Los ensayos acoplados para Monitoreo replegamiento de proteínas en Saccharomyces cerevisiae

El objetivo general de este procedimiento es monitorizar la resolubilización y el repliegue de proteínas in vivo casi en tiempo real mediante microscopía de fluorescencia y ensayos enzimáticos. Esto se logra transformando primero las células con un plásmido que contiene luciferasa de luciferasa de luciérnaga fusionada con una proteína fluorescente verde o F-F-L-G-F-P. El segundo paso es inducir la expresión de la proteína F-F-L-G-F-P, seguido de un tratamiento con cicloheximida para detener la producción de la proteína.

A continuación, mida la actividad de la luciferasa antes y durante un período de tiempo después de la desnaturalización térmica. El paso final es visualizar las células para determinar la solubilidad de la proteína F-F-L-G-F-P. En última instancia, la microscopía de fluorescencia y los ensayos enzimáticos se utilizan para cuantificar la eficiencia de la reactivación de una enzima modelo desplegada en múltiples cepas.