Captura selectiva de 5-hidroximetilcitosina a partir de ADN genómico

El objetivo general de este procedimiento es marcar y capturar cinco hidroxietilcitocinas, una modificación del ADN recién descubierta, primero fragmentar el ADN genómico por sonicación, luego realizar una reacción de beta gluc glucosa transferasa para transferir restos de glucosa azida a cinco residuos de hidroxietil citidina en el ADN utilizando la química de Qlik. Une un enlazador de biotina salide al grupo Azid para producir ADN biotinilado. A continuación, capture selectivamente los cinco fragmentos de ADN que contienen hidroxietilo citidina en perlas de estreptavidina de manera independiente de la densidad.

Los fragmentos de ADN enriquecidos con cinco hidroxietil citidina purificados se pueden utilizar para análisis posteriores, incluida la secuenciación de próxima generación. La principal ventaja de esta técnica sobre el enfoque existente, como el enfoque basado en anticuerpos y anticuerpos, es que la captura de phy hidroxietil citosina es independiente de la densidad de PHY C. Eugene Lee, investigador asociado sénior en el laboratorio, demostrará este protocolo.