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DOI: 10.3791/50145-v
Clemens Köhncke1,2, Ulrike Lisewski1, Leonhard Schleußner1, Carolin Gaertner1, Saskia Reichert1, Torsten K. Roepke1,3
1Experimental and Clinical Research Center (ECRC),Charité Medical Faculty and Max-Delbrück Center for Molecular Medicine (MDC), 2Medical Department, Division of Cardiology, Campus Virchow-Klinikum,Charité - Universitätsmedizin Berlin, 3Medical Department, Division of Cardiology and Angiology, Campus Mitte,Charité - Universitätsmedizin Berlin
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Kv canal disfunción se asocia con arritmias cardíacas. Con el fin de estudiar los mecanismos moleculares que conducen a tales arritmias que utilizan un protocolo sistemático para el aislamiento de cardiomiocitos auriculares y ventriculares de Kv de canal ratones knockout auxiliares de subunidades. Cardiomiocitos aislados a continuación, puede ser utilizado inmediatamente para estudios electrofisiológicos celulares, bioquímicos o inmunofluorescencia (IF) ensayos.
El objetivo general de este procedimiento es extraer cardiomiocitos auriculares y ventriculares vivos de ratones modificados genéticamente para su uso en el registro de pinzas de parches de células completas y otros experimentos. Esto se logra extirpando primero cuidadosamente, pero rápidamente, el corazón de un animal anestesiado. El segundo paso es conectar el corazón extirpado y canulado al aparato LOR.
A continuación, el corazón se perfunde en gran medida con una solución de colagenasa Para aflojar el tejido conectivo, el paso final es disociar el tejido separándolo suavemente con pinzas finas y suspender las células con una punta de pipeta de plástico pulido al fuego ampliada. Después de eso, las células se resuspenden paso a paso con una solución rica en calcio. En última instancia, la técnica de fijación de parche de celda completa se utiliza para mostrar diferencias en las corrientes de canal de potasio dependientes de voltaje.
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