Name: Fabricación y Aplicación de Rosa de Bengala-quitosano Films en Tissue Repair Laser (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
Description: Aprende a fabricar adhesivos de quitosano activados por láser con rosa de Bengala para reparación de nervios periféricos en ratas. Este método minimiza el daño tisular comparado con suturas tradicionales.

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Este trabajo fue apoyado por la Beca de Investigación UWS.

1. Chitosan adhesiva Preparación <ol><li> El polvo de quitosano es soluble en solución de ácido acético; para la preparación de una solución madre de ácido acético (2% v / v), añadir 10 ml de ácido acético glacial a 490 ml de agua desionizada (DI-H 2 O). </li><li> Para la preparación de una solución madre de Rosa de Bengala (RB) (0,01% w / v) en ácido acético, pesan 5 mg de RB en un vial envuelto con papel de aluminio para evitar la fotodecoloración. Añadir 0,5 ml de DI-H 2 O para disolver el polvo a continuación, añadir 49,5 ml de solución de ácido acético acciones (que se describe en la sección 1.1). </li><li> Para la preparación de quitosano solución (1,7% w / v), pesan 0,85 g de polvo de quitosano (MW medio, 85% grado de acetilación) y añadir a 50 ml de solución de ácido acético RB. El control se preparó por disolución de quitosán en la solución de ácido acético sin RB. </li><li> Añadir un agitador magnético a la mezcla de quitosano y se agita a temperatura ambiente. Para asegurar la disolución completa de los componentes, se agita la quitosanaen ácido acético + RB durante dos semanas y el quitosano en ácido acético durante 5 días (control). Cuando quitosano se disuelve, el pH de la solución aumenta desde ~ 2,6 a ~ 3,9. Tenga en cuenta que RB es poco soluble en pH ácido y que requiere un aumento en el pH de la solución y un tiempo prolongado de agitación para disolver. </li><li> Centrifugar las soluciones a 3270 xg durante 1 hora y se recoge el sobrenadante usando, por ejemplo, una jeringa estéril de 10 ml. Asegúrese de no molestar a la impureza de pellets. Durante este paso, la solución se limpia de impurezas macroscópicas y la materia insoluble. </li><li> Se inyecta la solución (centrifuga) quitosano en una losa perpex plana utilizando una jeringa estéril. El espesor de la película seca depende de la relación entre la cantidad dispensada de la solución y el área de superficie sobre la que se extiende la solución. Asegúrese de que la solución está libre de burbujas de aire y se extendió uniformemente sobre la losa. Para obtener películas delgadas con un espesor de 13 micras ~, ~ inyectar 1 ml de solución de más de 12 cm 2 de superficieárea (dimensiones 3x4 cm ~, Figura 1A). </li><li> Cubrir la placa de plexiglás con una pantalla, de lámina de aluminio por ejemplo, para evitar la fotodecoloración de la solución. Asegúrese de que la ventilación de aire suficiente, se garantiza que se seque la solución bajo la pantalla. </li><li> Agregar la solución se seque a temperatura ambiente (25 ° C) y presión (1 atm) hasta que la película resultante es insoluble en agua y no se hincha macroscópicamente. Esto se consigue típicamente en 2 semanas. </li><li> Separe las películas cuidadosamente con una espátula delgada y plana: estas películas se pueden despegar fácilmente el bloque de metacrilato sin dañarlos. </li><li> Medir el espesor de las películas utilizando un micrómetro. </li><li> Cortar el adhesivo en tiras rectangulares con una tijera afilada y limpia y colocarlos entre las diapositivas de vidrio estériles para preservar su forma plana. Envuelva las diapositivas en papel de aluminio para blindaje de luz y almacenar a temperatura ambiente. Etiquetar los adhesivos con o sin RB como &quot;rosa adhesivo&quot; o &quot;ADHES quitosanoive &quot;, respectivamente. </li><li> La rosa películas adhesivas se pueden esterilizar utilizando etanol (90%) o con radiación gamma (0,1 kGy / h durante 24 h) 4,5. </li></ol> 2. Atenuación óptica adhesivo <ol><li> Fije el adhesivo de color de rosa en el interior de una cubeta de cuarzo. </li><li> Registrar su espectro atenuada en el intervalo de 400 a 800 nm utilizando un espectrofotómetro de doble haz 4. </li><li> Suponiendo que la validez de la ley de Beer, el cálculo de la longitud de atenuación del adhesivo de la siguiente manera: I = I 0 e-Ax donde 0 es la intensidad del haz incidente, 1 / A es la longitud de atenuación, y x es el espesor de la película. </li><li> Repetir los pasos desde 2,1 hasta 2,3 para el adhesivo de quitosano para servir como un control. </li></ol> 3 En la solicitud de Vitro:. Láser unión del tejido en el intestino <ol><li> Harvest intestino de ternera inmediatamente después de la eutanasia de animales y se almacena a -80 ° C. </li><li> Antes de su uso, descongelar y el hidrato de tincidencia sumergiéndolo en DI-H 2 O durante 10 min. </li><li> Bisecar el tejido en secciones (2 x 1 cm) usando una cuchilla # 10 bajo un microscopio de operaciones (x10). Mantenga la humedad de las secciones usando DI-H 2 O. </li><li> Lleve los tocones incisión muy juntos (de extremo a extremo). Limpie el exceso de agua de la superficie con puntas de algodón. </li><li> Colocar una tira de adhesivo rosa (10 x 6 mm) a través de la incisión en la capa serosa con microforceps asegurando un contacto completo con el intestino (Figura 2). </li><li> La adherencia del tejido del adhesivo rosa se ​​activa mediante un láser bombeado por diodo de estado sólido, que está acoplado a una fibra óptica multimodo (diámetro del núcleo de 200 micras) 4. </li><li> Establecer el nivel de potencia del láser de 180 mW e irradiar el adhesivo para ~ 6 min con un tamaño de punto del haz de ~ 5 mm, utilizando los parámetros listados en la Tabla 1. Terreno irradiar el adhesivo asegurar que cada punto se irradió durante ~ 5 segundos antes de pasar el haz al punto adyacente. Tsu procedimiento garantiza que el haz de láser explora toda la superficie de las varias veces adhesivas. </li><li> Para evaluar la resistencia de la unión de tejido, una muestra de la abrazadera a un tensiómetro de columna calibrada único (Instron, MA, EE.UU.), utilizando mordazas mecánicas. Mover las empuñaduras en 22 mm / min hasta que los dos muñones de tejido separadas 4. </li><li> Coloque un adhesivo de color de rosa en el tejido como se describe en el paso 3.5. No irradiar la muestra y medir la resistencia de la unión de tejido como se describe en el paso 3,8. Este ejemplo sirve como control. </li></ol> 4 En la solicitud Vivo:. Anastomosis del nervio tibial <ol><li> Sedate la rata Wistar con isoflurano / O 2 mezcla (4% durante la inducción, 2% en adelante) 5. Inyectar por vía subcutánea Buprenex (0,03 mg / kg) para proporcionar intra-operatoria actividad analgésica y aliviar el dolor o incomodidad posible. </li><li> El procedimiento quirúrgico siguiente debe realizarse bajo un microscopio de operaciones (x10). Hacer una piel oblicuoincisión de unos 3 cm de largo en la parte dorso-lateral del muslo derecho y exponer el nervio tibial con un enfoque de división de músculo a través de los músculos de los glúteos 2. </li><li> Parcialmente diseccionar y cortar la adventicia del nervio tibial utilizando micro-tijeras rectas y absorber el exceso de agua con una gasa estéril o puntas de algodón. </li><li> Cortar el nervio tibial con micro-tijeras. </li><li> Posicionar una tira estéril de quitosano (dimensiones 5 x 4 mm) por debajo del nervio tibial utilizando micro-pinza. </li><li> Aproximado de los muñones del nervio extremo a extremo con micro-pinza sobre la tira adhesiva rosa. </li><li> La tira se adhiere plenamente a la del nervio que forma un collar, que puede ayudar en la rotación del nervio durante la irradiación con láser de la tira. </li><li> Activar el adhesivo se elevó con el láser como se describe en los pasos 3,6) y 3,7). </li><li> Recortar el adhesivo redundante aumentó desde el collar del nervio operado. </li><li> Cierre los músculos y la piel, con cinco puntos de sutura 3-0 5. </li&gt; <li> Estándar postoperatorias procedimientos de recuperación se deben seguir incluyendo la inspección diaria de dehiscencia o formación de pus y la administración de analgésicos, si es necesario. </li></ol> 5. Los resultados representativos Las películas que se obtienen son de color rosa brillante, fino y tener una superficie lisa (figura 1). Ellos también son flexibles y se puede enrollar en tubos de pequeño diámetro sin lágrimas que causan o cualquier otro daño aparente (Figura 1B). El adhesivo rosa tiene dos picos de absorción a 530 y 562 nm, el láser verde es así fuertemente absorbida por el adhesivo y la longitud de atenuación correspondiente a 532 nm es de ~ 12 m (Figura 3). En contraste, las películas de quitosano sin RB atenúa débilmente el láser (1 / a ~ 162 micras), probablemente debido a la dispersión. Se desprende de la trama espectros que ninguna agregación significativa de RB ocurre en las películas. La rosa uniones adhesivas firmementeal intestino tras la irradiación con láser (Figura 2) lograr una carga máxima típica en el fracaso de 0,9 ± 0,4 N (n = 30). La fuerza adhesiva se estimó como la carga máxima dividida por el área de la superficie adhesiva, a saber, 15 ± 6 kPa (n = 30). El adhesivo no irradiado rosa unido significativamente menor en el tejido (2 ± 2 kPa, n = 30, prueba t no pareada p &lt;10 6). La anastomosis in-vivo del nervio tibial se logró con éxito después de la aplicación y la unión del adhesivo rosa en conjunto con el láser verde. Una semana después de la operación, el nervio operado estaba en la continuidad y la fuerza de reparación fue de 17 ± 9 kPa (n = 10). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig1.jpg" /> Figura 1. A) La solución RB-quitosano es fundido en un plano Perspex losa (espesor de la losa ~ 5 mm). Papel de gráfico se coloca debajo de la losa para facilitar el paso seco de fundición. La f insoluble en aguailm se obtuvieron dos semanas después de la fundición. B) El adhesivo rosa es flexible y puede ser enrollado en un cilindro pequeño. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig2.jpg" /> Figura 2. El adhesivo rosa está unido al intestino de ternera después de la irradiación láser. Irradiación uniforme se aplica sobre el adhesivo RB durante adhesión a tejidos; manchas sin embargo seleccionados se muestran en esta imagen para ilustrar el efecto foto-blanqueamiento del láser sobre el adhesivo. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4158/4158fig3.jpg" /> Figura 3. El espectro de absorción (en unidades arbitrarias) del adhesivo rosa muestra dos picos a 530 y 562 nm. El láser verde (λ = 532 nm) es por lo tanto fuertemente absorbida por el adhesivo durante la exposición al láser. El adhesivo de quitosano sin RB absorbe mal el haz de láser. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> n </td><td><strong&gt; Area (mm 2) </td><td> Potencia (W) </td><td> Tiempo (s) </td><td> Fluence (J / cm 2) </td><td> I (W / cm 2) </td><td> Max Load / Area (kPa) </td></tr><tr><td> Adhesivo + Laser </td><td> 30 </td><td> 60 ± 10 </td><td> 0,18 ± 0,03 </td><td> 365 ± 5 </td><td> ~ 110 </td><td> 0,9 ~ </td><td> 15 ± 1 </td></tr><tr><td> Adhesivo </td><td> 30 </td><td> 60 ± 10 </td><td> NA </td><td> NA </td><td> NA </td><td> NA </td><td> 2 ± 2 </td></tr></tbody></table> Tabla 1. Legend. n, número de muestra, área, superficie del adhesivo rosa (media ± error máximo); energía, potencia del láser (media ± error máximo); Tiempo, tiempo de irradiación (media ± error máximo); Fluence, fluencia del láser promedio, I, estimado irradiance; máximo de carga / área, carga máxima a fallo del tejido reparado dividido por el área de la superficie adhesiva, (media ± SE).

<ol><li>O'Neill, A. C., Winograd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+anastomosis+using+a+photochemical+tissue+bonding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Microvascular anastomosis using a photochemical tissue bonding technique.</a> Lasers Surg. Med. 39, 716-722 (2007).</li>
<li>Yao, M., Yaroslavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxicity+is+not+associated+with+photochemical+tissue+bonding+of+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Phototoxicity is not associated with photochemical tissue bonding of skin.</a> Lasers Surg. Med. 42, 123-131 (2010).</li>
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<li>Pini, R., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+the+closure+of+the+lens+capsule+by+laser+welding%5BTitle%5D)+AND+%22Ophtalmic+Surgery+Lasers+%26+Imaging%22%5BJournal%5D)">A new technique for the closure of the lens capsule by laser welding.</a> Ophtalmic Surgery Lasers & Imaging. 39, 260-2626 (2008).</li>
<li>Wieken, K., Angioi-Duprez, K., Lim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+anastomosis+with+glue%3A+comparative+histologic+study+of+fibrin+and+cyanoacrylate+glue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Nerve anastomosis with glue: comparative histologic study of fibrin and cyanoacrylate glue.</a> J. Reconstr. Microsurg. 19, 17-20 (2003).</li>
<li>Menovsky, T., Beek, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser%2C+fibrin+glue%2C+or+suture+repair+of+peripheral+nerves%3A+a+comparative+functional%2C+histological%2C+and+morphometric+study+in+the+rat+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Laser, fibrin glue, or suture repair of peripheral nerves: a comparative functional, histological, and morphometric study in the rat sciatic nerve.</a> J. Neurosurg. 95, 694-699 (2001).</li>
<li>García, P., Jorge, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+the+mechanical+behavior+of+a+cyanoacrylate+and+a+bioadhesive%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Sci.+Mater.+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative study of the mechanical behavior of a cyanoacrylate and a bioadhesive.</a> J. Mater. Sci. Mater. Med. 15, 109-115 (2004).</li>
<li>Lauto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+extracellular+matrix+with+chitosan+adhesive+film+for+sutureless+tissue+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg.+Med%22%5BJournal%5D)">Integration of extracellular matrix with chitosan adhesive film for sutureless tissue fixation.</a> Lasers Surg. Med. 41, 366-371 (2009).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

La rosa fabricación adhesivo se basa en un sencillo proceso en seco fundido, aunque la disolución de RB en pH ácido requiere agitación prolongada de la solución de quitosano. Es importante dejar que la solución se seque hasta que se convierte en una película insoluble en agua. Esto sucede cuando el contenido en peso de agua es de ~ 10% en la película seca 6. Películas insolubles se obtienen normalmente después de 2 semanas en seco de colada en condiciones estándar de temperatura y presión (~ 25 ° C y ~ 1 atm)...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Rosa de Bengala </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 632-69-9 </td><td></td></tr><tr><td> Quitosano (MW medio) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 10318AJ </td><td></td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 08050051 </td><td> 2% v / v en agua DI </td></tr><tr><td> Agitador magnético </td><td> Heidolph </td><td> MR Hei-Mix S </td><td></td></tr><tr><td> Centrífugo </td><td> Beckman Coulter </td><td> Allegra X-12R </td><td></td></tr><tr><td> Espectrofotómetro </td><td> Varian </td><td> Cary 4000 UV-Visible </td><td></td></tr><tr><td> Láser </td><td> CNI Laser </td><td> MGL-532 </td><td></td></tr><tr><td> Micrómetro </td><td> Mitutoyo </td><td> Serie 227 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio quirúrgico </td><td> Zeiss </td><td> OPMI </td><td></td></tr></tbody></table>

fabricación y aplicación de rosa de bengala-quitosano films en tissue repair laser

Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair

Adhesión tisular fotoquímica (PTB) es una técnica de sutura para la reparación de tejidos, que se consigue mediante la aplicación de una solución de rosa de bengala (RB) entre dos bordes de tejido 1,2. Estos son entonces irradiado por un láser que es absorbida selectivamente por la RB. Las reacciones fotoquímicas resultantes supuestamente reticular las fibras de colágeno en el tejido con una mínima producción de calor 3. En este informe, RB se ha incorporado en delgadas películas de quitosano para la fabricación de un adhesivo de tejido nuevo que es activado por láser. Las películas adhesivas, basado en quitosano y que contiene ~ 0,1% en peso de RB, se fabrican y se une a intestino de ternero y nervios tibiales de rata por un láser de estado sólido (λ = 532 nm, la fluencia ~ 110 J / cm 2, tamaño de la mancha ~ 0,5 cm) . Un tensiómetro sola columna, en interfaz con un ordenador personal, se utiliza para probar la resistencia de unión. El RB-quitosano adhesivas bonos firmemente al intestino con una resistencia de 15 ± 6 kPa, (n = 30). La fuerza de adhesión se reduce a 2 yplusmn; 2 kPa (n = 30) cuando el láser no se aplica al adhesivo. La anastomosis de los nervios tibial también se puede realizar sin el uso de suturas. Una novela quitosano adhesivo ha sido fabricado de que los bonos fotoquímicamente al tejido y no requiere suturas.

Las suturas son generalmente necesarios para reparar el tejido durante los procedimientos quirúrgicos. Sin embargo, su aplicación puede ser problemático, ya que son invasivos y pueden dañar el tejido. Los métodos de fabricación y aplicación de un adhesivo tisular novela se informó aquí. Esta película de adhesivo se activa por láser y no requiere el uso de suturas.

Fabricación y Aplicación de Rosa de Bengala-quitosano Films en Tissue Repair Laser

La unión tisular fotoquímica (PTB, por sus siglas en inglés) es una técnica de reparación tisular sin suturas que se logra aplicando una solución de rosa de Bengala (RB) entre dos...

El objetivo general de este procedimiento es fabricar un adhesivo de quitosano activado por láser e ilustrar cómo aplicarlo durante la reparación de nervios periféricos. Esto se logra primero disolviendo quitosano y polvo de verde brillante en una solución de ácido acético. El segundo paso del procedimiento consiste en verter la solución y secarla para obtener una película delgada.El tercer paso consiste en exponer el nervio de la rata y disecarlo. El paso final es colocar la película alrededor del nervio disecado e irradiarlo con un láser verde para unir la película al tejido. En última instancia, la fuerza con la que la película rose se une al tejido se mide utilizando un tensiómetro calibrado.El adhesivo láser es biocompatible y tiene la ventaja de unirse directamente al tejido. Esto lo hace muy útil para reparar tejidos profundos y de difícil acceso, donde sería complicado usar suturas. También tendría la ventaja de reparar tejidos donde es importante un cierre hermético al agua, como la duramadre o el intestino.Es importante demostrar visualmente la técnica alto y adhesiva porque varios pasos están involucrados en la preparación del adhesivo y también porque el procedimiento quirúrgico requiere un cuidado especial cuando el adhesivo se aplica sobre el tejido. La mayor parte de la demostración será realizada por Matt Barton, quien es un estudiante de posgrado en mi laboratorio, y la operación quirúrgica será realizada por el profesor Marcus Studley de la Universidad Quare. Comience preparando una solución de Kita en ácido acético con verde de rosa bengala.Una solución control puede carecer simplemente de verde de rosa; prepare la solución con agitación magnética a temperatura ambiente. Estará lista en aproximadamente dos semanas o cinco días para los controles sin verde de rosa. Durante este tiempo, el pH aumenta de aproximadamente 2,6 a 3,9 a medida que el quitosano se disuelve.Una vez preparada, centrifugue la solución durante una hora y separe la solución del precipitado de impurezas. Mediante aspiración suave, no perturbe el precipitado. Utilizando una jeringa estéril, inyecte la solución sobre una placa plana de perspec.Extienda la solución uniformemente sin formar burbujas de aire. Para obtener una película con un grosor de aproximadamente 13 micrones, extienda un mililitro de solución sobre 12 centímetros cuadrados. Cubra la placa de plexiglás con una pantalla de aluminio para evitar el blanqueo fotográfico de la solución, pero deje suficiente espacio de ventilación para que la película se seque. Deje secar la solución a temperatura y presión ambiente.Una vez que la película esté seca, use una espátula delgada para desprenderla cuidadosamente de la placa y probarla. Si el adhesivo está seco, corte una pequeña muestra y colóquela en un vial que contenga agua.Cuando la película es insoluble y no se hincha macroscópicamente, está seca. Esto normalmente lleva dos semanas. Luego, mida el espesor de la película utilizando un micrómetro con tijeras limpias y afiladas.Corte la película en tiras rectangulares del tamaño necesario para su aplicación. Almacene los trozos de adhesivo de rosa o adhesivo control entre portaobjetos estériles envueltos en papel de aluminio y a temperatura ambiente. Antes de utilizar la película en una aplicación, determine su atenuación óptica.Esto se logra fijando un pequeño trozo de película en una celda de cuarzo. Luego, en un espectrofotómetro de haz doble, registre el espectro atenuado de la película entre 400 y 800 nanómetros. Las mediciones pueden interpretarse utilizando la ley de Beer para obtener la longitud de atenuación, que será comparable al espesor de la película.Para este protocolo, el intestino de ternera debe haberse obtenido inmediatamente después de la eutanasia del animal y almacenado a menos 80 grados Celsius. Desechele el hielo y rehidrate el tejido sumergiéndolo en agua desionizada durante 10 minutos. A continuación, corte el tejido en secciones de dos centímetros por un centímetro utilizando una hoja número 10 bajo un microscopio quirúrgico a baja potencia.Mantenga las secciones húmedas con gotas de agua para unir dos secciones. Colóquelas extremo con extremo y limpie cualquier exceso de agua de la superficie. Utilice puntas de algodón con pinzas microscópicas.Coloque una tira de película adhesiva rosa a través de la incisión en la capa de ciero. Asegúrese de que la película esté en contacto completo con el intestino. Prepare el láser de estado sólido bombeado por DDE acoplado a una fibra óptica de modo múltiple.Verifique que los parámetros del láser estén configurados correctamente. Ahora irradie el adhesivo. El tamaño del punto del haz debe ser de aproximadamente cinco milímetros de ancho en el punto de contacto con el adhesivo; irradie cada porción del adhesivo durante unos cinco segundos.Finalmente, la superficie se escanea varias veces durante aproximadamente seis minutos. Retire la muestra irradiada. Para evaluar la resistencia de la unión del tejido.Sujete una muestra a un tensiómetro de columna única calibrado. Utilizando pinzas mecánicas, mueva las pinzas a 22 milímetros por minuto hasta que los dos muñones de tejido se separen como control.Coloque un adhesivo de rosa sobre el tejido. No irradie la muestra y mida la resistencia adhesiva del tejido. Para este procedimiento, las películas de adhesivo de rosa deben esterilizarse.Esto puede realizarse utilizando etanol al 90 % o con radiación gamma. Sedar una rata Wistar con isoflurano gaseoso al 4 % y reducir la concentración al 2 % cuando el animal ya no responda a un reflejo de dolor. Realizar una prueba como un pellizco en la cola, afeitar y sanitizar el muslo de la rata.Colóquelo para cirugía bajo un microscopio operatorio, realice una incisión oblicua en la piel de aproximadamente tres centímetros en la parte dorsolateral del muslo derecho. Exponga el nervio tibial mediante un abordaje de separación muscular a través de los músculos glúteos utilizando tijeras microquirúrgicas rectas. Diseque y corte parcialmente la adventicia del nervio tibial.Absorba cualquier exceso de líquidos con gasa estéril o hisopos de algodón. Ahora corte el nervio tibial utilizando pinzas microquirúrgicas. Coloque una tira adhesiva estéril en forma de rosa debajo del nervio tibial.Luego aproxime los muñones nerviosos extremo con extremo sobre la tira adhesiva rosa. Es importante que los nervios queden libres de tensión. La tira se adherirá completamente al nervio formando un collar que puede ayudar con la rotación del nervio.Durante la irradiación con láser, proceda a activar el adhesivo de rosa con el láser como se describió previamente. Finalmente, cierre los músculos y la piel con cinco suturas de calibre tres y siga los protocolos postoperatorios estándar para la recuperación de la rata. Siguiendo el protocolo descrito.Las películas obtenidas son filas brillantes en color, delgadas y tienen una superficie lisa. Las películas también son flexibles y pueden enrollarse en tubos de pequeño diámetro sin causar desgarros ni ningún otro daño aparente. El adhesivo de rosa presenta dos picos de absorción a 530 y 562 nanómetros.El láser verde es así fuertemente absorbido por el adhesivo y la longitud de atenuación correspondiente a 532 nanómetros es aproximadamente de 12 micrones. En contraste, las películas de Esan sin RB se atenúan débilmente con el láser. El adhesivo rosa se une firmemente al intestino tras la irradiación con láser, alcanzando una carga máxima típica en la falla de aproximadamente un newton.La resistencia adhesiva se estimó como la carga máxima dividida por el área de la superficie adhesiva. El adhesivo de rosa no irradiado se unió significativamente menos al tejido. Es importante secar la cetona y el adhesivo hasta que sean completamente insolubles en agua.Se necesitan aproximadamente dos semanas. Además, cada vez que prepare el adhesivo, necesitará ácidos y estos deben manipularse en una campana extractora. Recuerde también que en este procedimiento se utilizan láseres, que pueden ser muy peligrosos, por lo que debe usar gafas protectoras para láser en todo momento.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

La fabricación de una novela, de película delgada adhesivo flexible quirúrgico de los ingredientes aprobados por la FDA, el quitosano y verde de indocianina se describe. La unión de este adhesivo para tejido colágeno a través de un proceso de activación simple con una baja potencia de infrarrojos láser se demuestra.

A Based Chitosan, Laser adhesivo activado Thin Film quirúrgica, &#39;SURGILUX&#39; Preparación y Demostración

Un obstáculo importante en las actuales terapias con células madre es determinar el método más eficaz para proporcionar a estas células a los tejidos del huésped. A continuación, describimos un método de entrega basado en quitosano que sea eficiente y simple en el planteamiento, al tiempo que permite derivadas de tejido adiposo de células madre para mantener su multipotencia.

La construcción de un hidrogel de colágeno para la entrega de la madre microesferas cargadas con células quitosano

Este artículo describe un enfoque biofabrication: deposición de estímulos-respuesta polisacáridos en la presencia de electrodos sesgadas para crear películas biocompatibles que pueden ser funcionalizados con células o proteínas. Se demuestra una estrategia de sobremesa para la generación de las películas, así como sus usos básicos para crear superficies interactivas biofuncionalizadas de laboratorio-en-un-chip de aplicaciones.

Reducción de la interfaz de Bio-electrónica con Biofabrication

Este protocolo tiene como objetivo aliviar la limitación del injerto celular deficiente para el tratamiento con células madre de infartos de miocardio mediante el uso de un sistema de hidrogel y un pegamento a base de fibrina. Con este enfoque, se puede mantener el contacto célula con tejido después del infarto, aumentando el potencial terapéutico de los agentes beneficiosos en el sitio de la lesión.

Un hidrogel Construct y fibrina enfoque basado Pegamento para ofrecer Terapéutica en un infarto de miocardio modelo murino.

Un andamio de la ingeniería de tejidos inyectable compuesto de poli (N-isopropilacrilamida) sulfato de condroitina-injertado (PNIPAAm-g-CS) que contienen micropartículas de alginato se preparó. La fuerza adhesiva, propiedades de hinchamiento y en la biocompatibilidad in vitro se analizaron en este estudio. Las técnicas de caracterización desarrolladas aquí pueden ser aplicables a otros sistemas de termogelificación.

Síntesis de termogelificante poli (N-isopropilacrilamida) compuestos de sulfato de condroitina-injertado con alginato micropartículas de Ingeniería de Tejidos

jove_content es un método analítico rápido, barato y robusto que permite la monitorización cuantitativa de las reacciones químicas en tiempo real. Su utilidad para un análisis rápido, conveniente y preciso se demuestra aquí a través del análisis de injertos de péptidos covalentes en películas de quitosano para mejorar la adhesión celular.

La electroforesis capilar para supervisar Péptido injerto sobre quitosano películas en tiempo real

Aquí, presentamos protocolos de cultivo de esferoides celulares del ligamento periodontal humano (PDL) por películas de quitosano. El cultivo de esferoides celulares tridimensionales (3D) proporciona una alternativa al sistema de cultivo de poliestireno (TCPS) de cultivo tisular convencional.

Formación de esferoides de células de ligamento periodontal humano en Chitosan Films

El presente protocolo describe un método no basado en emulsiones para la fabricación de microgeles de quitosano-genipina. El tamaño de estos microgeles se puede controlar con precisión, y pueden mostrar hinchazón dependiente del pH, degradarse in vivo y cargarse con moléculas terapéuticas que se liberan con el tiempo de manera sostenida, lo que las hace altamente relevantes para aplicaciones de ingeniería de tejidos.

Fabricación de microgeles de quitosano-genipina de tamaño controlado y sin emulsión para aplicaciones de ingeniería de tejidos

La fracción vascular estromal (FSV) aislada mecánicamente en combinación con un hidrogel de fibrina ofrece un portador fácil y eficiente de células estromales viables derivadas del tejido adiposo para diversas indicaciones, incluida la ingeniería de tejidos o la cicatrización de heridas. Aquí, presentamos la preparación de una construcción mecánica de hidrogel de fibrina SVF (mSVF) para investigación traslacional y aplicación clínica.

La combinación de fracción vascular estromal aislada mecánicamente e hidrogel de fibrina: un protocolo de procesamiento

Este estudio presenta un modelo de sobremesa diseñado para evaluar la compatibilidad de los materiales de apósito de heridas con los sistemas de tratamiento de heridas con presión negativa mediante la evaluación de la presión y la recolección de líquidos durante 72 h bajo configuraciones de presión continua e intermitente.

Desarrollo de un modelo de sobremesa para evaluar la compatibilidad de los materiales de apósitos de heridas con los sistemas de tratamiento de heridas con presión negativa

Se presenta un protocolo reproducible para la preparación, enriquecimiento y aplicación de un hidrogel in situ de luz azul cruzada–gelatina–riboflavina reticular para la reparación de heridas estromales corneales en conejos, incluyendo pasos procedimentales para el manejo quirúrgico, tarsorrafia parcial y cuidados postoperatorios.

Fabricación y aplicación quirúrgica de hidrogeles enriquecidos foto-reticulados gelatina–riboflavina para la reparación de heridas corneales en conejos

Aprende a fabricar adhesivos de quitosano activados por láser con rosa de Bengala para reparación de nervios periféricos en ratas. Este método minimiza el daño tisular comparado con suturas tradicionales.

Fabricación y Aplicación de Rosa de Bengala-quitosano Films en Tissue Repair Laser

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