Ovariectomía y 17β-estradiol reemplazo en ratas y ratones: una demostración visual

El objetivo general de este procedimiento es obtener un control estricto sobre las concentraciones séricas de estrógeno, que de otro modo fluctuarían, en ratas y ratones hembra. Esto se logra primero mediante la extirpación de los ovarios por la vía dorsal. A continuación, se preparan cápsulas de cel elástica y una mezcla de Nutella.

Finalmente, se inserta una cápsula por vía subcutánea, o se administra la mezcla de Nutella por vía oral. En última instancia, los resultados pueden obtenerse mediante radioinmunoensayo, que muestra concentraciones estables o fluctuantes de 17 beta-estradiol sérico para los métodos de cápsula y Nutella, respectivamente. La ventaja principal de estas técnicas frente a métodos existentes como los comprimidos de liberación lenta es que se ha demostrado que producen concentraciones fisiológicas de estradiol durante períodos prolongados de tiempo.

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del estrógeno, como las diferencias en los efectos entre la administración, las raíces y las dosis. Después de anestesiar al animal, colóquelo en posición prona sobre una placa calefactora conectada a un termómetro rectal. Aplique IGEL y para alivio postoperatorio en la cara lateral del cuello del animal por vía subcutánea.

Administre cinco miligramos por kilogramo de IL en solución salina anteriormente desde la cresta ilíaca en un área de cuatro por cuatro centímetros. Luego desinfecte el área con un antiséptico antes de cubrir al animal con una hoja quirúrgica de cuatro por cuatro centímetros de apertura. Realice una incisión media de dos a tres centímetros y separe por disección roma la piel de la fascia subyacente, un centímetro lateral a la línea media.

Realice otra incisión a través de la fascia. Luego, lo más superficialmente posible, disecte lateralmente de forma roma bajo esta fascia hasta alcanzar la cavidad abdominal. Usando pinzas, agarre el tejido adiposo que rodea el ovario en la cavidad abdominal y extráigalo suavemente.

Identifique el ovario y ligue los cuernos uterinos y los vasos a 0,5 a un centímetro proximalmente a esta estructura. Extraiga el ovario y el tejido adiposo ligado y coloque el tejido restante de vuelta en la cavidad abdominal.

Realice otra incisión en la fascia contralateral y extraiga el otro ovario. Cierre las heridas y, si no va a administrar inmediatamente 17 beta estradiol, permita que el animal despierte de la anestesia.

Coloque el animal en una jaula calentada durante al menos dos horas después de la cirugía. Mantenga la rata separada durante los primeros días posteriores a la cirugía. 24 horas después de la cirugía, por vía subcutánea.

Inyecte a los animales con otros cinco miligramos por kilogramo de IL para administrar 17 beta-estradiol mediante cápsulas de silastic. Mezcle completamente la cantidad deseada en aceite de sésamo. Corte trozos de tubo de silastic de tres centímetros de longitud y trozos de palillos aplicadores de madera de cinco milímetros de longitud para taponar usando pinzas.

Introduzca un tapón de madera en la cápsula escolar antes de inyectar la solución de 17 beta estradiol en aceite de sésamo. Para llenar toda la longitud, tape suavemente el extremo abierto de la cápsula escolar con otro tapón de madera. Incube las cápsulas en la solución restante de 17 beta estradiol durante la noche antes de la implantación.

Después de cerrar las incisiones de la ectomía, afeite y desinfecte un área cuadrada de dos por dos centímetros en la cara dorsal del cuello de la rata. Realice una incisión de un centímetro y seccione el cordón lateralmente de forma roma. Diseque un bolsillo subcutáneo creando suficiente espacio para la cápsula.

Limpie la cápsula escolar e insértela suavemente a través de la incisión. Luego cierre la incisión con una sutura. Asegúrese de que la cápsula tense la piel lo menos posible, especialmente alrededor de la herida.

Para utilizar la crema de nueces Nutella como medio de administración de estrógeno, disuelva completamente el 17 beta-estradiol en aceite de sésamo y luego mezcle el aceite de sésamo con la crema de nueces. Prepare una crema de nueces placebo sin el 17 beta-estradiol cinco días antes del experimento. Entrene a las ratas para que consuman la crema de nueces libre de hormonas desde el día uno hasta el tres.

Entrene a los animales en grupos durante los días cuarto y quinto. Aliméntelos con la crema de nuez en jaulas separadas durante todo el experimento. Coloque a los animales en jaulas separadas cuando se les administre el suero fisiológico de crema de nuez.

Las concentraciones de estradiol 17 beta, que los métodos actuales pretenden reproducir, son aproximadamente de cinco a 140 picogramos por mililitro para ratas y de cinco a 35 picogramos por mililitro para ratones. Como se muestra aquí, cuando se administran a ratas hembra Sprague Dawley de 300 gramos.

Las cápsulas elásticas subcutáneas producen concentraciones séricas de 17 beta estradiol que disminuyen lentamente, desde aproximadamente 40 picogramos por mililitro en el día dos hasta 10 picogramos por mililitro en el día 35. Sin embargo, inmediatamente después de la administración, se puede esperar un pico de concentración sérica de aproximadamente 1000 picogramos por mililitro, que cae al rango fisiológico dentro de las ocho horas siguientes cuando las cápsulas se administran a ratones hembra C 57 negro seis de 25 gramos.

La concentración sérica disminuyó lentamente desde aproximadamente 90 picogramos por mililitro en el día dos hasta 25 picogramos por mililitro en el día 35 al administrarse mediante la crema de nueces a 300 gramos. Spra de ratas. Los niveles fisiológicos de 17 beta estradiol fluctuaron diariamente entre 10 y 70 picogramos por mililitro en ratones.

Los niveles de estradiol 17 beta fluctuaron entre 20 y 120 picogramos por mililitro. Una vez dominada, la técnica de ectomía e implantación de la cápsula puede realizarse en 10 minutos si se realiza adecuadamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar adherirse estrictamente a las pautas de higiene.