Ensayo Preferencia luz para estudiar innata y circadiano Photobehavior Regulado de

El objetivo general del siguiente experimento consiste en evaluar el comportamiento fototáctico innato y circadiano de las larvas de Drosophila mediante una prueba de preferencia entre luz y oscuridad. Esto se logra primero criando las larvas experimentales bajo condiciones definidas de luz y oscuridad, con el fin de establecer un reloj circadiano inicial en las larvas. A continuación, se cambia a las larvas a oscuridad constante, lo que permite que el reloj circadiano larval funcione libremente.

Una vez que las larvas alcanzan la etapa de alimentación L3, se clasifican en grupos para probar su preferencia por la luz en diferentes momentos circadianos. Se obtienen resultados que muestran la preferencia innata y circadiana por la luz, basados en el cálculo de un índice de preferencia y en la comparación entre momentos temporales y grupos experimentales. Aunque este método puede proporcionar información sobre la regulación innata y circadiana de la detección de luz y el procesamiento del comportamiento fototáctico, también puede aplicarse a otros sistemas, como la olfacción, la gustación, la quimiotaxis y la termotaxis.

Asimismo, puede modificarse para pruebas de aprendizaje y memoria. Realizarán el procedimiento Alina y BMA para estudiantes universitarios con el fin de recolectar huevos; permita que las moscas adultas apareadas depositen huevos durante 12 horas en placas frescas y transfiéralas a nuevos viales. Siga transfiriendo a los adultos cada 12 horas durante un ciclo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Mantenga las colecciones de huevos de 12 horas en el incubador. Para el experimento, críe los animales hasta la etapa temprana de larva L3. Estas larvas se alimentan y están disponibles entre 84 y 108 horas después del huevo.

Colocar La correcta sincronización de LAE es fundamental para el éxito del experimento. Dado que en fases tardías del estadio L3, el LAE modifica el comportamiento fotóptico para probar los componentes circadianos del comportamiento visual, 48 horas antes de la prueba y justo antes del amanecer subjetivo de las larvas, coloque las larvas recolectadas en una caja de cartón.

Luego, transfiera la caja a un incubador con oscuridad constante durante 48 horas hasta el experimento; estas larvas deben permanecer inalteradas en su espacio designado. Prepare la tapa de un recipiente de Petri de nueve centímetros utilizando un cuadrado de 20 centímetros dividido en cuatro cuadrantes. Como guía.

Pegue cuadrados de 10 centímetros de papel de aluminio en cuadrantes opuestos y cúbralos con cinta negra. Asegúrese de cubrir el borde de la tapa. A continuación, pegue un cuadrado de 20 centímetros dividido en cuatro cuadrantes debajo de la fuente de luz sobre la mesa.

Marque la circunferencia de un recipiente de prueba sobre la hoja para usarla como guía para un desplazamiento consistente. Instale una lámpara LED por encima del recipiente de Petri utilizando un soporte de hierro. Ajuste la altura de manera que toda la placa de prueba quede iluminada de forma homogénea.

Ajuste la intensidad de la luz en un sitio de prueba entre 350 y 760 lux, ya sea ajustando aún más la altura de la lámpara o utilizando una fuente de alimentación regulable. El cuarto del experimento necesita iluminación con luz roja y debe tener la misma temperatura que el lugar donde se crían los animales. Los viales se criaron dos días bajo oscuridad constante.

Recoger la larva junto con su alimento utilizando una espátula desde los cinco milímetros superiores del alimento. Extender el alimento sobre la cara externa de la tapa de una placa de Petri. Añadir un poco de agua al alimento y mezclar suavemente con la espátula.

Agregue una gota de agua del grifo a un nuevo recipiente utilizando un pincel. Transfiera las larvas a la gota de agua para lavarlas. Luego, use un pincel húmedo para recoger las larvas.

Seleccione solo las larvas L3 alimentándose tempranamente y evite las larvas L3 en etapa tardía de errancia. Transfiera las larvas seleccionadas al centro de una placa de prueba. Las larvas L3 alimentándose tienen esferas anteriores abiertas y protruidas hacia el exterior.

En forma de dedo. Los esféricos posteriores tienen tres aberturas cada uno y cuatro grupos de pelos ramificados grandes. Las glándulas salivales se extienden hasta el segundo segmento abdominal.

Una vez que se hayan colocado 30 larvas en el centro de la placa de prueba, cúbrala con la tapa preparada. Encienda la lámpara LED. Inicie un cronómetro y deje que las larvas se muevan libremente sobre la placa durante cinco minutos.

Luego, retire rápidamente la tapa y cuente el número de larvas en los cuadrantes oscuro y claro. Marcar la posición de cada larva puede facilitar el conteo. Una fotografía rápida también puede ayudar. Las larvas que muestren una preferencia luminosa poco clara, como las que se arrastran por las paredes o se entierran en el agar, deben contarse como preferencia neutral y sumarse al número total de larvas al calcular el índice de preferencia luminosa.

Después de contar las larvas, deseche la placa y utilice una placa de prueba nueva para el siguiente experimento. Después de realizar entre 10 y 15 ensayos por genotipo, continúe con el análisis siguiendo el protocolo. Se comparó la preferencia por la luz y la oscuridad de las larvas Canton ES en dos momentos circadianos diferentes.

CT cero y CT 12, subjetivamente, larvas al amanecer y al anochecer o cría durante 48 horas en condiciones estándar y luego cambie a oscuridad constante durante tres días. La prueba de luz y oscuridad bajo 350 lux reveló que la fotosensibilidad a la luz era mayor en larvas evaluadas en CT cero en comparación con larvas evaluadas en CT 12. Usando esta fórmula, la preferencia por la oscuridad de las larvas en CT cero fue de 0,52 frente a 0,36.

Las larvas CT 12 comparando los índices utilizando una prueba de Wilcoxon producen un valor P significativo de 0,023. Después de ver este video, deberías tener una buena comprensión de cómo probar la preferencia por la luz de larvas trof en diferentes circuitos y puntos temporales respecto a este objetivo. Deberías ser capaz de sincronizar en la etapa F tres larvas oph, evaluar su comportamiento fotofóbico y calcular el índice de preferencia por la luz para su comparación estadística.