Name: Desarrollo Sexual y descarga en las ascosporas Fusarium graminearum /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Aprende a generar y manipular peritecios en Fusarium graminearum para estudiar reproducción sexual y recombinación genética. Este método permite evaluar progenie recombinante y detectar mutantes.

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Este trabajo fue apoyado por una beca de la National Science Foundation (MCB-0923794 a FT).

1. La producción de peritecios <ol><li> Inocular el Centro de zanahoria agar 10 en un 6,0 diámetro cm plato de Petri con una cepa fértil de F. graminearum (se recomienda PH-1). </li><li> Colocar inocularon platos bajo luces fluorescentes brillantes a temperatura ambiente (18-24 ° C) y permitir a crecer hasta micelio ha alcanzado el borde exterior de la placa de Petri (3-5 días). Las luces fluorescentes comerciales domésticos funcionar bien para estimular la formación de cuerpo fructífero y descarga. </li><li> Suavemente eliminar los micelios aéreos con un palillo estéril. </li><li> Distribuir 1,0 ml de 2,5% de Tween 60 acuoso a la superficie con un palo de hockey de vidrio estéril o extremo redondeado de una varilla de vidrio estéril. </li><li> Volver placas a la luz. No agregue Parafilm a las placas. </li><li> Después de 24 horas, la superficie de las placas deben tener un aspecto brillante. Si vuelve a aparecer el micelio, la superficie de raspado y volver a aplicar la solución de Tween-60. </li><li> Observar el desarrollo de peritecios durante la próxima semana. Las etapas intermedias dedesarrollo peritecio pueden ser cosechadas raspando suavemente la superficie del agar y flash congelado para extracción de RNA (Figura 1). </li><li> Esporas maduras se acumulan en la tapa de la placa por día 7. Inicialmente éstos sólo serán visibles bajo un microscopio de disección, pero por día 9, se han acumulado a la densidad suficiente como para ser visible a simple vista. </li></ol> 2. Ascosporas ensayo de descarga <ol><li> El día 6 después de la aplicación de la solución de Tween, cortar un círculo de 1 cm de diámetro del agar con un perforador de madera. Alternativamente, un bisturí puede ser utilizado para cortar un segmento de tamaño similar. El círculo puede ser cortado por la mitad y cada mitad coloca en un portaobjetos de vidrio. </li><li> Orient las piezas manera que la superficie que contiene los cuerpos fructíferos es perpendicular a la superficie de la corredera, y las esporas se disparan a lo largo de la corredera. </li><li> Colocar el portaobjetos en una cámara de humedad durante la noche bajo las luces. Las esporas se acumulará sobrela corredera y ser visibles para el ojo desnudo a la mañana siguiente (Figura 2). </li><li> Esporas acumuladas se pueden lavar fuera de la diapositiva con agua y se cuantificó si se desea. </li><li> Potenciales inhibidores de descarga de ascosporas se puede ensayar por adición a la parte trasera del bloque de agar durante el montaje del ensayo. Algunos inhibidores de los canales iónicos que reducen la descarga han sido previamente ensayados con esta técnica 15. </li></ol> 3. Generación de progenie recombinante <ol><li> Inicia cruzada mediante la inoculación de agar zanahoria con dos cepas de F. graminearum (una Nit + y una nits), colocando los puntos de inoculación en los lados opuestos de la placa de Petri. </li><li> Una vez que las hifas han llenado la superficie, raspar parte aérea y aplicar de Tween-60 solución como se describe anteriormente. Use un marcador para observar en el lado de la placa de Petri donde las hifas se encuentran. </li><li> Volver culturas a la luz y se incuba hasta peritecios se han desarrollado, y que han cirrhiarma para formar a los peritecios lo largo de la intersección entre las dos culturas. </li><li> Bajo el microscopio de disección, traer a la vista los peritecios lo largo de la intersección de las dos culturas. Utilizando un pasador de insectos, se esteriliza y se sumerge en agua estéril, toque una cirrhus a lo largo de este borde ligeramente con la punta de la clavija. La humedad en el pasador debe permitir que las cirrhus a pegarse a la clavija. </li><li> Enjuague la punta de la espiga con los cirrhus en que de cada 200 l de agua estéril en un tubo Eppendorf de separar las esporas. </li><li> Llama la clavija, se humedece de nuevo y elegir otro cirrhus. Elige 10 a 15 cirrhi, y colocar cada uno en un tubo separado de agua. </li><li> Tubos, agitar brevemente que contiene suspendidas cirrhi. </li><li> Retirar 60 l de la suspensión de esporas con una pipeta y el lugar en un medio MMTS 1 en un 9 cm de placa de Petri. Extender con un palo de hockey estéril. La suspensión de esporas restante puede ser almacenado a 4 ° C durante hasta una semana y replated si es necesario. </li><li> IncubaTE a temperatura ambiente (la luz no es necesario) durante 3-5 días hasta que las colonias muy pequeñas aparecen (Figura 3). Habrá dos tipos de fenotipos entre las colonias. Las colonias de nit tendrá hifas más escasas que las colonias + Nit. Cirrhi recombinante de peritecios se muestran ambos fenotipos de colonias en proporción aproximadamente igual. Desechar las placas con colonias de sólo un fenotipo en ellos. Tenga en cuenta que a veces, más de dos fenotipos resultar debido a la segregación de otros factores. </li><li> Mueva las colonias de agar V8 o de zanahoria para el almacenamiento. Colonias de prueba en agar Czapek Dox (las cepas de nit-no crece en Czapek Dox) y el PDA con el clorato (0,5 clorato de potasio M; las cepas Nit + no va a crecer en la PDA con clorato) para confirmar el fenotipo correcta. Examine estas colonias de las cualidades deseadas. </li></ol> 4. Los resultados representativos La producción de peritecios El objetivo es tener un césped deperitecios sin micelios o esporas aparentes. La superficie de la cultura tendrá un aspecto similar al terciopelo negro (Figura 1). A las 24 h después de la aplicación de Tween la superficie del agar debe tener un ligero brillo. Si vuelve a aparecer el micelio, a continuación, la placa no puede haber sido raspada suficiente para inducir el desarrollo peritecios. Ascosporas de descarga Siempre dio en su ensayo de varios bloques de agar de la cepa de tipo salvaje. Si no lo hacen los bomberos, entonces o bien los peritecios son demasiado jóvenes o demasiado viejos. Si son demasiado viejos, y luego las hifas numerosos aparecerá sobre la superficie de la cultura le da un tono blanquecino. Si este no es el caso, pueden ser demasiado joven, y el ensayo debe ser juzgado de nuevo en 24 horas. Ocasionalmente, los cultivos no se descargan bien, y el experimento tendrá que ser repetido. Asegúrese de realizar el ensayo en las condiciones de luz adecuadas. Progenie recombinante <p class="jove_content"Peritecios&gt; recombinante deben constituir la mayoría de los peritecios lo largo de la intersección entre las dos cepas. Por lo general, procesar 10 cirrhi de una cruz y por lo menos 4.6 de los que debe ser recombinante. Muy de vez en cuando, una mutación impide que una cepa de apareamiento. Si uno de los padres tiene un fenotipo de crecimiento aberrante, entonces, más de 2 fenotipos pueden estar presentes entre las colonias en MMTS. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3895/3895fig1.jpg" /> Figura 1. Etapas del desarrollo de peritecios en agar zanahoria. H Izquierda, de 72 años después de la aplicación de Tween. Nota pigmento rojo y peritecios muy jóvenes visible como algunos granos negros en la superficie. Derecho, a 144 h, peritecios maduros se han formado. Tenga en cuenta casi completa ausencia de micelio superficial en ambas culturas. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3895/3895fig2.jpg" /> Figura 2. Descarga ensayo. El tapón de color naranja zanahoria agar está orientado de manera Thaesporas t fuerza descargados del peritecios maduro en su superficie se puede acumular en la superficie de la lámina de vidrio. 15 horas tiempo de acumulación. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3895/3895fig3.jpg" /> Figura 3. Las diferencias de crecimiento entre Nit + y nit de colonias en medio MMTS selectiva. Las colonias de nit (puntas de flecha) son más pequeños. Las colonias Nit + (flechas) muestran un crecimiento robusto. Fotografía tomada después de 7 días.

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<li>Trail, F., Xu, H., Loranger, R., Gadoury, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+and+environmental+aspects+of+ascospore+discharge+in+Gibberella+zeae+%28anamorph+Fusarium+graminearum%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologica%22%5BJournal%5D)">Physiological and environmental aspects of ascospore discharge in Gibberella zeae (anamorph Fusarium graminearum.</a> Mycologica. 94, 181-189 (2002).</li>
</ol>

No tenemos nada que revelar.

F. graminearum está particularmente bien adaptado para el estudio del desarrollo de la fructificación cuerpo debido a la disponibilidad de un genoma bien anotado ( <a href="http://mips.helmholtz-muenchen.de/genre/proj/FGDB/">mips.helmholtz-muenchen.de/genre/proj/FGDB /</a> ; 4), y la disponibilidad de un Affymetrix- base de microarrays 6. Esto ha facilitado la capacidad de identificar genes importantes para la descarga de ascosporas 7,11,3. Los métodos que aquí se presentan permitirá a los investigadores a centrarse en un conjunto discreto de las etapas de desarrollo y las funciones para el análisis genético de los cuerpos fructíferos de F. graminearum. Los métodos también son fácilmente adaptables a los hongos relacionados que pueden ser inducidos a las frutas en cultivo, y puede ser utilizado como un estándar para el desarrollo en una variedad de otros tipos de hongos fructificación cuerpo. La capacidad de evaluar un fenotipo de cocción de esporas pueden ser sutiles en las especies donde las esporas son pequeños y difíciles de ver, tales como <em&gt; F. graminearum. La colección de esporas en un portaobjetos limpio facilita tanto la evaluación visual, y la evaluación cuantitativa, ya que las esporas pueden ser lavados fuera de la diapositiva y su cuantificación. Algunas especies de hongos producen un mucílago que rodea a la espora y las esporas no se pueden enjuagar, pero deben ser contados al microscopio y cuando se mantengan en la diapositiva. Hemos encontrado que esto es cierto de Sclerotinia sclerotiorum.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Fusarium graminearum cepa PH-1 </td><td> Hongos Genética Stock Center, Kansas </td><td> FGSC 9075 </td></tr><tr><td> Tween 60 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1629 </td></tr><tr><td> Agar Czapek Dox del </td><td> Difco, Becton Dickinson </td><td> 233810 </td></tr><tr><td> Clorato de potasio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 255572 </td></tr></tbody></table>

desarrollo sexual y descarga en las ascosporas fusarium graminearum</em

Sexual Development and Ascospore Discharge in Fusarium graminearum

Fusarium graminearum se ha convertido en un sistema modelo para estudios en el desarrollo y la patogenicidad de los hongos filamentosos. F. graminearum más fácilmente produce cuerpos fructíferos, llamados peritecios, en agar zanahoria. Peritecios contienen numerosos tipos de tejidos, producidos en etapas específicas de desarrollo peritecios. Estos incluyen (en orden de aparición) la formación de las iniciales peritecio (que dan lugar a las hifas ascogenous), la pared exterior, Parafisos (micelio estéril que ocupan el centro de la peritecio hasta el ascos desarrollo), de los ascos y ascosporas dentro de los ascos 14. El desarrollo de cada uno de estos tejidos está separado por aproximadamente 24 horas y ha sido la base de los estudios transcriptomic durante el desarrollo sexual de 12,8. Consulte Hallen et al. (2007) para una descripción más detallada del desarrollo, incluidas las fotografías de cada etapa. Aquí se presentan los métodos para la generación y aprovechamiento síncronomente el desarrollo de jardines de peritecios para estudios temporales de regulación de los genes, el desarrollo y los procesos fisiológicos. Aunque estos métodos están escritos específicamente para ser utilizado con F. graminearum, las técnicas se pueden utilizar para una variedad de otros hongos, siempre que la fructificación se puede inducir en el cultivo y hay una cierta sincronía con el desarrollo. Recientemente hemos adaptado este protocolo para estudiar el desarrollo sexual de F. verticillioides. A pesar de peritecios individuo debe ser recogidas a mano en esta especie, ya que un césped de desarrollar peritecios no podía ser inducido, el proceso funcionó bien para estudiar el desarrollo (Sikhakolli y Trail, sin publicar). La función más importante de los cuerpos fructíferos de hongos es la dispersión de las esporas. En muchas de las especies de Ascomycota (asca hongos productores), las esporas se tiran desde el asca, debido a la generación de presión de turgencia dentro del asca, la conducción de eyección de esporas (y fluido epiplasmic) a través delporo en la punta asca 2,7. Nuestros estudios de la descarga de ascosporas por la fuerza han dado como resultado el desarrollo de un &quot;ensayo de descarga de esporas&quot;, que utilizamos para la detección de mutaciones en el proceso. Aquí se presentan los detalles de este ensayo. F. graminearum es homotálica, y por lo tanto pueden formar cuerpos fructíferos en ausencia de una pareja compatible. La ventaja de homothallism es que el cruce no es necesario para generar descendencia homocigota para un rasgo particular, una faceta que ha facilitado el estudio del desarrollo sexual en esta especie 14,7. Sin embargo, las cepas heterotálica se han generado que se puede utilizar para el cruce de 5,9. También es posible cruzar cepas homotálicos para obtener mutantes de varios genes en una cepa 1. Esto se hace por coinoculating una placa de Petri con 2 cepas. A lo largo del punto de encuentro, la mayoría de peritecios será recombinante (siempre una mutación en una de las cepas progenitoras no inhibepolinización cruzada). A medida que los peritecios, que exudan las ascosporas en masa en lugar de forzar a la descarga. El exudado de esporas resultante (denominado un cirrhus) se sienta en la punta de la peritecio y se puede quitar fácilmente para la recuperación de esporas individuales. Aquí se presenta un protocolo para facilitar la identificación de los peritecios recombinante y la recuperación de la progenie recombinante.

Cruces sexuales y el aislamiento de la progenie recombinante son importantes herramientas de investigación para el hongo filamentoso,<em&gt; Fusarium graminearum</em&gt; Las técnicas necesarias realizar con éxito estos procesos se presentan.

Desarrollo Sexual y descarga en las ascosporas Fusarium graminearum</em

*Fusarium graminearum* se ha convertido en un sistema modelo para el estudio del desarrollo y la patogenicidad de los hongos filamentosos. *F. graminearum* produce con mayor facilidad...

El objetivo general de este procedimiento es aprender cómo generar y manipular el desarrollo de paratesias y solicitar la descarga de APO en cultivo. Esto se logra primero induciendo y haciendo crecer activamente el cultivo para iniciar el desarrollo sexual. El segundo paso consiste en ensayar la descarga activa de esporas, luego se generan paratesias recombinantes.El paso final consiste en evaluar la descendencia en busca de fenotipos que indiquen si ocurrió o no la recombinación. En última instancia, los resultados pueden utilizarse para detectar mutantes en el desarrollo sexual o para generar múltiples mutaciones dentro de una sola cepa. La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos son difíciles de describir y, aunque simples, deben realizarse con precisión para obtener una descarga óptima de esporas y una producción constante de parásis.Comience por inocular centralmente un taladro de zanahoria en una placa de Petri de seis centímetros con una cepa fértil de *F. graminearum*. Incube las placas inoculadas bajo luz fluorescente estándar comercial brillante a temperatura ambiente.Deje crecer los hongos durante tres a cinco días hasta que el micelio haya alcanzado el borde externo del recipiente. En la cabina. Raspe suavemente la superficie del cultivo con el palillo estéril para eliminar los micelios aéreos.Luego, aplique un mililitro de surfactante al tornillo sin fin y frótelo sobre la superficie con el extremo doblado o ensanchado de una varilla de vidrio estéril. Sin aplicar perfil. Vuelva a colocar las placas bajo las luces.Después de 24 horas, la superficie de las placas debe tener un aspecto brillante. Si reaparecen los micelios, raspe nuevamente la superficie, aplique otra vez la solución de tween 60 y expóngalos a la luz durante 24 horas adicionales. Ahora observe el desarrollo de la parastesia durante una semana.Las paratesias jóvenes son visibles como granos negros en la superficie del tornillo sinfín. En comparación con las paratesias maduras, debería haber casi ningún micelio superficial.Al séptimo día, las esporas maduras se acumulan en la tapa de la placa, y al noveno día, las esporas son tan densas que son visibles sin necesidad de ampliación. Para cosechar la etapa intermedia, se raspa suavemente la superficie del tornillo sinfín con un escalpelo y se transfiere la paratesia a un tubo criogénico. Luego, el tubo puede congelarse rápidamente para la extracción de ARN seis días después de aplicar el tensioactivo.Corte un círculo de un centímetro de diámetro del tallo con una broca, un sacabocados o un escalpelo. Corte el círculo por la mitad y monte las mitades sobre un portaobjetos de microscopio, orientando los fragmentos de manera que la superficie que contiene los cuerpos fructíferos quede perpendicular a la superficie del portaobjetos, y de modo que las esporas sean expulsadas a lo largo del portaobjetos. En este momento, si se desea utilizar un inhibidor de esporas acrógenas, aplíquelo en la parte posterior del bloque del tallo.Esta técnica puede utilizarse para analizar químicos que actúen como inhibidores de la descarga y para analizar mutantes genéticos que hayan perdido la capacidad de disparar esporas; hemos realizado con éxito ambos análisis. A continuación, incube la preparación durante la noche en una cámara húmeda sencilla a temperatura ambiente iluminada. A medida que los cuerpos fructíferos irrumpen, las esporas se acumulan sobre la preparación y serán visibles allí por la mañana.Las esporas acumuladas ya pueden lavarse de la placa, recogerse en un recipiente limpio y cuantificarse. Comience estableciendo un cruce genético entre dos cepas de f gramine arum inoculándolas en lados opuestos de una placa de Petri con agar zanahoria. Como se describió previamente, cultive los hongos hasta que los hifas hayan cubierto completamente la superficie.Raspe las porciones aéreas y aplique T entre la solución 60. En este caso, marque la placa en el lugar donde los hifas se encuentran. Devuelva los cultivos a la luz e incúbelos durante aproximadamente siete días, hasta que se desarrollen las parásis y comiencen a formarse las Siri a partir de las parásis a lo largo de la intersección entre los cultivos.Esta técnica puede utilizarse para combinar múltiples mutaciones en una sola cepa. También vale la pena señalar que tanto knit más como knit menos pueden seleccionarse, lo que convierte a este marcador en uno muy útil. Bajo el microscopio estereoscópico, observe la parastesia a lo largo de la intersección de los dos cultivos.Luego, localice el ojo del serrano. Sumerja ahora una aguja para insectos esterilizada en agua estéril y toque con la aguja una estructura serosa formada en el borde entre los cultivos. Las SRI deben adherirse a la humedad de la aguja.Luego enjuague la punta del alfiler en 200 microlitros de agua estéril contenida en un tubo microcentrífugo de 1,5 mililitros. Flamee el alfiler, humedézcalo nuevamente y tome otro sru. Tome entre tres y cinco Siri y transfiera cada uno a su propio tubo.Ahora, agite brevemente mediante vortex. Cada tubo contiene Siri en suspensión para cada tubo. Extienda 60 microlitros de la suspensión de esporas sobre una placa de Petri de nueve milímetros.Con medio MMTS, incubar las placas a temperatura ambiente con o sin luz, y almacenar la suspensión de esporas restante a cuatro grados Celsius durante hasta una semana. Después de tres a cinco días, aparecen colonias muy pequeñas en la placa. Un fenotipo puede evaluarse bajo un microscopio.Las colonias negativas de tricotilosis tendrán una hipofia más escasa que las colonias positivas de tricotilosis. Descarte las placas que presenten solo uno de los fenotipos. Los cultivos procedentes de la recombinación paratésica presentan ambos fenotipos coloniales en proporción aproximadamente igual.Mantenga estas placas. A veces, otros fenotipos resultan debido a la segregación de otros factores, como colonias que son intermedias entre positivas y negativas para el tejido, con fines de almacenamiento. Transfiera las colonias desde las placas recombinantes a una placa V eight o a una placa con sacabocado de zanahoria para continuar el estudio, examinando otros fenotipos. Siembre las colonias en el sacabocado Chap X dock y en placas con PDA que contenga clorato. Las parastesias se desarrollaron en un césped similar a terciopelo negro sin micelio ni esporas.24 horas después de la aplicación de tween, la superficie del barrenador presentaba un ligero brillo. Si hubieran reaparecido las hifas, es posible que la placa no se hubiera raspado lo suficiente para inducir el desarrollo de parestesia. Se prepararon varios bloques de barrenador con cuerpos fructíferos de una cepa silvestre para que liberaran sus esporas sobre portaobjetos de vidrio y poder observarlos.Se preparó la iluminación adecuada para la activación. Las paratesias que eran demasiado jóvenes o demasiado viejas a menudo no se activaban. Cuando eran demasiado viejas, aparecían numerosas hifas sobre la superficie del cultivo, dándole un tono blanquecino.Cuando eran demasiado jóvenes, los cuerpos fructíferos no se dispararon, y el experimento se repitió. Veinticuatro horas después, cuando se recolectaron 10 Siri de un cruzamiento, por lo general al menos seis eran recombinantes según la puntuación basada en una mezcla de fenotipos tejedor negativo y tejedor positivo. Muy ocasionalmente, una mutación impedía que una cepa se apareara.Si uno de los progenitores presentaba un fenotipo de crecimiento aparente, entonces había más de dos fenotipos presentes entre las colonias en MMTS. Al intentar este procedimiento, es importante recordar comenzar con un cultivo que se haya mantenido adecuadamente y que no haya sido transferido secuencialmente con el tiempo. Comience siempre con un cultivo que se haya desarrollado a partir de un stock estable de congelador.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Para estudiar los procesos de desarrollo de ascosporas en Gibberella zeae, un procedimiento para la recolección en condiciones estériles se filmó con el fin de generar el mayor nivel de información para la descripción del protocolo. Esto debería facilitar la reproducibilidad del experimento, un aspecto crucial en el genoma completo del perfil de expresión de las pruebas de cumplimiento.

Gibberella zeae ascósporas de producción y de recolección de experimentos de microarrays.

La devastación de los cultivos de cereales de semillas por los hongos que infectan ha llevado a los numerosos esfuerzos de investigación para comprender mejor las interacciones planta-patógeno. Para estudiar las interacciones entre las semillas de hongos en un entorno de laboratorio, hemos desarrollado un método robusto para la cuantificación de reproducción de los hongos, la biomasa y la contaminación por micotoxinas mediante bioensayos del kernel.

La cuantificación de la colonización por hongos, esporogenesis y producción de micotoxinas mediante bioensayos del núcleo

Proporcionamos un método básico reproducible para la microscopía a largo plazo del ciclo de vida sexual de la levadura de fisión. Con los pequeños ajustes descritos, el protocolo presentado permite que la investigación se centre en diferentes etapas del proceso reproductivo.

Microscopía de la levadura de fisión del ciclo de vida sexual

Los problemas en el procesamiento de muestras biológicas para la observación de microscopía electrónica de barrido incluyen el colapso celular, el tratamiento de muestras de microambientes húmedos y la destrucción celular. Aquí se compilan y detallan protocolos de bajo costo y relativamente rápidos adecuados para preparar muestras desafiantes como meristemos florales, quistes de oomicetos y hongos (Agaricales).

Escaneado de Protocolos de Microscopía Electrónica (SEM) para la Problemática de la planta, Oomycete, y muestras de hongos

Aquí presentamos un protocolo basado en el sistema de cebo del gusano de la harina (Tenebrio molitor) que se utilizó para aislar y seleccionar hongos entomopatógenos (EPF) a partir de muestras de suelo. Se utiliza una fórmula efectiva de número de conidios (ECN) para seleccionar EPF altamente tolerante al estrés en función de las características fisiológicas para el control microbiano de plagas en el campo.

Aislamiento y selección de hongos entomopatógenos a partir de muestras de suelo y evaluación de la virulencia fúngica contra plagas de insectos

Este protocolo es un método eficaz y rápido de cultivo de levaduras y el moho Aspergillus fumigatus a partir de grandes conjuntos de muestras de suelo en tan solo 7 días. Los métodos se pueden modificar fácilmente para acomodar una variedad de medios de incubación y temperaturas según sea necesario para los experimentos.

Aislamiento de levaduras y mohos cultivables de los suelos para investigar la estructura de la población de hongos

En este manuscrito se detalla un protocolo de inoculación optimizado que utiliza vainas de hojas de maíz desprendidas para estudios citológicos, fisiológicos y moleculares reproducibles de las interacciones del maíz con los patógenos fúngicos de las plantas. Las vainas de las hojas facilitan la observación en tiempo real de las interacciones celulares entre la planta viva y el hongo en tejidos no fijados.

Vainas de maíz desprendidas para la obtención de imágenes de células vivas de la infección por patógenos fúngicos foliares del maíz

Aquí presentamos un protocolo básico para la inducción del apareamiento de P. blakesleeanus .

Cruzamientos sexuales con el mucoromiceto Phycomyces blakesleeanus

Mamaria células tumorales que expresan luciferasa se implanta de forma subcutánea en ratones y se visualizan con imágenes ópticas para controlar el crecimiento tumoral y el desarrollo de forma no invasiva en un estudio longitudinal.

En vivo bioluminiscente de imágenes de tumores de mama mediante el espectro de IVIS

Técnica necesaria para la visualización de los latidos del corazón en adultos y...

Visualizar el corazón latiendo en Drosophila</em

Aprende a generar y manipular peritecios en Fusarium graminearum para estudiar reproducción sexual y recombinación genética. Este método permite evaluar progenie recombinante y detectar mutantes.

Desarrollo Sexual y descarga en las ascosporas Fusarium graminearum

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