La transmisión de los virus de plantas usando moscas blancas

El objetivo general del siguiente experimento es transmitir virus de plantas utilizando moscas blancas. Esto se logra mediante el establecimiento y mantenimiento de una colonia de moscas blancas que suministran semanalmente moscas blancas adultas recién emergidas, que no están contaminadas con otros vectores y patógenos potenciales. Las colonias se mantienen mediante la adición regular de moscas blancas a las plantas jóvenes libres de insectos a partir de las cuales se producen nuevos adultos.

Después de 17 a 20 días cada semana, los adultos recién emergidos pueden ser transferidos a plantas de prueba para adquirir o transmitir la transmisión del virus. Por lo general, se obtienen eficiencias de casi el 100%, y las tasas de transmisión generalmente comenzarán bajas y aumentarán con la optimización sistemática. El aspecto más desafiante del uso de moscas blancas para inocular virus es criar las moscas blancas de tal manera que se excluyan los patógenos e insectos no deseados.

Los patógenos, en particular los hongos que pudrien la raíz y el tizón de las hojas, reducirán la calidad de las plantas huésped del virus. Los insectos no deseados, como los de segunda mano, pueden suprimir la reproducción de la mosca blanca y comprometer la calidad de la planta huésped del virus. La demostración de los procedimientos estará a cargo de Heather Capa Bianco, una técnica de mi laboratorio.

Las colonias de mosca blanca deben mantenerse en una sala de crecimiento limpia y controlada. El control de la humedad relativa, la temperatura, el fotoperiodo y la intensidad de la luz son esenciales para una colonia que se desarrolla de huevo a adulto en 18 días, use los siguientes configurados. La temperatura debe establecerse entre 26 y 30 grados centígrados, y la humedad relativa idealmente debe estar entre 30 y 50%Si la humedad relativa supera el 70%es probable que los patógenos de insectos y hongos de plantas se conviertan en un problema.

El periodo fotográfico ideal es de 14 horas. La intensidad de la luz debe ser bastante alta, y las bombillas fluorescentes VHO pueden producir velas de 800 a 1000 pies en el dosel de la planta. Las dosis de fertilizante y riego también deben reducirse para desalentar los patógenos fúngicos, así como la acumulación de sal Las jaulas blancas deben permitir ventilación, facilidad de acceso y espacio suficiente para una población blanca en crecimiento.

Se han obtenido buenos resultados con el cribado de organza de órganos más aluminio, así como con el cribado a prueba de blancos de la especie de planta es una consideración importante. En primer lugar, debe ser de crecimiento rápido, pero no crecer demasiado en la cámara. En segundo lugar, la planta debe ser lo suficientemente fuerte como para soportar una gran población de insectos sin colapsar.

Por estas razones, los cultivares enanos o arbustivos son buenas opciones de plantas. En tercer lugar, la planta debe ser capaz de albergar o no albergar el virus que se está utilizando, dependiendo del tipo de colonia que se esté criando. Debido a que la colonia puede colapsar debido a ácaros, THP, moscas blancas silvestres u otros insectos invasores, los cultivares elegidos deben cultivarse en un entorno protegido para excluir a otros insectos.

Las primeras moscas blancas de una nueva colonia deben estar libres de virus de plantas, otros insectos y patógenos de insectos. Si se recolectan moscas blancas en el campo, críalas durante al menos ocho semanas en plantas que no sean huéspedes del virus durante este tiempo, verifique la ausencia de síntomas en la planta. Una vez obtenidas las moscas blancas limpias, introducir entre 20 y 100 en una jaula de plantas por aspiración o sacudiéndolas suavemente desde otra planta de origen.

Cada semana es necesario establecer una nueva jaula. Durante las primeras tres semanas, use las moscas blancas en plantas que no sean ST para establecer la nueva jaula. A partir de la cuarta semana, use moscas blancas adultas jóvenes de la jaula de tres semanas para establecer la siguiente jaula.

Durante la primera semana en una jaula, las moscas blancas pondrán huevos en la parte inferior de las superficies de las hojas de las plantas. En la segunda semana, las moscas blancas inmaduras se harán evidentes y algunos de los adultos aún estarán vivos. En la tercera semana, habrán emergido muchas moscas blancas adultas nuevas, y debería haber un aumento muy notable en la población de moscas blancas adultas.

Estas moscas blancas se pueden utilizar para experimentos de transmisión. En la cuarta semana, los adultos de una semana deben ser transferidos a una nueva jaula. Se debe quitar la jaula vieja y desechar sus plantas. Preciso.

La transferencia suave de moscas blancas se logra con un dispositivo de aspiración y los viales de recolección nunca aspiran. Las moscas blancas que se alimentan de las plantas cuando se alimentan de los estilos blancos están incrustadas en la planta y se romperán si se las aleja de la planta. Haciendo que la mosca blanca sea inútil para recolectar moscas blancas en una mano, sostenga un protector de plástico amarillo dentro de la jaula de la colonia con la otra mano.

Golpea suavemente las plantas para animar a las moscas blancas adultas a volar. Las moscas blancas se sentirán atraídas por la tarjeta amarilla donde se pueden recoger. Con el uso del aspirador y una succión muy suave, no agregue más de 20 moscas blancas a cada vial de recolección.

A continuación, golpee el vial para desorientar a las moscas y tapar el vial con param. Para asegurar una transmisión viral exitosa, pruebe de 15 a 40 adultos jóvenes de plantas infectadas con el virus a plantas sanas, dependiendo del virus y de la planta huésped. Otros protocolos, como el cribado resistente, necesitan poblaciones iniciales más grandes.

En este caso, agite las plantas infectadas con el virus, que están infestadas de moscas blancas, sobre las plantas que deben inocularse. Una vez que las moscas blancas se colocan en una planta infectada con el virus, permítales alimentarse durante 48 a 72 horas para adquirir virus transmitidos persistentemente. Por lo general, más tiempo no aumenta la tasa de transmisión de los virus transmitidos de manera persistente o persistente inteligente.

Un período de acceso de adquisición más corto de una hora a un día será suficiente para los experimentos que requieren la adquisición de hojas específicas. Se pueden usar jaulas de clip, configure la jaula de manera que la parte inferior de la hoja sea accesible y no use más de 10 moscas blancas hembra por jaula de 2,5 centímetros de diámetro, o la tasa de transmisión disminuirá debido al hacinamiento. Para la inoculación de plantas, seleccione la jaula adecuada teniendo en cuenta el número de plantas.

Una planta, por ejemplo, solo necesita una jaula pequeña un poco más grande que ella para varias plantas, elija entre un tubo de PVC más pequeño, una jaula con marco o una jaula con marco de aluminio más grande. Cuanto más pequeño sea el espacio alrededor del dosel de la planta, mejor. Una vez que las moscas blancas se agregan a la nueva planta, la cantidad de tiempo necesaria para la inoculación depende del virus y de la planta huésped.

Al igual que para la adquisición, la cantidad de tiempo requerida para la transmisión depende de la forma de transmisión. La transmisión no persistente requiere un tiempo de acceso mucho más corto que la transmisión semipersistente o persistente. Comprobar que las moscas blancas están sondeando o alimentándose durante el periodo de acceso a la inoculación.

Abre la jaula e investiga la parte inferior de algunas hojas de cada planta. Para la inoculación más larga. Los períodos de acceso perturban periódicamente suavemente las plantas para alentarlas a redistribuirse en las plantas.

Esto aumentará la tasa de transmisión al contrarrestar las tendencias naturales de las moscas blancas a agruparse para finalizar el período de inoculación. Mata las moscas blancas con dos insecticidas aplicados, uno tras otro. Primero aplique un insecticida de contacto para eliminar rápidamente las moscas blancas adultas, como el jabón insecticida.

En segundo lugar, aplique un insecticida sistémico para eliminar las moscas blancas que se desarrollen en las semanas siguientes. Y los adultos restantes emiten, áridos o pirazina son opciones efectivas. Con estos procedimientos, es posible obtener de forma rutinaria tasas de transmisión del virus del 100%Estas altas tasas de transmisión son esenciales cuando se examinan las plantas de prueba para detectar la resistencia al virus y son deseables cuando se evalúa la eficacia de los compuestos químicos por su capacidad para interferir con la transmisión del virus.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo criar moscas blancas y usarlas para transmitir virus de plantas. Estos procedimientos se pueden utilizar con fines de investigación o para el desarrollo comercial de plantas resistentes a virus, o para probar compuestos por su capacidad para interferir con la transmisión del virus.