 de agua), la N-100 l metilglucamina (1 mg mL -1 de agua) y 1 ml de H 2 O, parafina cada vial, congelar a -20 ° C, perforar la parafina, y luego congelar en seco. </li></ol> 3. Derivatización <ol><li> Preparar reactivo de derivatización que contiene 32 mg ml -1 hidrocloruro de hidroxilamina y 40 mg ml -1 4-dimetilamino-PYridine en piridina-metanol (4:1 v / v). </li><li> Añadir 300 l del reactivo de derivatización para cada uno de los reactivials, tapa herméticamente, y mezclar bien. </li><li> Ponga los frascos en un baño de agua 75-80 ° C durante 35 minutos (así se sellan los viales de evitar que el agua para entrar en los viales). </li><li> Saque los frascos del baño de agua, y deje enfriar a temperatura ambiente. </li><li> Añadir 1 ml de anhídrido acético a cada uno de los 3 ml reactivials, tapa herméticamente, y mezclar bien, a continuación, recalentar en 75-80 ° C baño de agua durante 25 minutos. </li><li> Saque los frascos del baño de agua, y deje enfriar a temperatura ambiente. </li></ol> 4. Separación y Medición <ol><li> Añadir 1,5 ml de diclorometano a cada frasco, tapa bien, y mezclar bien. </li><li> Añadir 1 ml de HCl 1 M a cada vial, tapa y mezclar bien para permitir que las soluciones para sentarse inalterado hasta que las dos frases separadas, aspirar y desechar la parte superior (acuosa) en fase inversa usando pipeta 1000 l. </li><li> En la misma fAshion, se extrae la fase orgánica 3 veces pero con 1 ml de H 2 O (con la última etapa de lavado, tener especial cuidado para asegurar que toda la fase acuosa superior se ha eliminado). </li><li> Se seca la solución final utilizando RapidVap a 45 ° C (o en seco con gas nitrógeno, si se desea). </li><li> Disolver en 300 l de acetato de etilo-hexano (1:1 v / v) y transferencia a 2 ml de color ámbar con tapón de rosca viales con inserto de un pequeño volumen y tapa. </li><li> Para la cuantificación, el análisis por GC-FID con una columna de sílice fundida capilar no polar: 30 m de largo, 0,25 mm de diámetro, espesor de la película 0,25 m; fase estacionaria 5% fenil-, el 95% de metil-polisiloxano (DB-5 o equivalente) con hidrógeno o helio como gas portador, en 0,5 ml min -1 flujo constante. La cromatografía es mejor en las primas &quot;inerte&quot; y las fases de gas portador de hidrógeno, pero es aceptable en las variedades más comunes y con helio. Los ajustes del detector son 300 ° C; 400 ml min -1 aire y 30 ml min -1 tanto para el nitrógeno y elgases de hidrógeno maquillaje. La inyección y los parámetros del horno son como sigue: 1 l de inyección de división (30:1) con la entrada de GC fijado a 250 ° C; temperatura del horno inicial, 120 ° C; mantener 1 min; aumentar la temperatura del horno a 10 ° C min. -1 a 250 ° C, tienen 2,5 minutos;. la rampa a 270 ° C a 20 ° C min -1; mantener 2 minutos; la rampa a 290 ° C a 20 ° C min -1, mantenga 5 min. Ajustar el caudal del gas portador de manera que el eluir inositol, glucosamina y derivados de ácido murámico a 250 ° C, y los N-metilglucamina eluye a 270 ° C. </li></ol> 5. Derivado de validación <ol><li> El uso de ionización suave LC-ESI-TOF-MS para identificar el ion molecular y determinar el peso molecular del derivado. </li><li> El uso de GC-EI-MS-SIM o GC-IE-MSMS para la mejora de la sensibilidad para investigar los iones específicos de la derivada. </li><li> El uso de múltiples reactivos marcados con isótopos para la preparación de los derivados, y luego usar el cambio de masade aquellos derivados marcadas isotópicamente en la EM para investigar ión molecular y los fragmentos de iones. </li></ol> 6. Los resultados representativos El protocolo del método comprende principalmente cuatro pasos: digestión ácida, la purificación de la muestra, y la determinación derivatización GC (Figura 1). Un ejemplo del análisis de glucosamina y ácido murámico de las existencias de estándar y de una muestra de suelo se muestra en la Figura 2. Además de la glucosamina y ácido murámico, manosamina y galactosamina (dos isómeros de glucosamina) también se puede determinar simultáneamente utilizando el método. Con base en los factores de respuesta de las normas con respecto a la norma interna de myo-inositol, podemos cuantificar estos biomarcadores en muestras de suelo. El estándar de recuperación ha sido utilizado para controlar cualitativamente el proceso de derivatización. Los esquemas para la formación del ácido acetato aldononitrile derivatizado glucosamina y murámico se muestra en la Figura 3 </strong&gt;. Las estructuras propuestas de los derivados se determinó por GC-EIMS-SIM para la mejora de la sensibilidad, o ionización suave LC-ESI-TOF-MS 8; las estructuras propuestas de los fragmentos de iones formados en la ionización de electrones se estudiaron mediante la comparación de los espectros de iones del Las muestras preparadas con incorporaciones de isótopos diferentes 11. La Figura 4 muestra el cambio de masa del ion dominante m / z 187 de acetato de aldononitrile derivatizado glucosamina en tres escenarios, preparados con agentes no-etiquetados, anhidrita D-acético, y U -13 C-glucosamina. Otra información detallada y explicaciones pueden ser remitidos a nuestro publicaciones recientes de 8, 11. Esta estrategia podría servir como modelo para estudiar la química derivada. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3767/3767fig1.jpg" /> Figura 1. Medición diagrama de flujo del protocolo para el análisis de la glucosamina y ácido murámico en el suelomuestras. El protocolo contiene principalmente 4 pasos: digestión ácida, Purificación, la derivación y la determinación de GC. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3767/3767fig2.jpg" /> Figura 2. GC-FID cromatogramas de acetatos aldononitrile de inositol, la glucosamina, ácido murámico, manosamina, galactosamina y metilglucamina de las normas y el suelo. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3767/3767fig3.jpg" /> Figura 3. Esquemas para la formación del ácido acetato aldononitrile derivatizado glucosamina y murámico. El número 1 representa la reacción de nitrilo. El número 2 representa acetilación. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3767/3767fig4_lg.jpg"><img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3767/3767fig4.jpg" /></a> Figura 4. Los espectros de masas de acetato aldononitrile derivatizado glucosamina asociada con la estruc ión dominantees bajo modo EI preparado con (A) los agentes no-etiquetados, (B) de D-acético anhidrita, (C) U -13 C-glucosamina. Estrella representa pesado átomo o grupo isótopo isótopo.

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</ol>

No tenemos nada que revelar.

El GC presentó basado en el método para el análisis de ácido aldononitrile acetato derivado de glucosamina y murámico proporciona un método relativamente rápido para cuantificar los aminoácidos, los azúcares extraídos del suelo. Los derivados son químicamente estables, y se puede determinar en un análisis. El método no se limita a las muestras de suelo, y puede ser simplificado para muestras de matriz no-suelo. La bomba de vacío utilizado en este método está construido para ser resistente al...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Ácido murámico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2503-25MG </td></tr><tr><td> D-(+)-glucosamina clorhidrato </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G1514-100G </td></tr><tr><td> N-metil-D-glucamina </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2004-500G </td></tr><tr><td> Myo-inositol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A307003G025 </td></tr><tr><td> El metanol (seco) </td><td> Acros orgánicos </td><td> AC326950010 </td></tr><tr><td> 4-dimetilamino-piridina </td><td> Acros orgánicos </td><td> AC148270050 </td></tr><tr><td> Acetato de etilo </td><td> VWR International </td><td> BJGC100-4 </td></tr><tr><td> Hydroxlamine clorhidrato de </td><td> Fisher Scientific </td><td> H330-100 </td></tr><tr><td> Piridina </td><td> Fisher Scientific </td><td> P368-500 </td></tr><tr><td> El anhídrido acético </td> &lt;td&gt; Fisher Scientific </td><td> A10-100 </td></tr><tr><td> Diclorometano (cloruro de metileno) </td><td> Fisher Scientific </td><td> D37-500 </td></tr><tr><td> Hexano </td><td> Fisher Scientific </td><td> H303-4 </td></tr><tr><td> El ácido clorhídrico (6 M) </td><td> Fisher Scientific </td><td> S456-4 </td></tr><tr><td> Hidroxilamina clorhidrato de N -15 </td><td> Icono de los servicios </td><td> IN5280 </td></tr><tr><td> Anhídrido acético -2 H (D 6 C 4 O 3) </td><td> Acros orgánicos </td><td> AC174670050 </td></tr><tr><td> D-glucosa-U -13 C </td><td> Cambridge laboratorio de isótopos </td><td> CLM-1396-1 </td></tr><tr><td> Amonio sufate -15 N </td><td> Cambridge laboratorio de isótopos </td><td> NLM-713-1 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nombre del equipo </td><td> Empresa </td><td> Tipo </td></tr><tr><td> Rapid-Vap </td&gt; <td> Labconco </td><td> 790002 </td></tr><tr><td> Vacum bomba </td><td> KNF Neuberger </td><td> D-79112 </td></tr><tr><td> La hidrólisis frasco </td><td> Fisher Scientific </td><td> 06 423A </td></tr><tr><td> Derivatización microvial </td><td> Fisher Scientific </td><td> 06-100E </td></tr><tr><td> GC </td><td> Hewlett-Packard </td><td> 6890 </td></tr><tr><td> MS </td><td> Hewlett-Packard </td><td> 5972 </td></tr><tr><td> LC-ESI-TOF-MS </td><td> Agilent </td><td> Un sistema de la serie 1200 de Agilent HPLC acoplado a un LC Agilent / MSD TOF- </td></tr></tbody></table>

gc-basado en la detección de ácido aldononitrile acetato derivado de glucosamina y murámico de la determinación de residuos microbiana en el suelo

GC-based Detection of Aldononitrile Acetate Derivatized Glucosamine and Muramic Acid for Microbial Residue Determination in Soil

Los enfoques cuantitativos que caracterizan a los microorganismos son cruciales para una comprensión más amplia de la situación y función microbiana dentro de los ecosistemas. Las estrategias actuales para el análisis microbiológico de laboratorio incluyen tanto los tradicionales que dependen de la cultura y las técnicas basadas en la extracción directa y la determinación de ciertos biomarcadores 1 y 2. Pocos entre la diversidad de especies microbianas que habitan en el suelo pueden ser cultivadas, por lo que dependen de la cultura-los métodos de introducir sesgos significativos, una limitación ausente en el análisis de biomarcadores. El ácido de glucosamina, manosamina, galactosamina y murámico han sido bien servido como medidas tanto de los vivos y los muertos masa microbiana, de ellos el ácido glucosamina (más abundante) y murámico (únicamente a partir de células bacterianas) son los componentes más importantes en los sistemas de suelo 3 , 4. Sin embargo, la falta de conocimiento en el análisis restringe la divulgación amplia de los pares científicos. Entre todas las exipicadura de los métodos analíticos, la derivación de aldononitrile acetatos seguido por GC-basado en el análisis se ha convertido en una buena opción con respecto al óptimo equilibrio entre precisión, sensibilidad, sencillez, buena separación cromatográfica, y la estabilidad en el almacenamiento de la muestra 5. A continuación, presentamos un protocolo detallado para un análisis fiable y relativamente simple de la glucosamina y ácido murámico del suelo después de su conversión al acetatos aldononitrile. El protocolo comprende principalmente cuatro pasos: digestión ácida, la purificación de la muestra, la derivatización y la determinación de GC. El procedimiento paso a paso se modifica de acuerdo con el ex publicaciones 6, 7. Además, se presenta una estrategia para validar la estructura del ion molecular del derivado y sus fragmentos de iones formados en la ionización de electrones. Se aplicaron GC-EI-MS-SIM, LC-ESI-TOF-MS y reactivos marcados con isótopos para determinar el peso molecular de acetato derivado aldononitrile la glucosamina y el murácido amídico, se utilizó el cambio de masa de isótopos marcados derivados en el espectro de iones para investigar los fragmentos de iones derivados de cada 8. Además de la elucidación teórica, la validación de ión molecular del derivado y sus fragmentos de iones será útil para los investigadores que utilizan δ 13 C o fragmentos de iones de estos biomarcadores en estudios bioquímicos 9, 10.

Se describe un protocolo método para el análisis de GC-basada de los derivados aldonitrile acetato de glucosamina y ácido murámico extraída del suelo. Para esclarecer el mecanismo químico, también presentan una estrategia para confirmar la estructura del derivado y los fragmentos de iones formados en la ionización de electrones.

GC-basado en la detección de ácido Aldononitrile acetato derivado de glucosamina y murámico de la determinación de residuos microbiana en el suelo

Los enfoques cuantitativos para caracterizar los microorganismos son fundamentales para obtener una comprensión más amplia del estado y la función microbianos dentro de los ecosistemas. ...

El objetivo general de este video es proporcionar una descripción detallada del análisis mediante GC de los derivados de acetato de aldonitrilo de glucosamina y ácido muico extraídos de suelos. El proceso comienza con la digestión ácida, que descompone los polímeros orgánicos y libera glucosamina y ácido muico. Luego, los monómeros de azúcares amino se aíslan y purifican a partir de la solución de mezcla.A continuación se realiza la derivatización para convertir esos azúcares amino en acetatos de aldonitrilo volátiles para el análisis mediante cromatografía de gases. El paso final del procedimiento es la extracción líquido-líquido y la determinación por GC. Finalmente, se pueden obtener resultados que muestran una separación en la línea base de los azúcares amino en forma de acetatos de aldonitrilo, que eluyen entre los patrones de myo y acetol y glutamina metílica, mediante GC con detección por ionización de llama.La principal ventaja de esta técnica frente a otros métodos es que equilibra de forma óptima la precisión, sensibilidad, simplicidad, separación cromática gráfica y estabilidad durante el almacenamiento de las muestras. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del ciclo global del carbono, como la contribución de los microorganismos SSE a los reservorios de carbono estable en el suelo. Aunque este método puede proporcionar información sobre la acumulación de detritos microbianos en los suelos, también puede aplicarse en otras matrices, como sistemas oceánicos, tejidos biológicos e incluso muestras extraterrestres.Para comenzar este protocolo, liofilice las muestras de suelo después de su recolección en campo, y muela y homogenice las muestras de suelo utilizando un molino de bolas o un mortero y mano. Pese las muestras de suelo molidas en frascos de hidrólisis de 25 mililitros. Añada 10 mililitros de ácido clorhídrico seis molar a cada frasco de hidrólisis, y llénelo con gas nitrógeno antes de taparlo firmemente.Hidrólisis a 105 grados Celsius en una incubadora durante ocho horas. Utilizando un interruptor automático de temporizador, retire los matraces de la incubadora y enfríe a temperatura ambiente.Añada 100 microlitros de estándar interno myo acetol a cada matraz. Mezcle agitando suavemente y configure embudos de plástico que drenen hacia matraces en forma de pera de 200 mililitros. Utilice uniones esmeriladas de cono estándar tamaño 24/40 colocadas sobre vasos de plástico para mayor estabilidad.Doble los círculos de papel Watman número dos para filtración cualitativa en cuartos y colóquelos en los embudos. Agite suavemente cada matraz de hidrólisis y vierta la suspensión en el embudo. Para filtrar cada muestra, seque el filtrado utilizando un evaporador rotatorio a aproximadamente 45 grados Celsius aplicando vacío.Suspenda el residuo seco de cada matraz emparejado con tres a cinco mililitros de agua y viértalo en un tubo de teflón de 40 mililitros. Enjuague cada matraz con una segunda alícuota de agua. Ajuste el pH de las muestras a entre 6,6 y 6,8 utilizando una solución unimolar de hidróxido de potasio para precipitar iones metálicos y otras moléculas orgánicas. Luego, elimine los precipitados mediante centrifugación a 2000 ×g durante 10 minutos tras la centrifugación.Vierta los sobrenadantes en tubos de vidrio de 40 mililitros y cubra las aberturas de los tubos con paraform. Congele los sobrenadantes y luego haga agujeros en el paraform. Liofilice los sobrenadantes congelados para eliminar todo el líquido. Una vez que los sobrenadantes se hayan secado, disuelva el residuo con tres mililitros de metanol seco.Vortexee bien, tape las tubos y luego centrifugue a 2000 veces G durante 10 minutos. Para precipitar las sales, transfiera los sobrenadantes a viales cónicos de reacción de tres mililitros y evapore hasta sequedad mediante una máquina VA rápida a 45 grados Celsius o bajo un flujo suave de gas nitrógeno seco. Una vez evaporado, agregue 100 microlitros del estándar de recuperación y metilglutamina, y un mililitro de agua a cada vial.Luego congele las muestras antes de comenzar la derivatización. Prepare los patrones según se describe en el protocolo escrito y, a continuación, liofilice tanto las muestras como los patrones. Prepare el reactivo de derivatización que contenga 32 miligramos por mililitro de hidroxilamina hidrocloruro y 40 miligramos por mililitro.Cuatro dimetil amino purina en metanol de purina. Añada 300 microlitros del reactivo de derivatización a cada uno de los viales reactivos, tápelos firmemente y vortexe a fondo. Coloque los viales sellados en un baño de agua de 75 a 80 grados Celsius durante 35 minutos.Retire los viales del baño de agua y enfríe a temperatura ambiente. Luego, agregue un mililitro de anhídrido acético a cada uno de los viales reactivos de tres mililitros, tápelos firmemente y vortexe a fondo. A continuación, una segunda incubación en un baño de agua de 75 a 80 grados Celsius durante 25 minutos.Retire los viales del baño de agua y enfríe a temperatura ambiente. Para iniciar la separación y medición, agregue 1,5 mililitros de diclorometano a cada tubo y luego vortex. Después de agregar un mililitro de ácido clorhídrico uno molar a cada vial y agitar completamente mediante vortex, deje reposar las soluciones sin perturbar hasta que las dos fases se separen.Aspire y deseche la fase acuosa superior. Utilizando un pipeteador de 1000 microlitros de la misma manera, extraiga la fase orgánica tres veces, pero con un mililitro de agua en el último paso de lavado. Tenga especial cuidado para asegurarse de que se haya eliminado toda la fase acuosa superior.Seque la solución final utilizando un evaporador rápido a 45 grados Celsius o mediante un flujo de gas nitrógeno, disuelva cada muestra en 300 microlitros de acetato de etilo y hexano, y transfiera a viales ámbar de dos mililitros con tapa roscada y un inserto de pequeño volumen, tapando firmemente para su cuantificación mediante cromatografía de gases con detector de ionización de llama, empleando una columna capilar de sílice fundida no polar, como la DB cinco, según se indica en el protocolo escrito. Tras la ejecución y análisis estándar, ajuste el caudal del gas portador de manera que los derivados de acetol glucosamina y ácido mu-ámico eluyan a 250 grados Celsius y la glutamina con extremo metilo eluya a 270 grados Celsius.Realice una inyección dividida de 30 a 1 de un microlitro con la entrada del CG ajustada a 250 grados Celsius utilizando un muestreador automático posterior al análisis de cromatografía de gases. Y como paso final de este procedimiento, realice la validación del derivado utilizando los métodos de cromatografía y espectrometría descritos en el protocolo escrito. Aquí se muestran ejemplos del análisis de glucosamina y ácido urémico a partir de patrones estándar y de una muestra de suelo; además de glucosamina y ácido muco, se pueden determinar simultáneamente dos isómeros de la glucosamina: la osamina y la galactosamina, mediante el método basado en la cantidad exacta de los patrones aplicados y los factores de respuesta de cada estándar interno.Se puede determinar la cantidad de estos biomarcadores en las muestras de suelo. El estándar de recuperación también se ha utilizado para monitorear cualitativamente el proceso de derivatización. A continuación se muestran los esquemas de formación de aldonitrilo acetato, glucosamina derivada y ácido muco.El número uno representa la reacción de nitrilo, y el número dos representa la acetilación. Las estructuras propuestas de los fragmentos iónicos formados mediante ionización por electrones se estudiaron comparando los espectros de iones de las muestras preparadas con diversas incorporaciones de isótopos. Aquí se muestra el desplazamiento de masa del ión dominante del derivado de acetato de nitrilo de aldon glucosamina en diferentes escenarios.En este ejemplo, se preparó con agentes no marcados, así como con anhídrido acético marcado isotópicamente y glucosamina marcada isotópicamente. El asterisco en la estructura química representa el átomo de isótopo pesado o el grupo isotópico. Al realizar este procedimiento, es importante recordar mantener condiciones rigurosamente anhidras durante la derivatización.Tanto los disolventes orgánicos como el material de vidrio utilizados en esta etapa deben estar secos. Aunque muchos proveedores venden disolventes anhidros, los disponibles pueden secarse pasándolos a través de columnas que contienen agentes desecantes como sulfato de magnesio. Tras seguir este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la espectrometría de masas con relación isotópica, con el fin de responder preguntas adicionales, como cómo reaccionan los macroorganismos en el contexto de la belleza, o cómo el carbono o el nitrógeno se transforman y acumulan en los suelos al diferenciar los macroorganismos vivos de los muertos tras su desarrollo.Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la macroecología y la biología y química del suelo exploraran la contribución macro a la materia orgánica del suelo y la secuestración en sistemas terrestres naturales o manejados.

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Biología

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GC-basado en la detección de ácido Aldononitrile acetato derivado de glucosamina y murámico de la determinación de residuos microbiana en el suelo (Video) | JoVE Journal

GC-basado en la detección de ácido Aldononitrile acetato derivado de glucosamina y murámico de la determinación de residuos microbiana en el suelo

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