Name: Preparación de las rebanadas parasagitales para la Investigación de dorsal-ventral Organización de los roedores de corteza entorrinal medial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Aprende a preparar rebanadas parasagitales de corteza entorrinal medial en roedores para estudiar la organización dorsal-ventral. Este método permite registrar propiedades electrofisiológicas de neuronas estrelladas y comprender los mecanismos de navegación y memoria.

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Somos las gracias por su apoyo: Beca de la Commonwealth del Reino Unido la financiación de la Comisión (HP), EPSRC (HP), BBSRC (NMF) y la Unión Europea, las acciones Marie Curie (NMF).

<ol><li>O'Donnell, C., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+responses%3A+an+organizing+principle+for+optimization+of+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits.</a> Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).</li>
<li>Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+integration+in+the+medial+entorhinal+cortex+to+the+organization+of+grid+cell+firing+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic integration in the medial entorhinal cortex to the organization of grid cell firing fields.</a> Neuron. 60, 875-889 (2008).</li>
<li>Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonotopic+specialization+of+auditory+coincidence+detection+in+nucleus+laminaris+of+the+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick.</a> Journal of Neuroscience. 25, 1924-1934 (2005).</li>
<li>Hafting, T., Fyhn, M., Molden, S., Moser, M. -B., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructure+of+a+spatial+map+in+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microstructure of a spatial map in the entorhinal cortex.</a> Nature. 436, 801-806 (2005).</li>
<li>Sargolini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjunctive+representation+of+position%2C+direction%2C+and+velocity+in+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Conjunctive representation of position, direction, and velocity in entorhinal cortex.</a> Science. 312, 758-762 (2006).</li>
<li>Fyhn, M., Hafting, T., Witter, M. P., Moser, E. I., Moser, M. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grid+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Grid cells in mice.</a> Hippocampus. 18, 1230-1238 (2008).</li>
<li>Giocomo, L. M., Zilli, E. A., Fransén, E., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+frequency+of+subthreshold+oscillations+scales+with+entorhinal+grid+cell+field+spacing%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Temporal frequency of subthreshold oscillations scales with entorhinal grid cell field spacing.</a> Science. 315, 1719-1722 (2007).</li>
<li>Giocomo, L. M., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+constants+of+h+current+in+layer+II+stellate+cells+differ+along+the+dorsal+to+ventral+axis+of+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time constants of h current in layer II stellate cells differ along the dorsal to ventral axis of medial entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 28, 9414-9425 (2008).</li>
<li>Burgalossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcircuits+of+functionally+identified+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microcircuits of functionally identified neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Neuron. 70, 773-786 (2011).</li>
<li>Dodson, P. D., Pastoll, H., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal-ventral+organization+of+theta-like+activity+intrinsic+to+entorhinal+stellate+neurons+is+mediated+by+differences+in+stochastic+current+fluctuations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Dorsal-ventral organization of theta-like activity intrinsic to entorhinal stellate neurons is mediated by differences in stochastic current fluctuations.</a> J. Physiol. (Lond). 589, 2993-3008 (2011).</li>
<li>Nolan, M., Dudman, J., Dodson, P., Santoro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HCN1+channels+control+resting+and+active+integrative+properties+of+stellate+cells+from+layer+II+of+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">HCN1 channels control resting and active integrative properties of stellate cells from layer II of the entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 27, (2007).</li>
<li>Boehlen, A., Heinemann, U., Erchova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+range+of+intrinsic+frequencies+represented+by+medial+entorhinal+cortex+stellate+cells+extends+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The range of intrinsic frequencies represented by medial entorhinal cortex stellate cells extends with age.</a> Journal of Neuroscience. 30, 4585-4589 (2010).</li>
<li>Klink, R., Alonso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+characteristics+of+layer+II+projection+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Morphological characteristics of layer II projection neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Hippocampus. 7, 571-583 (1997).</li>
<li>van Groen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+mouse%3A+cytoarchitectonical+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the mouse: cytoarchitectonical organization.</a> Hippocampus. 11, 397-407 (2001).</li>
<li>Dolorfo, C. L., Amaral, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+rat%3A+organization+of+intrinsic+connections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the rat: organization of intrinsic connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 398, 49-82 (1998).</li>
</ol>

No hay nada que revelar.

Para facilitar la investigación de las propiedades del circuito MEC que siguen a una organización dorsal-ventral que hemos descrito aquí con detalle un procedimiento para producir una preparación de corte parasagital que preserva la medida dorsal-ventral del MEC. Los pasos críticos Extracción del cerebro del animal. Tenga especial cuidado para evitar ejercer presión sobre el cerebro. Esto es más importante que la rápida eliminación del cerebro. ...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Corte ACSF (mM) </td><td> Norma ACSF (mM) </td><td> Solución interna (mM) </td><td> CASNumber </td><td> Proveedor Número de catálogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 86 </td><td> 124 </td><td></td><td> 7647-14-5 </td><td> Sigma S9888 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 1.2 </td><td> 1.2 </td><td></td><td> 13472-35-0 </td><td> Sigma 71505 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 2.5 </td><td> 2.5 </td><td> 10 </td><td> 7447-40-7 </td><td> Sigma P3911 </td></tr><tr><td> NaHCO $ 3 </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td></td><td> 144-55-8 </td><td> Fischer S/4240 </td></tr><tr><td> Glucosa </td><td> 25 </td><td> 20 </td><td></td><td> 50-99-7 </td><td> Sigma G5767 </td></tr><tr><td> Sacarosa </td><td> 75 </td><td></td><td></td><td> 57-50-1 </td><td> Sigma S5016 </td></tr><tr><td> CaliforniaCl 2 </td><td> 0.5 </td><td> 2 </td><td></td><td> 10043-52-4 </td><td> VWR 190464K </td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> 7 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 7786-30-3 </td><td> Sigma 63020 </td></tr><tr><td> K Gluconato </td><td></td><td></td><td> 130 </td><td> 299-27-4 </td><td> Sigma G4500 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 7365-45-9 </td><td> Sigma H3375 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 0.1 </td><td> 67-42-5 </td><td> Sigma E4378 </td></tr><tr><td> Na 2 ATP </td><td></td><td></td><td> 2 </td><td> 34369-07-8 </td><td> Sigma A7699 </td></tr><tr><td> Na 2 GTP </td><td></td><td></td><td> 0.3 </td><td> 36051-31-7 </td><td> Sigma G8877 </td></tr><tr><td> NaPhospho-creatina </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 19333-65-4 </td><td> Sigma P7936 </td></tr><tr><td> Biocitina (opcional) </td><td></td><td></td><td> 2.7 </td><td> 576-19-2 </td><td&gt; Sigma B4261 </td></tr></tbody></table> Tabla 1. Corte ACSF, ACSF estándar y K-gluconato recetas solución interna.

preparación de las rebanadas parasagitales para la investigación de dorsal-ventral organización de los roedores de corteza entorrinal medial

Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex

Ciencia de la Computación en el cerebro se basa en las neuronas que responden adecuadamente a las entradas sinápticas. Las neuronas se diferencian en su complemento y la distribución de los canales iónicos de membrana que determinan la forma en que responden a las entradas sinápticas. Sin embargo, la relación entre estas propiedades y función celular neuronal en animales de comportarse no se entiende bien. Una aproximación a este problema consiste en investigar topográficamente organizadas circuitos neuronales en el que la posición de los mapas de neuronas individuales en la información que codificar o cálculos que llevan a cabo 1. Los experimentos con este enfoque sugiere principios para el ajuste de las respuestas sinápticas que subyacen a la codificación de información en los circuitos sensoriales y cognitivas 2,3. La organización topográfica de las representaciones espaciales a lo largo del eje dorsal-ventral medial de la corteza entorrinal (MEC) ofrece una oportunidad para establecer relaciones entre los mecanismos celulares y cálculos importante para la cognición espacial. Las neuronas de la capa II del MEC roedores codificar la localización del uso de la red-como disparar los campos 6.4. Para las neuronas que se encuentran en posiciones dorsal en el MEC la distancia entre los campos de tiro individuales que forman una rejilla es del orden de 30 cm, mientras que para las neuronas en las posiciones progresivamente más ventral esta distancia aumenta hasta más de 1 m. Varios estudios han revelado las propiedades celulares de las neuronas en la capa II del MEC que, como la separación entre los campos de la rejilla de cocción, también se diferencian de acuerdo a su posición dorsal-ventral, lo que sugiere que estas propiedades celulares son importantes para el cálculo espacial 2,7-10. Aquí se describen los procedimientos para la preparación y registro electrofisiológico de rodajas de cerebro que mantienen la medida de dorsal-ventral de la investigación MEC habilitación de la organización topográfica de las propiedades biofísicas y anatómico de las neuronas del MEC. La posición dorso-ventral del n identificadoseurons en relación con puntos de referencia anatómicos es difícil establecer con precisión con los protocolos que utilizan las rebanadas horizontales de MEC 7,8,11,12, ya que es difícil establecer puntos de referencia para la exacta ubicación de dorsal-ventral de la rebanada. Los procedimientos aquí descritos permiten la medición precisa y consistente de la ubicación de las celdas grabadas a lo largo del eje dorsal-ventral del MEC, así como la visualización de los gradientes moleculares 2,10. Los procedimientos se han desarrollado para su uso con ratones adultos (&gt; 28 días) y se han empleado con éxito con ratones hasta 1,5 años de edad. Con ajustes que podría ser utilizado con más jóvenes ratones u otras especies de roedores. Un sistema estandarizado de preparación y de medición ayudará a la investigación sistemática de las propiedades celulares y microcircuitos de esta zona.

Se describen los procedimientos para la preparación y registro electrofisiológico de rodajas de cerebro que mantienen el eje dorsal-ventral medial de la corteza entorrinal (MEC). Debido a que la codificación neural de la localización sigue una organización dorsal-ventral en el MEC, estos procedimientos de facilitar la investigación de los mecanismos celulares importantes para la navegación y la memoria.

Preparación de las rebanadas parasagitales para la Investigación de dorsal-ventral Organización de los roedores de corteza entorrinal medial

La computación en el cerebro depende de que las neuronas respondan adecuadamente a sus entradas sinápticas. Las neuronas difieren en su complemento y distribución de ...

El objetivo general del siguiente experimento es examinar la organización topográfica de las propiedades sinápticas e integrativas de las neuronas en la corteza medial enter RH. Esto se logra preparando cortes de la corteza medial enter RH orientados en un plano dorsal-ventral. Como segundo paso, se realizan grabaciones mediante parche en células de la corteza RH para investigar sus propiedades sinápticas e integrativas.A continuación, se determina la ubicación del neurona registrado para evaluar la organización dorsal-ventral de las propiedades medidas mediante electrofisiología. Se obtienen resultados que muestran la organización topográfica de las propiedades intrínsecas de las células estrelladas en la capa dos, basada en las mediciones de su resistencia de entrada, constante de tiempo de la membrana y umbral del potencial de acción. El procedimiento lo demostrará Hugh Pastel, un estudiante de posgrado de mi laboratorio. La ventaja principal de esta técnica frente a métodos existentes, como los cortes cerebrales orientados horizontalmente, es que la posición del neurona registrado a lo largo del eje dorsal-ventral de la corteza entorrinal puede registrarse con precisión.Para co

preparation-parasagittal-slices-for-investigation-dorsal-ventral

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

El video muestra la preparación de cortes de cerebro colístico-talamocortical a partir de cerebros de cachorros de ratón. Un cerebro aislado se alinea en un portaobjetos marcado y se corta en ángulo para alinear el cerebro auditivo, el mesencéfalo y el prosencéfalo en el mismo plano. A continuación, el cerebro se corta con un vibrátomo, y los trozos que contienen las principales estructuras auditivas, del mesencéfalo y del prosencéfalo se transfieren a una cámara de retención para su...

Preparación de cortes colínculo-talamocorticales a partir del cerebro de un cachorro de ratón

Este video muestra un protocolo detallado para preparar cortes horizontales de cerebro del hipocampo de ratones, centrándose en preservar la integridad de las vías de las fibras del hipocampo. El proceso consiste en dividir y asegurar cuidadosamente el cerebro, utilizando un vibratomo para cortar y mantener las condiciones óptimas del tejido con un líquido carbogenado, lo que da como resultado cortes de cerebro del hipocampo listos para una mayor experimentación.

Obtención de cortes horizontales de cerebro de hipocampo de ratón

El video muestra la preparación de cortes de tálamo medial-corteza cingulada anterior (MT-ACC) de cerebros de ratones. Se disecciona el cerebro de un ratón, se hacen cortes para exponer la vía MT-ACC y se generan cortes utilizando un vibrátomo. A continuación, los cortes de MT-ACC se mantienen en líquido cefalorraquídeo artificial oxigenado.

Generación de cortes de corteza cingulada anterior y tálamo medial a partir de cerebros de ratón

El video describe el registro electrofisiológico de las sinapsis retinogeniculadas y corticogeniculadas en cortes de cerebro de ratón. Los cortes que contienen el núcleo geniculado lateral dorsal (dLGN) se colocan en una cámara de registro. Se coloca una pipeta estimulante en el tracto óptico para estimular las células ganglionares de la retina (RGC) e investigar las sinapsis retinogeniculadas o en el núcleo reticularis thalami para estimular las neuronas corticales e investigar las sinapsis...

Un estudio electrofisiológico de las sinapsis retinogeniculadas y corticogeniculadas en cortes de cerebro de ratón

Este video muestra la inducción de eventos ictales en cortes corticales coronales de un ratón transgénico que expresa canales catiónicos activados por luz en neuronas piramidales excitadoras corticales. El corte se coloca en una cámara de registro y se inserta un electrodo de registro en la capa cortical superficial. Tras la perfusión con un fármaco inductor de convulsiones que bloquea los canales de potasio, las neuronas se vuelven hiperexcitables y generan eventos ictales espontáneos. Para...

Generación de eventos ictales espontáneos y bajo demanda en cortes corticales del cerebro de ratón

Hemos desarrollado una preparación rebanada horizontal de la retina de mamíferos adultos con el plano de seccionamiento en paralelo a la superficie de la retina. campos dendríticas de las neuronas de la retina orientadas nonradially no fueron truncados, lo que permite el estudio de las técnicas de procesamiento de señales con patch-clamp y de imagen.

Preparación de cortes horizontales de ratón adulto Retina de Estudios electrofisiológicos

Este artículo describe una metodología detallada para obtener secciones tangenciales aplastadas de cortezas mamíferas y visualizar los módulos corticales mediante histoquímica y métodos inmunohistoquímicos.

Visualización de módulos corticales en cortezas mamíferos aplanados

Aquí, presentamos protocolos para la preparación de rebanadas cerebrales agudas que contienen el núcleo de geniculado lateral y la investigación electrofisiológica de la función de sinapsis retinogénica y corticogénica. Este protocolo proporciona una manera eficiente de estudiar las sinapsis con la probabilidad de alta y baja liberación en las mismas rebanadas cerebrales agudas.

Investigaciones electrofisiológicas de la función de sinapsis de retinogeniculato y corticogeniculato

Este artículo tiene como objetivo describir un protocolo sistemático para obtener rebanadas cerebrales hipocampales horizontales en ratones. El objetivo de esta metodología es preservar la integridad de las vías de fibra del hipocampo, como la trayectoria perforante y el tracto de fibra musgo para evaluar los procesos neurológicos relacionados con el giro desánido.

Rebanadas hipocampales horizontales del cerebro del ratón

Presentamos un protocolo para preparar rodajas agudas del hipocampo dorsal-intermedio de ratones. Comparamos esta preparación transversal con el corte coronal en términos de calidad de las grabaciones y preservación de las características morfológicas de las neuronas grabadas.

Preparación de rodajas agudas del hipocampo dorsal para la grabación de células enteras y la reconstrucción neuronal en el dentate gyrus de ratones adultos

Aprende a preparar rebanadas parasagitales de corteza entorrinal medial en roedores para estudiar la organización dorsal-ventral. Este método permite registrar propiedades electrofisiológicas de neuronas estrelladas y comprender los mecanismos de navegación y memoria.

Preparación de las rebanadas parasagitales para la Investigación de dorsal-ventral Organización de los roedores de corteza entorrinal medial (Video) | JoVE Journal

Preparación de las rebanadas parasagitales para la Investigación de dorsal-ventral Organización de los roedores de corteza entorrinal medial

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