Name: Los filtros de lana de vidrio para la concentración de virus transmitidas por el agua y la agricultura patógenos zoonóticos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Aprende a construir filtros de lana de vidrio para concentrar patógenos transmitidos por el agua, incluyendo virus, bacterias y protozoos. Este método económico permite analizar muestras de gran volumen mediante técnicas culturales o moleculares.

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Damos las gracias a William T. Eckert para narrar el video. Desarrollo del protocolo de lana de vidrio era parte del agua de Wisconsin y de prueba de Riesgos de Salud (entéricos WAHTER Estudio), financiado por la EPA de EE.UU. Star Grant R831630. Alaska muestras fueron recogidas por A. Reeves, Ramey A. y B. Meixell con el apoyo financiero de la USGS. Cualquier uso de nombres comerciales, productos, o de una empresa es para propósitos descriptivos solamente y no implica aprobación por parte del Gobierno de los EE.UU..

1. Preparación de la lana de vidrio <ol><li> Antes y después de hacer cada lote de filtros, esterilizar el área de trabajo con una solución de lejía al 10%. </li><li> Póngase los guantes y la bata. Esterilizar un cubo en autoclave a 121 ° C y 15 psi durante al menos 20 minutos. Colocar la lana de vidrio en la cubeta estéril. </li><li> Saturar la lana de vidrio con agua de ósmosis inversa y deje en remojo durante 15 minutos. </li><li> Vacíe el agua de ósmosis inversa del cubo. </li><li> Saturar la lana de vidrio con HCl 1 M y deje en remojo durante 15 minutos. </li><li> Escurrir el HCl 1 M de la cubeta. </li><li> Lavar la lana de vidrio con agua de ósmosis inversa. </li><li> Mezclar bien. </li><li> Comprobar el pH con papel pH y repetir el agua de ósmosis inversa enjuague hasta un pH neutro se consigue. </li><li> Vierta el agua de enjuague. </li><li> Saturar la lana de vidrio con 1 M NaOH y deje en remojo durante 15 minutos. </li><li> Escurrir el NaOH 1 M de la cubeta. </li><li> Repita la ósmosis inversa enjuague hasta un pH neutro se consigue. </li><li> Vierta el agua de enjuague. </li><li> En lugar de un cubo, una arandela de lana de vidrio puede ser construida, que es similar en diseño a una lavadora de vidrio pipeta (Figura 1). </li><li> Cubrir la lana de vidrio completamente con fosfato estéril salino tamponado (PBS) se ajustó a pH 6,8. </li><li> El uso de lana de vidrio preparada inmediatamente o se almacena a 4 º C. Se puede almacenar por hasta dos semanas. Antes de utilizarlo, asegúrese de que el pH es neutro, ya que se incrementará con el tiempo. Si el pH no es neutral, vuelva a enjuagar con solución salina estéril tamponada de fosfato (pH 6,8). </li></ol> 2. Montaje del filtro de lana de vidrio <ol><li> Haga un agujero 11/16 pulgadas en las tapas de PVC y los hilos grifo por lo que los accesorios de adaptador macho de nylon pueden ser atornillados en las tapas. Este paso es necesario sólo para la primera asamblea. Posteriormente, las tapas pueden ser utilizados para años. Aplique teflónla cinta en las roscas de los tornillos y herrajes de nylon a las tapas. </li><li> Paquete de la tubería de PVC con pequeños trozos de lana de vidrio. Use un émbolo metálico, como una válvula de motor de un coche, para empacar apretado. Embalaje no requiere mucha fuerza. Pack suficientemente ajustado para que la lana de vidrio se mantiene en su lugar y no forman canales. Sin embargo, no se empaquetan tan fuertemente el agua no puede fluir a través del filtro. Cuando embalado apropiadamente, con un caudal de 4 a 5 litros por minuto debe ser alcanzable cuando el filtro está unido a los grifos de agua con presiones entre 40-60 psi. Por el tamaño de tubo de PVC se especifica en este protocolo, aproximadamente 85 gramos de lana lavada y lleno de vidrio se utiliza por tubo. Tara el vacío tubería de PVC en un equilibrio de carga superior y un paquete de lavado de lana de vidrio hasta que la masa aumenta tubo de 85 gramos. </li><li> Inserte la malla de polipropileno en las tapas de PVC con accesorios masculinos del adaptador de nylon atadas. </li><li> Aplique cinta de teflón a las partes roscadas de la tubería de PVC. </li><li> Tapas de rosca de PVC a la página de PVCIPE y la etiqueta de un extremo del filtro del flujo de entrada y el otro extremo de la salida. Esto es importante para la posterior etapa de elución. Lo cual se denomina entrada no importa. </li><li> Empuje 60 ml de solución salina estéril tamponada de fosfato (pH = 6,8) en el filtro utilizando un catéter con punta de jeringa. El exceso va a salir el extremo opuesto. </li><li> Envuelva bien termina con Parafilm para evitar fugas. Los filtros pueden ser almacenados hasta por 30 días a 4 ° C. </li></ol> 3. Muestreo <ol><li> Esterilizar tubería utilizada para el muestreo por recirculación o sumergiendo los elementos durante 30 minutos en% NaClO 0,525 (es decir, una solución al 10% de cloro de uso doméstico estándar). Sigue este drenando la solución de hipoclorito y neutralizar con tiosulfato de sodio al 0,05%, fabricado por la adición de 25 ml de un stock de 2% anhidro solución de tiosulfato de sodio a un litro de agua por ósmosis inversa. </li><li> Para la muestra de agua con un pH superior a 7,5, ajustar el pH entre 6,5 y 7,0 con HCl. Concentración de HCl puede variar desde 0,25M a 1 M. Cuatro litros HCl 0,5 M es generalmente suficiente para dos muestras de 800 litros, dependiendo del pH del ambiente del agua y la capacidad de almacenamiento en búfer. Inyectar HCl durante el muestreo utilizando una bomba peristáltica o venturi (Figura 2). Ajustar la velocidad de la bomba o abertura Venturi para lograr el pH deseado. Medir el pH a la salida de línea de la muestra utilizando un medidor de pH campo. </li><li> Utilice un filtro previo si se bloquea la lana de vidrio de filtro de agua con alta turbidez. (Las especificaciones para el prefiltro y su alojamiento están en la lista de materiales en línea.) Debido a que los patógenos se puede unir a las partículas atrapadas por el prefiltro debe eluyó junto con el filtro de lana de vidrio (véase más adelante). </li><li> Ajustar el flujo a entre 2 y 4 litros por minuto. Generalmente, los volúmenes de la muestra son entre 200 y 1.500 litros. </li><li> Desconecte el filtro de lana de vidrio y guardar en una bolsa de plástico estéril a 4 ° C durante un máximo de 48 horas. </li></ol> 4. Elución <ol><li> Coloque el filtro de lana de vidrio para un anilloreposar con el extremo afluencia muestra apuntando hacia abajo en una botella de polipropileno. Eluir opuesto de la dirección de flujo de la muestra. </li><li> Empuje 80 ml de extracto de carne de vaca estéril 3% en 0,05 M de glicina con un pH de 9,5 en el filtro. </li><li> Espere 15 minutos. </li><li> Empujar otro 80 ml de extracto de carne de vaca estéril 3% en 0,05 M de glicina con un pH de 9,5 en el filtro. </li><li> Empujar aire a fondo el filtro hasta que la espuma que sale de la entrada del filtro. </li><li> Ajustar el pH a eluido entre 7,0 y 7,5 con HCl 1 M. </li><li> Tienda eluato a 4 ° C durante hasta 24 horas o menos -20 ° C durante períodos más largos de tiempo. </li><li> Eluir el prefiltro si se usa uno. Desatornille la parte superior del cartucho de la vivienda y se vierte toda el agua residual en el interior de la vivienda mientras se mantiene el pre-filtro en su lugar con las manos enguantadas estériles. </li><li> Quite el filtro previo del cartucho de la vivienda y el deslizamiento en una de 15 &quot;x 6&quot; bolsa zip-lock. </li><li> Verter 200 ml de extracto de carne de vaca estéril 3% en 0,05 M glicina con un pH de 9,5 en la bolsa y sellar con seguridad con el cierre de cremallera. </li><li> Invertir la bolsa prefiltro varias veces para asegurar toda la superficie entra en contacto con el extracto de carne. </li><li> Espere 15 minutos, invirtiendo en ocasiones y el masaje del prefiltro en sacos. </li><li> Abra el zip-lock. Adherencia de la bolsa alrededor del prefiltro herméticamente para exprimir como extracto de carne tanto como sea posible y tire el prefiltro con estériles manos enguantadas,. </li><li> Verter el eluato extracto de carne en una botella de polipropileno. </li><li> Ajustar el pH a eluido entre 7,0 y 7,5 con HCl 1M. </li><li> Tienda eluato a 4 ° C durante hasta 24 horas o menos -20 ° C durante períodos más largos de tiempo. El eluato prefiltro puede ser analizado por separado para los agentes patógenos o combinado con el filtro de vidrio eluato lana. </li></ol> 5. Los resultados representativos <table border="1"><tbody><tr><td> Patógeno </td><td> Nivel de agua de turbidez (NTU) una </td><td> Cantidad Sembrado / L b, c, d </td><td> Recuperación% ± 1 </td><td> Número de ensayos independientes </td></tr><tr><td> Enterovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 0.5 </td><td> 500 </td><td> 81% ± 11 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Enterovirus poliovirus Sabin III </td><td> 0.5 </td><td> 5000 </td><td> 67% ± 12 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Enterovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 215 </td><td> 500 </td><td> 59% ± 32 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Enterovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 215 </td><td> 5000 </td><td> 38% ± 22 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Enterovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 56% ± 18 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Enterovirus-poliovirus Sabin III </td><td> 447 </td><td> 5000 </td><td> 63% ± 37 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0.5 </td><td> 5 </td><td> 38% ± 14 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0.5 </td><td> 50 </td><td> 53% ± 19 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Llorarptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 40% ± 16 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 50 </td><td> 30% ± 6 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 33% ± 13 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 50 </td><td> 28% ± 11 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0.5 </td><td> 5 </td><td> 29% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0.5 </td><td> 500 </td><td> 56% ± 16 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 32% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td&gt; <td> 215 </td><td> 500 </td><td> 34% ± 11 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 34% ± 18 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 31% ± 24 </td><td> 8 </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Unidades de Turbidez Nefelométrica </li><li> Los enterovirus se enumeran por qPCR como copias genómicas / L </li><li> C. parvum por inmunofluorescencia como se enumeran los ooquistes </li><li> S. enterica dividido por la cultura como formadoras de colonias de unidades </li></ol> Tabla 1. Vidrio concentración de lana con turbidez del agua y densidades diferentes patógenos. <table border="1"><tbody><tr><td> Patógeno </td><td> Localización de la Muestra de agua </td><td> Cantidad Granados / L a </td><td> Reco%<html> muy </td></tr><tr><td> La gripe aviar H5N2 </td><td> Sundi Lago, Municipio de Anchorage </td><td> 2500 </td><td> 42,9% </td></tr><tr><td> La gripe aviar H5N2 </td><td> Minto Pisos, Fairbanks North Star Borough </td><td> 2500 </td><td> 36,7% </td></tr><tr><td> La gripe aviar H5N2 </td><td> Portage Valley, condado de Anchorage </td><td> 2500 </td><td> 7,8% </td></tr><tr><td> La gripe aviar H5N2 </td><td> Potter Marsh, del condado de Anchorage </td><td> 2500 </td><td> 41,5% </td></tr><tr><td> La gripe aviar H5N2 </td><td> Willow Lake, Yukon-Koyukuk Municipio </td><td> 2500 </td><td> 15,5% </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Medido por qPCR como copias genómicas / L </li></ol> Tabla 2. La concentración de lana de vidrio de los virus de la gripe aviar, utilizando el agua de cinco sitios en Alaska. les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg &quot;alt =&quot; Figura 1 &quot;/&gt; Figura 1. Diagrama de la lavadora de lana de vidrio. Esto puede ser usado en lugar de un cubo, ahorrando tiempo de aclarado. El concepto es similar a una lavadora pipeta de vidrio. <img src="/files/ftp_upload/3930/3930fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Vidrio filtración lana con inyección de ácido por la bomba peristáltica. Tenga en cuenta la &quot;T&quot; donde la tubería de la bomba introduce ácido en la línea de muestreo entre el grifo del agua y el filtro de lana de vidrio. el ajuste del pH es necesaria sólo si la muestra de agua tiene un pH&gt; 7,5. Filtros de lana de vidrio son eficaces en la concentración de agentes patógenos de agua con una amplia gama de niveles de turbidez y densidades de patógenos (Tabla 1). Para probar esta, 20 litros de agua del grifo sin cloro se mezcló con limo seco suelo franco (0, 1,27, o 2,75 g / l) para alcanzar el nivel deseado de turbidez y luego se siembra con densidades diferentes agentes patógenos. El aguase pasó a través de un filtro de lana de vidrio, los patógenos concentrados en el eluato se enumeraron, y este valor era el numerador en el cálculo de recuperación por ciento. La cantidad de agentes patógenos sembradas en el agua, es decir, el denominador del cálculo porcentaje de recuperación, se determinó por primera siembra los patógenos en un eluato negativo, entonces la enumeración de los patógenos. El eluato negativo se preparó haciendo pasar una cabeza de serie 20 litros de muestra a través de un filtro y eluyendo. La cuantificación de los patógenos sembradas en un eluato negativo evita diferencias en la enumeración de patógeno que podría derivarse de diferencias de la matriz creada por el filtro de lana de vidrio. La importancia de esta etapa cuando la cuantificación de los patógenos por qPCR se discute en Lambertini et al. 3. Una muestra de 20 litros de control negativo se concentró por filtración de lana de vidrio para determinar que no eran patógenos presentes nativo que podrían confundir el cálculo de porcentaje de recuperación. Un 10 micras de tamaño de poro nominal prefiltro wtal como se utiliza cuando el nivel de turbidez fue ≥ 215 NTU. Poliovirus se cuantificó por PCR cuantitativa en tiempo real utilizando la concentración de secundaria y los procedimientos de extracción de ácidos nucleicos y los cebadores y la sonda se describe en Lambertini et al. 3. Cryptosporidium parvum se cuantificó en el volumen final de la muestra concentrada (FCSV) creado por el procedimiento de concentración secundaria de los poliovirus . Los ooquistes fueron visualizados por inmunofluorescencia (Cryptosporidium y Giardia MERIFLUOR Kit de detección, Meridian Life Science, Inc., Cincinnati, OH). Salmonella enterica se cuantificó en el FCSV en placas en agar XLD (Remel, Lenexa, KS) y contando con la formación de colonias- unidades. Filtros de lana de vidrio son eficaces en la concentración de virus de influenza aviar (Tabla 2). Virus de baja patogenicidad de la influenza aviar (H5N2) se sembró en el agua de varias localidades de Alaska y el porcentaje de recuperación calculado como se describe Above. Concentración secundaria y procedimientos de ácidos nucleicos se realizaron como para el poliovirus, el virus se cuantificó por qPCR utilizando los cebadores y sondas descritas en Spackman et al 4.

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</ol>

No hay conflictos de intereses declarados.

Filtros de lana de vidrio han sido utilizados por diversos equipos de investigación 3,5,6 para concentrar virus entéricos humanos a partir de una variedad de fuentes de agua tales como agua potable terminado 7, el agua subterránea 8,9, el agua superficial 10, 11 de agua de mar, las aguas residuales 12, y escorrentía agrícola 13. Aquí mostramos los filtros también son eficaces en la concentración de virus de influenza aviar, así como los agentes patógenos ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre de reactivo o elemento </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Ácido clorhídrico </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> A144-500 </td></tr><tr><td height="24"> Hidróxido de sodio </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> BP359-212 </td></tr><tr><td> Tampón fosfato salino Cloruro de sodio Fosfato potásico dibásico- Fosfato potásico monobásico- </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td><html> BP358-212 BP363-500 BP362-500 </td></tr><tr><td> El hipoclorito de sodio, es decir, cloro de uso doméstico </td><td> <a href="http://www.clorox.com" target="_blank">La Compañía Clorox</a> </td><td></td></tr><tr><td> El tiosulfato de sodio, anhidro </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> S 475-212 </td></tr><tr><td> Extracto de carne, desecado </td><td> <a href="http://www.bd.com" target="_blank">Becton, Dickinson and Company</a> </td><td> 211520 </td></tr><tr><td> Glicina </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> G46-500 </td></tr><tr><td> Lana de vidrio engrasado sodocalcic O R-11 de fibra de vidrio aislamiento no revestido </td><td> <a href="http://www.isover.com" target="_blank">Isover</a> <html> ref = &quot;http://www.jm.com&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Johns Manville </td><td> Bourre 725 QN </td></tr><tr><td> Malla de polipropileno </td><td> <a href="http://www.industrialnetting.com" target="_blank">Redes Industriales</a> </td><td> xN4510 </td></tr><tr><td> 2 &quot;x 4&quot; PVC Sch 80 niple roscado </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 6MW35 </td></tr><tr><td> 2 &quot;cédula 40 de PVC tapa </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 5WDW3 </td></tr><tr><td> Adaptador macho de nylon (1/2 &quot;x1 / 2&quot;) </td><td> <a href="http://www.usplastic.com" target="_blank">EE.UU. Plastic Corp.</a> </td><td> 62178 </td></tr><tr><td> Recipientes de las muestras de efluente de 1 litro </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> 03 a 313-4F </td></tr><tr><td> 60 ml jeringa </td><td>&quot;Http://www.fishersci.com&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Fisher Scientific </td><td> NC9661991 </td></tr><tr><td> tiras de pH </td><td> <a href="http://www.whatman.com" target="_blank">Whatman</a> </td><td> 2614 991 </td></tr><tr><td> Prefiltro, polipropileno, 10 cartuchos pulgadas, 10 m </td><td> McMaster-Carr </td><td> 4411K75 </td></tr><tr><td> Prefiltro de vivienda </td><td> Cole-Parmer </td><td> S-29820-10 </td></tr></tbody></table>

los filtros de lana de vidrio para la concentración de virus transmitidas por el agua y la agricultura patógenos zoonóticos

Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens

El primer paso clave en la evaluación de los niveles de patógenos en el agua contaminada se sospecha es la concentración. Los métodos de concentración tienden a ser específicas para un grupo determinado patógeno, por ejemplo Protección Ambiental de EE.UU. Agencia Método 1623 para Giardia y Cryptosporidium 1, lo que significa que múltiples métodos son necesarios si el programa de muestreo se dirige a más de un grupo de patógenos. Otro inconveniente de los métodos actuales es el equipo puede ser complicado y caro, por ejemplo el método VIRADEL con el filtro de cartucho 1MDS para concentrar los virus 2. En este artículo se describe cómo construir filtros de lana de vidrio para la concentración de patógenos en el agua. Después de la elución de filtro, el concentrado es susceptible de una segunda etapa de concentración, tales como centrifugación, seguido por la detección de patógenos y la enumeración de los métodos de cultivo o molecular. Los filtros tienen varias ventajas. La construcción es sencilla y los filtros se pueden construir a unny el tamaño para satisfacer las necesidades específicas de muestreo. Las partes del filtro son baratos, por lo que es posible recoger un gran número de muestras sin afectar gravemente un presupuesto del proyecto. Los grandes volúmenes de muestra (100s a 1.000 s L) se puede concentrar en función de la tasa de obstrucción de turbidez de la muestra. Los filtros son fáciles de transportar y con un equipo mínimo, como una bomba y un medidor de flujo, se pueden implementar en el campo para el muestreo de agua potable final, las aguas superficiales, aguas subterráneas, y la escorrentía agrícola. Por último, la filtración de lana de vidrio es eficaz para concentrar una variedad de tipos de patógenos tan sólo un método es necesario. Aquí nos informe sobre la eficacia del filtro en la concentración de enterovirus humanos transmitidas por el agua, S ALMONELLA enterica, Cryptosporidium parvum, y el virus de la gripe aviar.

Filtros de lana de vidrio se han utilizado para concentrar los virus transmitidos por el agua por un número de grupos de investigación en todo el mundo. Aquí se muestra un método sencillo para la construcción de filtros de lana de vidrio y demostrar los filtros también son eficaces en la concentración de patógenos transmitidos por el agua virus, bacterias y protozoos.

Los filtros de lana de vidrio para la concentración de virus transmitidas por el agua y la agricultura patógenos zoonóticos

El primer paso fundamental para evaluar los niveles de patógenos en agua presuntamente contaminada es la concentración. Los métodos de concentración tienden a ser específicos para un...

El objetivo general de este procedimiento es crear un filtro económico y eficaz para concentrar una amplia variedad de patógenos acuáticos a partir de grandes volúmenes de agua. La construcción del filtro se lleva a cabo primero enjuagando la lana de vidrio, lavándola con un ácido y una base, y volviendo a enjuagar la lana hasta alcanzar un pH neutro. A continuación, la lana de vidrio se enjuaga con solución salina tamponada con fosfatos.En el siguiente paso, la lana de vidrio se compacta dentro de un tubo de PVC para formar el filtro de lana de vidrio. Después de utilizar el filtro para la toma de muestras de agua, se realiza un paso de elución. La muestra puede entonces almacenarse, concentrarse más o proceder a su análisis para patógenos mediante métodos culturales o moleculares.Las enfermedades transmitidas por el agua representan una amenaza importante para la salud pública. La transmisión de enfermedades a nivel mundial puede ocurrir a través del agua potable y de actividades recreativas en el agua. Un enfoque para evaluar la calidad sanitaria del agua consiste en analizarla directamente en busca de patógenos causantes de enfermedades.Existen varias ventajas al utilizar filtr

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

La tasa de rotación de los virus en los sistemas marinos y de agua dulce puede ser estimado por una reducción de la recurrencia y la técnica. Los datos permiten a los investigadores a deducir las tasas de mortalidad microbiana mediada por el virus en los sistemas acuáticos.

Estimación de las tasas de producción de virus en los sistemas acuáticos

Este protocolo se describe el uso de un flujo tangencial de fibra hueca sistema de ultrafiltración concentración de la muestra y una disociación calor como pasos alternativos para la detección de vías...

Una modificación de la EPA Método 1623 que utiliza el flujo tangencial de fibra hueca de ultrafiltración y la Plaza de calor de disociación para detectar a base de agua<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Y<em&gt; Esp.</em

Se desarrolló un enfoque para identificar las condiciones óptimas de concentración viral para muestras de agua de pequeño volumen utilizando picos de adenovirus humano. Las técnicas descritas aquí se utilizan para identificar parámetros de concentración para otros objetivos virales y se aplican a la experimentación de concentración viral a gran escala.

Un procedimiento de volumen pequeño para la concentración viral del Agua

El Método EPA 1615 utiliza un filtro electropositivo para concentrar enterovirus y norovirus en aguas ambientales y potables. Este manuscrito describe el procedimiento para recolectar muestras para los análisis del Método 1615.

Método EPA 1615. La medición de enterovirus y norovirus Ocurrencia en agua por cultura y RT-qPCR. I. Colección de ejemplos de virus

Un anión intercambio método basado en la resina, adaptado para muestreo de bioaerosol basado en el choque de los virus se demuestra el líquido. Cuando se combina con detección molecular aguas abajo, el método permite la detección fácil y sensible de virus de bioaerosoles.

Detección de virus de bioaerosoles utilizando resina de intercambio aniónico

Las bacterias secretan vesículas extracelulares (EV) de tamaño nanométrico que transportan moléculas biológicas bioactivas. La investigación EV se centra en comprender su biogénesis, su papel en las interacciones y enfermedades microbio-microbio y huésped-microbio, así como sus posibles aplicaciones terapéuticas. Se presenta un flujo de trabajo para el aislamiento escalable de vehículos eléctricos de varias bacterias para facilitar la estandarización de la investigación de vehículos eléctricos.

Aislamiento escalable y purificación de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias

Se han encontrado numerosas secuencias nuevas similares a virus en mosquitos debido al uso extensivo de tecnologías de secuenciación. Proporcionamos un procedimiento eficaz para aislar y amplificar virus utilizando líneas celulares de vertebrados y mosquitos, que podría servir como base para futuros estudios sobre virus asociados a mosquitos, incluidos los virus transmitidos por mosquitos y específicos de mosquitos.

Aislamiento de virus asociados a mosquitos de mosquitos recolectados en el campo

La concentración de virus a partir de muestras ambientales de agua y aguas residuales es una tarea desafiante, llevada a cabo principalmente para la identificación y cuantificación de virus. Si bien se han desarrollado y probado varios métodos de concentración de virus, demostramos aquí la efectividad de la ultrafiltración y la floculación de leche desnatada para virus de ARN con diferentes tipos de muestras.

Concentración de partículas de virus de muestras ambientales de agua y aguas residuales mediante floculación y ultrafiltración de leche desnatada

Aquí, describimos métodos de muestreo de las zonas eufóticas de los ecosistemas marinos y de agua dulce para aislar cianofagos (y sus huéspedes) y procesos posteriores al muestreo que enriquecen genotipos individuales y caracterizan la dinámica de interacción virus-huésped.

Muestreo ambiental de microbios fotosintéticos y sus virus: del campo al laboratorio

Aquí presentamos un estudio para evaluar la eficacia antiviral de los recubrimientos superficiales a base de cobre y plata en filtros de aire. Utilizando una cámara de bioaerosoles y bacteriófagos Phi6, este método cuantifica la inactivación viral y la eficiencia de filtración mecánica para tecnologías de aire interior autodesinfectantes.

Evaluación del efecto de los filtros y prefiltros recubiertos sobre la infectividad y concentración del virus Phi6 aerosolizado

Aprende a construir filtros de lana de vidrio para concentrar patógenos transmitidos por el agua, incluyendo virus, bacterias y protozoos. Este método económico permite analizar muestras de gran volumen mediante técnicas culturales o moleculares.

Los filtros de lana de vidrio para la concentración de virus transmitidas por el agua y la agricultura patógenos zoonóticos

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