Do-It-Yourself de dispositivos para la recuperación de las muestras criopreservadas de caída accidental en los tanques de almacenamiento criogénicos

El objetivo de este procedimiento es facilitar la recuperación de muestras en cajas criogénicas y viales criogénicos de tanques dúo llenos de nitrógeno líquido utilizando un dispositivo fácil de construir. Esto se logra quitando primero una o dos rejillas del congelador del hacedor para dejar espacio para maniobrar e insertando el dispositivo verticalmente en el hacedor. El segundo paso es raspar suavemente la parte inferior del hacedor con el dispositivo.

A continuación, tire del dispositivo en posición vertical a lo largo de las paredes del hacedor Para sacar la caja del congelador del tanque, el paso final es agarrar la caja recuperada de la parte inferior del hacedor y reemplazar las rejillas del congelador extraídas. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes como la decantación, la barra llena de nitrógeno líquido es que proporciona una alternativa fácil, segura y rápida, que preserva la integridad de la muestra y puede ser llevada a cabo por un solo operador. Para comenzar el ensamblaje del dispositivo criotolerante, use alicates para enderezar un lado de una brida fuerte de tres lados para hacer una brida fuerte LHA.

Como se ve aquí, las dimensiones del lazo fuerte se pueden seleccionar en función del diámetro del cuello del hacedor. Se deben hacer dos lazos tan fuertes para permitir que el dispositivo recupere cajas criogénicas de cinco pulgadas y media por cinco pulgadas y media. Asegúrelos con una correa TST de amarre fuerte con un perno de corona, una arandela de tuerca y un tornillo para formar la base de la pala criogénica.

El dispositivo ahora debería aparecer como se ve aquí. Ahora, usando una placa ranurada, alinee las ranuras de la tira de la T de lazo fuerte con las ranuras de un extremo de la placa ranurada. A continuación, asegure los dos juntos con tuercas y tornillos Hillman.

Taladre orificios para la fijación si la placa ranurada y las bridas fuertes no tienen orificios preperforados. Si se desea, se puede formar un mango doblando el otro extremo de la placa ranurada y envolviéndola con espuma. Para agarrar mejor el dispositivo, asegúrese de quitar la espuma antes de la cla de agua.

El dispositivo de recuperación de bricolaje tolerante a la crioterapia también se puede adaptar para la recuperación de viales criogénicos. Esto implica sustituir la base plana por un colador de acero inoxidable modificado para sacar los viales del líquido. Para comenzar el montaje, primero desatornille las tuercas y los pernos de la corona, fijando la fuerte tira en T del neumático a la placa ranurada.

Luego, antes de colocar el colador de acero inoxidable en la placa ranurada, doble suavemente el cuello del colador con la ayuda de unos alicates para orientar la base en un ángulo que se asemeje a un cucharón. Si el colador utilizado viene con un labio, use alicates para doblar el labio hacia abajo. Esto facilitará las maniobras con el dispositivo.

Alinee el orificio en el mango del colador junto con los orificios en la placa ranurada y asegure el colador con tuercas y pernos Hillman. Taladre agujeros si el colador no viene con agujeros preperforados. Para comenzar a recuperar las cajas criogénicas de un hacedor, asegúrese de ponerse primero guantes criogénicos.

A continuación, retire una o dos rejillas del congelador del hacedor para dejar espacio para maniobrar con el dispositivo. A continuación, use el dispositivo de recuperación de bricolaje vertical tolerante a la criofricidad equipado con la fuerte base de amarre ttra para raspar suavemente la parte inferior del hacedor y recoger la caja, caer en el fondo del tanque del hacedor. A continuación, tire del dispositivo en posición vertical a lo largo de las paredes del hacedor para sacar la caja del congelador del tanque.

Tenga en cuenta que el dispositivo debe sostenerse verticalmente y tirarse hacia arriba para evitar que la caja se deslice hacia atrás en el dispositivo. Para recuperar viales criogénicos, use la cuchara criogénica equipada con un colador para raspar suavemente la parte inferior del hacedor de manera similar a la recuperación de cajas criogénicas, tire del dispositivo en posición vertical y agarre los viales recolectados en el colador. Un desafío importante en los estudios de expresión génica es que la calidad del ARN depende de las condiciones de almacenamiento tanto para las muestras de tejido congelado como para el ARN extraído.

Esta figura muestra el efecto de la manipulación de la muestra en la integridad del ARN total, el ARN total de la misma fuente de tejido se sometió a una manipulación de muestras diferente antes del experimento, total intacto, la tasa de preparación de ARN muestra bandas claras de ARN ribosómico de 28 s y 18 s, con la banda de ARN ribosómico 28 s, aproximadamente dos veces más intensa que la banda de ARN ribosómico 18 s. Esta es una indicación de que el ARN está intacto. Los carriles tres y cuatro representan muestras con degradación significativa debido a la descongelación parcial repetida por recuperaciones a corto plazo del hacedor, modelando así el almacenamiento a largo plazo con decantación periódica debido a la necesidad de la recuperación de los viales caídos en cajas.

Sin embargo, las muestras almacenadas en el servicio de doer utilizando el dispositivo de bricolaje y, por lo tanto, sin descongelación parcial, contienen ARN intacto en el carril dos. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo recuperar muestras del dvar lleno de nitrógeno líquido sin la necesidad de decantarlo.