Name: Vertical T-laberinto Choice Ensayo para la respuesta a los olores artrópodos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: Aprende a medir respuestas olfativas en artrópodos mediante un olfactómetro vertical en T. Este método permite evaluar atracción y repulsión a diferentes odorantes en insectos.

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El Citrus Research y Development Foundation es reconocido por proveer financiamiento. Gracias a Angel Hoyte y Michael Flores para la realización de bioensayos.

<ol><li> Montaje de un diseño personalizado, de dos puertos dividido T-olfatómetro se ha descrito previamente en Mann et al. 10 se muestra en la figura 1. El olfatómetro consiste en un tubo de vidrio de 30 cm que se bifurca en dos puertos separados con una tira de teflón formando un laberinto en T. Cada mitad es análogo a un brazo de un olfatómetro estilo 2-opción que permite al sujeto de prueba para elegir entre dos campos de olores potenciales. <ol><li> Los ensayos de montaje y posterior debe tener lugar dentro de una habitación con temperatura controlada o cámara ambiental. </li><li> Mount vidrio laberinto en T olfatómetro verticalmente como se muestra en la Figura 1 y colocarlo debajo de una bombilla de luz fluorescente 900 lux. </li><li> Para la difusión óptima de la luz, la asamblea debe ser montado en un 1,0 x 0,6 x 0,6 m recipiente opaco para maximizar la difusión uniforme de la luz. </li><li> Conectar los brazos olfatómetro a fuentes de olor que se alojarán en fase sólida micro-extracción fuente chamb explotación / olorer (SPMEC) (ARS, Inc., Gainesville, FL) a través de teflón, conectores de tubo de vidrio. Cada SPMEC se compone de un tubo de vidrio recto (17,5 cm de largo x 3,5 cm de ancho) apoyado con una entrada y una válvula de salida para las corrientes de aire entrante y saliente (Figura 1). </li><li> Conectar el sistema de suministro de aire a una fuente externa de aire humidificado y purificado de carbono-que está bajo presión constante (el sistema de suministro de aire tiene tanto un filtro de carbono interno para la purificación de aire y un burbujeador de aire para la humidificación de fuentes externas si están disponibles). </li><li> Disolver muestras químicas deseadas dentro de diluyente apropiado (disolvente) y pipeta sobre un sustrato de liberación lenta tal como una mecha de algodón (John Petty Packaging, Inc., Concord, NC). El tratamiento de control debe constar de una mecha de algodón impregnado con disolvente solo. </li><li> Para evitar la contaminación significativa de la cristalería, envuelven las mechas de algodón tratados y de control en el tejido de laboratorio (Kimwipes, Kimberly-Clark, Roswell, GA) y ponerlo en los dos brazos SPMEC (ARS, Inc., Gainesville, FL). En el caso de muestras de plantas vivas, una cámara de recogida de guillotina volátil puede estar unido a la olfatómetro contiene tratamientos en lugar de la SPMEC (Figura 1). </li><li> Entregar purificado y aire humidificado a través de la SPMEC (o cámara de guillotina volátil) a través de dos bombas conectadas a un sistema de suministro de aire (Figura 1). Mantener la tasa de flujo de aire a 0,1 L / min a través de ambos brazos del olfatómetro. </li></ol></li><li> Empleando olfatómetro para probar la respuesta a los repelentes de artrópodos putativo. En la presente descripción, un insecto hemíptero, psílido asiático de los cítricos, Diaphorina citri, se utilizó como un artrópodo prueba. Respuesta fue probado a volátiles de cítricos solos o en combinación con un (disulfuro de dimetilo) y repelente de aire limpio como fuentes de olor. <ol><li> Llevar a cabo todos los experimentos a una temperatura normalizada y la humedad relativa. </li><li> Antes de todas las pruebas, exponer test temas para limpiar el aire acondicionado o aire limpio en comparación con solvente limpio en comparación con el olfatómetro T-laberinto para verificar la ausencia de sesgo posicional o un efecto del solvente sobre la conducta del sujeto de prueba. </li><li> Asignar una fuente de olor al azar a uno de los brazos del olfatómetro al comienzo de cada bioensayo. Invertir esta posición después de cada 10 sujetos de prueba ensayadas, como mínimo, para eliminar el potencial de sesgo posicional. </li><li> Pon a prueba la respuesta de un mínimo de 30 (y hasta 120) sujetos de prueba por combinación del tratamiento. </li><li> Permita que los sujetos de prueba 100-300 sec para exhibir una respuesta de comportamiento basado en la respuesta previamente establecida (latencia) intervalo. </li><li> Record si el sujeto entra en el brazo de tratamiento, o brazo de control permanece en el puerto de liberación o por debajo de la división T-laberinto. </li><li> Puntuación elegir brazo de tratamiento o de control cuando un sujeto de prueba cruza la división en el laberinto en T y se mueve en cualquiera de los brazos olfatómetro. </li><li> Marca un brazo de liberación elección cuando una prueba sSujeto permanece en el puerto de liberación o por debajo de la división T-laberinto. </li><li> Limpiar el olfatómetro y tubos de conexión a fondo con solución de jabón 2% y hornear los componentes de vidrio a 200 ° F entre el uso de tratamientos de olor diferentes. </li><li> Para los ensayos en los que putativo tratamientos repelentes se presentan en el olfatómetro laberinto en T con o sin un tratamiento químico en comparación con el aire limpio, comparar el número de sujetos de prueba restantes en el punto de descarga, y no entrar en el olfatómetro entre los tratamientos por una forma de análisis de varianza ( ANOVA) seguido por el test HSD de Tukey (α &lt;0,05). En los casos en los que los sujetos de prueba dejan el brazo de liberación, comparar el número de la elección del brazo de control versus el grupo de tratamiento con Chi cuadrado (χ 2) análisis en α &lt;0,05. </li></ol></li></ol>

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<li>Cardé, R. T., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCard%C3%A9%2C+RT+%22Advances+in+insect+chemical+ecology%22">Advances in insect chemical ecology</a>. , Cambridge University Press. UK. (2004).</li>
<li>Knight, A. L., Stelinski, L. L., Hebert, V., Gut, L., Light, D., Brunner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+dispensers+simultaneously+releasing+pear+ester+and+sex+pheromone+for+disruption+of+codling+moth+%28Lepidoptera%3A+Tortricidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Novel dispensers simultaneously releasing pear ester and sex pheromone for disruption of codling moth (Lepidoptera: Tortricidae).</a> Journal of Applied Entomology. 136 (1-2), 79-86 (2012).</li>
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<li>Kennedy, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+visual+responses+of+flying+mosquitos%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Zoological+Society+of+London+A%22%5BJournal%5D)">The visual responses of flying mosquitos.</a> Proceedings of the Zoological Society of London A. 109 (4), 221-242 (1940).</li>
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<li>Mann, R. S., Rouseff, R. L., Smoot, J. M., Castle, W. S., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfur+volatiles+from+Allium+spp.+affect+Asian+citrus+psyllid%2C+Diaphorina+citri+Kuwayama+%28Hemiptera%3A+Psyllidae%29%2C+response+to+citrus+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Sulfur volatiles from Allium spp. affect Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae), response to citrus volatiles.</a> Bulletin of Entomological Research. 101 (1), 89-97 (2011).</li>
<li>Onagbola, E. O., Rouseff, R. L., Smoot, J. M., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guava+leaf+volatiles+and+dimethyl+disulfide+inhibit+response+of+Diaphorina+citri+Kuwayama+to+host+plant+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Guava leaf volatiles and dimethyl disulfide inhibit response of Diaphorina citri Kuwayama to host plant volatiles.</a> Journal of Applied Entomology. 135 (6), 404-414 (2011).</li>
<li>Baker, T. C., Linn, C. E. Wind tunnels in pheromone research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+TC+%22Techniques+in+Pheromone+Research%22">Techniques in Pheromone Research</a>. Hummel, H., Miller, T. A. , Springer-Verlag. New York. 75-110 (1984).</li>
<li>Stelinski, L. L., Rodriguez-Saona, C., Meyer, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+foreign+oviposition+marking+pheromone+in+a+multitrophic+context%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Recognition of foreign oviposition marking pheromone in a multitrophic context.</a> Naturwissenschaften. 96 (5), 585-592 (2009).</li>
<li>Gökçe, A., Stelinski, L. L., Whalon, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+electrophysiological+responses+of+leafroller+moths+to+selected+plant+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Entomology%22%5BJournal%5D)">Behavioral and electrophysiological responses of leafroller moths to selected plant extracts.</a> Environmental Entomology. 34 (6), 1426-1432 (2005).</li>
<li>Ali, J. G., Alborn, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((herbivore-induced+plant+volatile+increases+biological+control+activity+of+multiple+beneficial+nematode+species+in+distinct+habitats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">herbivore-induced plant volatile increases biological control activity of multiple beneficial nematode species in distinct habitats.</a> PLoS ONE. 7 (6), e38146(2012).</li>
<li>Mann, R. S., Ali, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+release+of+a+plant+defense+volatile+%27deceptively%27+attracts+insect+vectors+to+plants+infected+with+a+bacterial+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Induced release of a plant defense volatile 'deceptively' attracts insect vectors to plants infected with a bacterial pathogen.</a> PLoS Pathogens. 8 (3), e1002610(2012).</li>
</ol>

El autor recibió financiamiento que fue proporcionado por la Fundación de Investigación de Cítricos y Desarrollo.

En la presente memoria, un dispositivo de ensayo y el protocolo se ha descrito para la medición de la respuesta de los artrópodos pequeños (Insecta: Hemiptera: Psyllidae) a odorantes. El método implica una prueba de elección, permitiendo que el insecto que hacer una elección entre dos campos odorantes en el caso de los ensayos de evaluación de un atrayente putativo. Por otra parte, el sujeto de prueba puede mostrar tres tipos de comportamientos dejando el brazo de liberación y entrar uno de los dos campos potenciales de olor, o que permanece en el brazo de liberación, en el caso de los ensayos de repelencia. El olfatómetro permite un alto rendimiento de recolección de datos, ya que se aprovecha de la geotáctico negativo (tendencia a moverse hacia arriba) y fototácticas positivo (tendencia a moverse hacia la luz) respuesta de comportamiento natural de muchos artrópodos. Aunque la manifestación presente ejemplo utiliza un insecto de prueba psílido, el ensayo puede ser fácilmente adaptado a los artrópodos en general, tanto los que utilizan vuelo o caminar como modos predominantes de transporte. <p class=&quot;Jove_content&quot;&gt; olfatómetros diseñados para medir la respuesta de los insectos fueron inicialmente desarrollados hace décadas y han desempeñado un papel importante en la aclaración de los atrayentes y repelentes de insectos 12. Los diseños específicos de olfatómetros pueden variar ampliamente, sin embargo, variaciones sobre el tema general de el ensayo de dos elección descrito aquí, así como, de tubos similar Y-ensayos se han utilizado a menudo para medir la respuesta de artrópodos a los productos químicos. Túneles más grandes de vuelo que pueden causar vuelo sostenido de insectos 9 también han dado lugar a la recopilación de datos innovadores elucidar los mecanismos fundamentales de vuelo de los insectos y la orientación de semioquímicos, así como, datos informando uso práctico de las herramientas de control de plagas. A menudo es necesario adaptar el diseño a un olfatómetro e instrumentación asociada para la biología del sujeto de la prueba específica de artrópodos. Esos olfatómetros que se pueden utilizar entre un grupo general de los insectos son más útiles que los specific a un pequeño grupo, sin embargo, a veces la importancia económica de un reducido grupo de insectos que dicta la necesidad del desarrollo de un olfatómetro muy específica y técnica de ensayo. El diseño describe actualmente se basa en técnicas de artrópodos anteriormente conocidas. Además, permite una mayor elección estándar de dos tubos de ensayo de bioensayos Y-en el que el recinto experimental o prueba de elección toma la forma de un dispositivo de cristal en forma de Y 7. Típicamente, un brazo de un tubo en Y recibirá un odorante tratamiento, mientras que el otro será dejado en blanco 13. Variaciones sobre olfatómetros tales pueden incluir la adición de múltiples brazos radiales 14 e incluso la adición de un medio de suelo para someter a ensayo el comportamiento de los organismos que se desplazan a través del suelo 15. En el desarrollo de tales olfatómetros y ensayos asociados, es importante considerar cómo de cerca las condiciones naturales se replican y por lo tanto la verdadera relevancia de las respuestas conductuales evaluados en términos de biología los sujetos de prueba. A una la-rge grado, los datos recogidos sólo serán tan útiles como la relevancia del bioensayo de comportamiento con respecto a la ecología del comportamiento del organismo 16. El olfatómetro actualmente descrito y bioensayo de comportamiento está diseñado específicamente para un insecto hemíptero que tiende a iniciar el vuelo como cortas &quot;saltos&quot; 16. La orientación vertical de la olfatómetro y la disposición de fuente de luz facilitar el inicio de movimiento de los insectos y por tanto, posterior químicamente mediada comportamiento de orientación se pueden ensayar de manera eficiente y con un alto rendimiento. Esta disposición ensayo de conducta probablemente se puede utilizar para una amplia gama de volar o caminar taxones de artrópodos o podría ser también fácilmente modificados para adaptarse a la necesidad de no artrópodos organismos.

Los artrópodos (incluidos los insectos y arácnidos) se define a menudo como plagas, ya sea porque compiten con el consumo humano en entornos agrícolas o urbanos o transmitir agentes patógenos causales de la enfermedad 1. Una gran cantidad de inversión se realiza en el desarrollo de herramientas de control de plagas. Estas herramientas pueden variar ampliamente y se han logrado importantes avances en el desarrollo biorracionales herramientas que, o bien modificar o explotar el comportamiento natural de las plagas con el uso de atrayentes o repelentes de comportamiento 2,3. Plagas de artrópodos suelen basarse en las señales olfativas o señales de pareja y / o host ubicación 4. Por lo tanto, el descubrimiento de atrayentes o repelentes eficaces para las plagas a menudo puede conducir al desarrollo de herramientas de control. Este proceso de descubrimiento implica varios pasos. En primer lugar, el comportamiento natural del sujeto de prueba debe ser entendido. Por ejemplo, uno debe determinar si un sexo de una especie dada atrae el opuestosexo por ubicación mate. Si es así, se debe determinar si esta atracción está mediada por un producto químico y donde química que se produce. Otros pasos incluyen la determinación de si la sustancia química que se produce y su eventual identificación. A lo largo de este procedimiento, el sujeto de prueba (de insectos o ácaros) respuesta de comportamiento a los olores debe ser probado. Inicialmente, el comportamiento del sujeto de ensayo se probará para el material natural. Por ejemplo, la respuesta de una polilla macho puede ser analizada para que la del extracto de su misma especie hembra de la glándula de feromonas. Por otra parte, la respuesta de un herbívoro a los olores naturales de su planta hospedante puede ser probado. Mientras que estas investigaciones tienen un enfoque práctico en el desarrollo de herramientas de gestión de 5,6, también se puede aplicar a la investigación que se ocupa de cuestiones más fundamentales, tales como la especiación 7. Los pasos siguientes implican probar la respuesta del artrópodo para determinadas versiones sintéticas de productos naturales. Untender artrópodos cómo responder a los productos químicos requiere el desarrollo de herramientas adecuadas para medir su comportamiento. Los datos generados por estos instrumentos dependerá de lo bien que el investigador es capaz de medir los comportamientos naturales en un entorno controlado. Más de seis décadas, olfatómetros sostenidos de vuelo y túneles fueron desarrollados para medir la respuesta de los insectos a los olores 8,9. Olfatómetros variar significativamente en diseño y están sujetos a los insectos o problema específico se está investigando. El objetivo de este artículo es describir el diseño y el uso de una orientación vertical, T-laberinto olfatómetro para medir la respuesta de los insectos a los olores (Figura 1). La orientación vertical olfatómetro se aprovecha de la geotaxis negativo (tendencia a moverse hacia arriba) exhibida por muchos insectos. Una fuente de luz situada directamente encima de la olfatómetro se aprovecha de la phototaxis positivo (tendencia a moverse hacia la fuente de luz) exhibido por muchos insectos. El olfactometer es particularmente útil para insectos hemípteros que tienden a no exhibir movimiento fácilmente en olfatómetros orientados horizontalmente y que están muy influenciados por la intensidad de la luz con respecto a la orientación. Sin embargo, este dispositivo se puede utilizar para una amplia gama de insectos voladores y rastreros, así como arácnidos. El olfatómetro puede emplearse para evaluar tanto los atrayentes y repelentes. En el caso de los atrayentes, el campo olor bifurcada (Figura 1) se establece con el atrayente putativo liberado en un lado versus aire limpio liberada en el lado opuesto. Una selección es registrada cuando el insecto liberado en la base del olfatómetro elige uno de los dos campos de olor. En el caso de repelentes, un comportamiento tercero es posible. Además del movimiento hacia arriba en cualquiera de los dos campos de olor, la falta de movimiento hacia arriba puede estar grabada que indica un estímulo que no responde o repeler estímulo de los campos de olor sea.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del Equipo </td><td> Empresa </td><td> El número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Dos puertos dividido T-olfatómetro </td><td> Analytical Systems Research (ARS), Inc. Gainesville, FL </td><td> Ninguno (por encargo) </td><td> Si no está disponible a partir de ARS, Científica del Sur (Gainesville, FL) también actualmente construye y distribuye equipos. </td></tr><tr><td> En fase sólida micro-extracción explotación / cámara de fuente de olor con Teflon;-conectores de tubo de vidrio. </td><td> Analytical Systems Research (ARS), Inc. Gainesville, FL </td><td> RV-R3 </td><td> Véase el comentario </td></tr><tr><td> Sistema de aire de suministro </td><td> Analytical Systems Research (ARS), Inc. Gainesville, FL </td><td> HADS-2AFM2C.4 </td><td> Véase el comentario </td></tr><tr><td> Guillotina cámara </td><td> Analítica Researco Systems (ARS), Inc. Gainesville, FL </td><td> L3GP3 </td><td> Véase el comentario </td></tr></tbody></table>

vertical t-laberinto choice ensayo para la respuesta a los olores artrópodos

Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants

Dada la importancia económica de los insectos y arácnidos como plagas de cultivos agrícolas, los entornos urbanos o como vectores de enfermedades de plantas y humanos, diversas tecnologías están siendo desarrollados como herramientas de control. Un subconjunto de estas herramientas se centra en la modificación del comportamiento de los artrópodos por atracción o repulsión. Por lo tanto, los artrópodos son a menudo el foco de las investigaciones del comportamiento. Diversas herramientas se han desarrollado para medir el comportamiento de los artrópodos, incluyendo túneles de viento, molinos de vuelo, servospheres, y varios tipos de olfatómetros. El propósito de estas herramientas es para medir la respuesta del insecto o arácnido a las señales visuales o más a menudo olfativo. La vertical T-laberinto oflactometer descrito aquí mide elecciones realizadas por los insectos en respuesta a atrayentes o repelentes. Se trata de un dispositivo de ensayo de alto rendimiento que se aprovecha de la phototaxis positivo (atracción a la luz) y negativos (geotaxis tendencia a caminar o volar hacia arriba) exhibidas por muchos artrópodos. El olfactometer consiste en un tubo de vidrio de 30 cm que se divide por la mitad con una tira de teflón formando un laberinto en T. Cada mitad sirve como un brazo del olfatómetro que permite a los sujetos de prueba para hacer una elección entre dos campos de olores potenciales en ensayos que implican atrayentes. En los ensayos que implican repelentes, la falta de respuesta normal a los atrayentes conocidos también se puede medir como una tercera variable.

Atracción de psílidos asiáticos de cítricos (Diaphorina citri) adultos a los olores de sus volátiles natales de plantas hospederas (cítricos) se representa en la figura 2A. Los adultos de manera significativa (α &lt;0,05) más eligió el brazo del olfatómetro laberinto en T recibir los olores de las plantas de cítricos que viven en comparación con un blanco (aire limpio) de control. Un ejemplo de repulsión se muestra en la Figura 2B. En este caso, los insectos fueron expuestos a un brazo de los volátiles de cítricos laberinto T-receptores, mientras que el segundo brazo recibido volátiles a partir de una planta de cítricos que se trató con el conocido disulfuro repelente, dimetil 11. En este caso, tres tipos de comportamientos fueron observados. El número de psílidos detenidos en el brazo de liberación y que no responden no fue diferente estadísticamente del número que entra en el brazo de la recepción de los olores de las plantas de cítricos sola (Figura 2B). Sin embargo, no psílidos entrado en el brazo que contiene tque acogerá la planta volátil cuando co-presentó con el repelente (Figura 2B). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/50229/50229fig1.jpg" /> Figura 1. Diagrama esquemático de la orientación vertical laberinto en T olfatómetro se unió a sistema de suministro de aire y los dispositivos de tratamiento de olores de liberación. El diagrama es una adaptación de la figura 1 en Mann et al. 10. Un sujeto de ensayo se colocaron individualmente en la cámara de liberación de la 2-puerto dividido T-olfatómetro. Se mueve hacia los olores a través de una válvula de compuerta que permite el movimiento controlado hacia arriba en el olfatómetro y evita que el insecto se arrastra de nuevo en el área del punto de liberación. El tubo se bifurca 10 cm después del valor de entrada. Una respuesta positiva a un olor se graba una vez que el insecto se mueve 0,5 cm en un lado específico de la división. La cámara de guillotina colección volátil puede ser utilizado en lugar de un sólido PHAse micro-extracción explotación / cámara de olor fuente (SPMEC) como una fuente de olor. <img alt="Figura 2" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50229/50229fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50229/50229fig2.jpg" /> Figura 2. Respuesta de asiáticos psílido de los cítricos (Diaphorina citri) adultos a volátiles de plantas hospedantes cítricos versus un control de aire limpio (A) o volátiles de cítricos contra los volátiles de cítricos co-editado con un (disulfuro de dimetilo) repelente (B) en una orientación vertical T -laberinto olfatómetro Figura 2A:. Una forma de análisis de varianza (ANOVA) seguido por el test HSD de Tukey (α &lt;0,05) se realizó para comparar el número de psílido hacer una elección entre cualquiera de los brazos (2 tratamientos, n = 120). Las columnas indicadas por letras diferentes son significativamente diferentes de otro (α &lt;0,05) una figura 2B:. Unidireccionales analyses de la varianza (ANOVA) seguido por el test HSD de Tukey (α &lt;0,05) se realizó para comparar el número de psílido hacer una elección entre cualquiera de los brazos o la permanencia en el punto de liberación (3 tratamientos, n = 120). Las columnas indicadas por letras diferentes son significativamente diferentes uno del otro (α &lt;0,05).

Una vertical, laberinto en T olfatómetro se describe para el ensayo de la respuesta de comportamiento de los artrópodos. El olfatómetro permite al experimentador para medir las opciones realizadas por los sujetos del ensayo cuando a dos campos de olores potenciales. Tanto atracción y repulsión a partir de sustancias olorosas se pueden medir con este dispositivo.

Vertical T-laberinto Choice Ensayo para la respuesta a los olores artrópodos

Given the economic importance of insects and arachnids as pests of agricultural crops, urban environments or as vectors of plant and human diseases, ...

El objetivo general de este procedimiento es medir el comportamiento de los CID en respuesta a odorantes. Esto se logra primero mediante la elaboración de TMAs verticales en las cuales diferentes opciones de olores se asocian con diferentes regiones espaciales. El segundo paso consiste en introducir los CID en el temaze.A continuación, se observan los CIDs durante un período determinado para ver qué brazo del laberinto eligen, y se registra su elección. En última instancia, el ensayo de elección vertical TE MASAL se utiliza para revelar la respuesta conductual de los insectos a los odorantes. El espectómetro vertical TE MASAL aprovecha los comportamientos naturales de los insectos para evaluar su respuesta a una variedad de atrayentes y repelentes.Como primer paso, busque una habitación con temperatura controlada o una cámara ambiental donde se puedan realizar los montajes y ensayos experimentales. Comience la construcción del dispositivo experimental ensamblando un olfatómetro personalizado con dos puertos. El olfatómetro consiste en un tubo de vidrio de 30 centímetros que se bifurca en dos puertos separados, con una tira de teflón formando una T.Cada mitad es análoga a un brazo de un olfactómetro de estilo de dos opciones, lo que permite al sujeto de prueba elegir entre dos campos de olor potenciales. Para una difusión óptima de la luz, utilice un recipiente opaco para encerrar el montaje experimental. Después de montar el olfactómetro TMA verticalmente, colóquelo bajo una bombilla fluorescente de 900 lux y conecte la entrada de insectos al olfactómetro.Las fuentes de olor están alojadas en una cámara de extracción en fase sólida. Conecte los brazos del olfatómetro a las fuentes de olor utilizando conectores de tubo de vidrio y teflón. A continuación, conecte el sistema de suministro de aire a una fuente externa de aire humidificado y purificado con carbón que esté bajo presión constante.Para preparar las fuentes de olor, disuelva las muestras químicas deseadas en un disolvente apropiado. Pipetee esto sobre una mecha de algodón. También impregne una mecha de algodón únicamente con el disolvente para crear una muestra de control.Envuelva las mechas de algodón tratadas y de control en tejidos de laboratorio para evitar una contaminación significativa del material de vidrio. Cuando se necesite una muestra, colóquela en una de las cámaras de origen. Antes de probar con un olor, exponga los Cates a aire limpio frente a aire limpio y solvente frente a aire limpio en el Olfactómetro T MAs.Esto sirve para verificar la ausencia de sesgo posicional o de un solvente efectivo sobre los sujetos de prueba. Para comparar aire limpio frente a aire limpio, inicie el flujo de aire purificado y humedecido a través de cámaras fuente vacías mediante dos bombas conectadas a un sistema de suministro de aire. Mantenga el flujo de aire a 0,1 litros por minuto a través de ambos brazos del olfatómetro.Asegúrese de que todas las observaciones se realizarán a una temperatura estándar y humedad relativa. Comience ahora esta prueba de control colocando aproximadamente 20 SIDS en la cámara. Observe los SIDS durante un intervalo predeterminado entre 100 y 300 segundos.El peso les permite responder al entorno. Una vez transcurrido el tiempo, registre la respuesta de los CID al entorno de prueba. Puntúe una elección del brazo izquierdo por cada ILI que cruce a la parte izquierda del laberinto en T por encima del punto más bajo del divisor. Puntúe de forma análoga para el brazo derecho.Asigne una puntuación a una opción del brazo de liberación si no se ha hecho ninguna otra elección. Una vez registradas todas las respuestas, recoja los CIDs utilizando un aspirador. Realice una prueba similar con disolvente frente a aire limpio introduciendo una mecha de disolvente en una de las cámaras de origen.Utilice un conjunto diferente de CIDs para las observaciones tras las corridas de control. Comience la prueba de olores asignando aleatoriamente una fuente de olor a uno de los brazos del olfactómetro al inicio de cada bioensayo. Invierta esta posición después de cada 10 sujetos de prueba como mínimo para eliminar posibles sesgos por posición.Nuevamente, verifique que el flujo de aire, la temperatura y la humedad no hayan cambiado. Introduzca uno o más sates en la cámara por cada ensayo. Para la prueba aquí descrita, se introducen aproximadamente 10. Evalúe la respuesta de un mínimo de 30 y hasta 120 sujetos de prueba por combinación de olores.Observe los estados durante 100 a 300 segundos para permitir que exhiban una respuesta conductual. El intervalo de tiempo debe establecerse previamente. Registre las elecciones de brazo de los sujetos de prueba anotando una elección de olor cuando un sujeto entra en el brazo del olfatómetro con el olor, o una elección de brazo control o una elección de brazo de liberación.Finalmente, una vez que se hayan registrado todas las observaciones, retire los CID utilizando un aspirador antes de usar el montaje para un tratamiento con un olor diferente, limpie minuciosamente el olfactómetro y el tubo de conexión con una solución de SOAP al 2 % y someta las piezas de vidrio a horneado a 200 grados Fahrenheit durante 24 horas. Este gráfico muestra la respuesta del cítrico asiático frente a los volátiles de las plantas hospederas cítricas en comparación con el control de aire limpio. Este gráfico muestra la respuesta del cítrico asiático frente a los volátiles cítricos en comparación con los volátiles cítricos coemitidos con disulfuro de dimetilo, un repelente presente tanto en el gráfico superior como en el inferior.Las columnas etiquetadas con una letra son estadísticamente significativamente diferentes entre sí con una confianza mayor al 95 %. De acuerdo con un análisis de varianza de un solo factor seguido por la prueba de diferencia significativa honesta de Tukey. Los factores varían ampliamente en su diseño y a menudo se adaptan, diseñándose para el problema específico de insectos que se está investigando.El presente artículo describe el diseño y uso de un reflectómetro orientado verticalmente para medir la respuesta de insectos a una variedad de olores.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

En este artículo de vídeo, se describe un nuevo método que permite la construcción de los gradientes de olor con geometrías estable y controlable. Nos muestra brevemente cómo estos gradientes se pueden utilizar para la detección de defectos olfativos (anosmia total y parcial) y el estudio de las características más sutiles de comportamiento quimiotaxis.

De alta resolución de medición del comportamiento de olor-Driven en larvas de Drosophila

Larvas de Drosophila son capaces de asociarse con estímulos de olor recompensa gustativa. Aquí se describe un sencillo paradigma de comportamiento que permite el análisis de apetito aprendizaje olfativo asociativo.

Apetitivo aprendizaje asociativo olfativa en<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas

Las moscas de la fruta tienen un sistema olfativo complejo, pueden discriminar cientos de odorantes y utilizan su sentido del olfato para dirigir las decisiones de comportamiento. Este video describe el ensayo del olfatómetro de cuatro vías, un método para estudiar las respuestas del comportamiento olfativo en moscas. El clip de protocolo presentado muestra cómo manejar las moscas de prueba y cuáles son los pasos críticos mientras se realiza el ensayo.

Ensayo de olfatómetro de cuatro vías: un método para evaluar las respuestas de olor en Drosophila

Este video describe un método para probar el comportamiento exploratorio olfativo en la mosca de la fruta, llamado el laberinto Y. El clip de protocolo destacado muestra cómo configurar y realizar el ensayo.

Drosophila Ensayo de laberinto en Y: un método para evaluar las respuestas olfativas en moscas

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C. elegans Ensayo de quimiotaxis

En este artículo de vídeo, se describe un ensayo automatizado para medir el efecto del hambre o la saciedad en el comportamiento de búsqueda de comida dependiente olfativo en la mosca adulta fruta Drosophila melanogaster.

Un ensayo de una sola mosca por el comportamiento de forrajeo en Drosophila

Se presenta una prueba de elección para revelar la influencia de sustancias odoríferas en el comportamiento de Drosophila utilizando un ensayo del laberinto.

Pruebas<em&gt; Drosophila</em&gt; El olfato con un ensayo del laberinto

El Flywalk automatizado sistema de seguimiento se utiliza para la alta resolución de la cuantificación del comportamiento de olor guiada en Drosophila melanogaster.

De alta resolución de cuantificación del comportamiento guiado Olor en<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Uso de la<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

Describimos aquí una configuración conductual y un método de análisis de datos para analizar las respuestas olfativas de hasta 100 moscas del vinagre (Drosophila melanogaster). Este sistema puede ser utilizado con estímulos olfativos únicos o múltiples, y adaptable para la activación optogenética o el silenciamiento de subconjuntos neuronales.

Comportamientos olfativas ensayó mediante seguimiento informático de<em&gt; Drosophila</em&gt; En un olfatómetro de cuatro cuadrantes

Aquí, describimos la construcción y el uso de un túnel de viento para olor había mediada ensayos conductuales con insectos. El diseño de túnel de viento facilita la liberación de las fuentes de olor por varios métodos, con y sin estímulos visuales. Túnel de viento los experimentos es métodos importantes para identificar su comportamiento activos sustancias químicas volátiles.

Un túnel de viento para olor mediada por insectos ensayos conductuales

Los laberintos en Y permiten a los investigadores determinar la relevancia de estímulos específicos que impulsan el comportamiento animal, especialmente señales químicas aisladas de una variedad de fuentes. El diseño y la planificación cuidadosos pueden producir datos sólidos (por ejemplo, discriminación, grado de exploración, comportamientos numerosos). Este aparato experimental puede proporcionar una visión poderosa de las cuestiones de comportamiento y ecológicas.

Uso de laberintos en Y cerrados para evaluar el comportamiento quimiosensorial en reptiles

Aprende a medir respuestas olfativas en artrópodos mediante un olfactómetro vertical en T. Este método permite evaluar atracción y repulsión a diferentes odorantes en insectos.

Vertical T-laberinto Choice Ensayo para la respuesta a los olores artrópodos

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