Un método eficaz para Deshuesado Manual Preparar Intact ratón tejido nasal con la organización anatómica Conservas

Hola, soy David Dunton del laboratorio del Dr. Wung Lynn en la UMBC. En este video, mostramos una técnica eficaz para preparar tejido nasal de ratón conservando su organización anatómica. Esta técnica permite obtener un único espécimen que contiene casi la totalidad del tejido nasal, incluyendo tejido respiratorio y olfativo, así como tejido epitelial y subepitelial.

Mostramos la eliminación paso a paso de varios huesos faciales que rodean el tejido nasal, preservando incluso los tejidos más delicados, como los extremos del epitelio olfativo principal. Nuestro método presenta ventajas significativas frente a los métodos de descalcificación, ya que evita tratamientos químicos agresivos y la eliminación del hueso puede realizarse en 20 a 30 minutos. Otras ventajas de esta técnica son que no está limitada por la edad del ratón y que puede realizarse utilizando tejido fijado o fresco.

Estas ventajas hacen que nuestra técnica sea ideal para estudios morfológicos, inmunohistoquímicos y fisiológicos. A continuación se muestra un diagrama esquemático de la vista dorsal de los huesos del cráneo y de la nariz. En este video, nos centraremos en la disección de los huesos de la nariz.

Este es un diagrama esquemático de la vista ventral de los huesos del cráneo y de la nariz. Esta es una vista dorsal con un cráneo y una nariz sin disecar en la parte superior y una nariz disecada en la parte inferior. Ahora se muestran los extremos del epitelio olfatorio principal.

Aquí mostramos los huesos de la nariz comenzando desde el aspecto dorsal. Esta es la parte dorsal de la placa cigomática, seguida por el arco cigomático. Este es el hueso nasal, y a continuación se muestra la placa cribiforme ubicada caudalmente.

Lo más anterior es la ubicación del ganglio de Gruenberg. Desde la vista lateral, mostramos la porción del hueso etmoides que cubre el turbinate del epitelio olfativo humano, el ganglio de Gruenberg, el maxilar y los incisivos frontales. Al cambiar a una vista ventral, mostramos los molares, los incisivos frontales, el hueso palatino y el hueso vomer.

Comience la eliminación del hueso vulner observando la cara ventral de la nariz. Para eliminar el hueso vulner, utilice pinzas para fracturarlo a lo largo de su longitud y luego retire los fragmentos óseos volteándolos lejos del tejido subyacente, con el fin de evitar dañar el órgano nasal RO. Para esta tarea, utilice jurados para fracturar la parte ventral de los incisivos frontales.

Utilice un movimiento de sujeción y rompa los incisivos frontales hacia la ubicación del hueso ulmer. Una vez que los incisivos frontales estén rotos, retire los fragmentos óseos restantes que estén conectados al tejido utilizando fórceps. Para aflojar el maxilar, comience desde la parte ventral y rompa el maxilar justo por debajo del arco cigomático.

Gire el hocico hacia el aspecto dorsal y rompa el maxilar justo anterior al arco cigomático. Para aflojar el maxilar y extraer el lado derecho del hueso nasal, retire el resto del hueso frontal adyacente al lado derecho del hueso nasal. Utilizará Ron jurors para esta tarea.

Es necesario tener precaución al usar los fórceps de Rosen para evitar dañar la lámina cribiforme delgada, ya que el daño a esta lámina puede provocar que la nariz se parta por la mitad. Levante y retire el hueso fracturado. A continuación, gire la parte dorsal de la lámina cigomática alejándola del tejido subyacente.

Seccione el hueso nasal a lo largo de su línea media. Con un par de pinzas o una goma de borrar, sujete este hueso con las pinzas y mueva suavemente el hueso de un lado a otro mientras lo levanta. Este procedimiento debe realizarse con cierta delicadeza, ya que es fácil dañar el tejido subyacente al retirar el hueso. Una vez que el hueso ha sido removido, puede observarse por separado el tejido subyacente, como se muestra en esta imagen fija.

Para eliminar el hueso, córtele simplemente con pinzas o tijeras. Ahora proceda a retirar el maxilar anterior. Si aún no se ha eliminado en este momento, el maxilar anterior ya está suelto, así que retírelo rompiendo cualquier conexión restante con el tejido.

Desde una vista dorsal en forma de U, retire el hueso frontal que se encuentra justo junto al lado izquierdo del hueso nasal. Utilice los fórceps Ron para fracturar el hueso frontal. Puede usar mandíbulas sin pulir o pinzas para eliminar ese fragmento del hueso frontal.

También puede aflojar la maxila en este momento, aunque no es necesario. Para extraer el lado izquierdo del hueso nasal, utilice la pinza y separe suavemente el hueso nasal de muchos de los huesos circundantes. Luego, agarre este hueso con la pinza y muévalo generalmente de un lado a otro mientras lo levanta para separar el hueso nasal del tejido subyacente.

A medida que el tejido subyacente se separa del hueso, a veces es posible utilizar una vista lateral para observar el tejido conectado al hueso. Use la pinza para separar suavemente el tejido adherido al hueso y luego retire el hueso con tijeras o pinzas. Una vez eliminado el hueso nasal, retire el maxilar anterior del lado izquierdo de la nariz utilizando la misma técnica empleada para retirar el maxilar anterior del lado derecho de la nariz.

El siguiente paso consiste en retirar la placa cigomática en el lado izquierdo de la nariz. Es posible que aún exista alguna adherencia entre la placa cigomática y el tejido subyacente, y en ese caso, puede utilizar los fórceps crudos para sujetar suavemente y aflojar la parte dorsal de la placa cigomática. Observe el aspecto ventral de la nariz.

Para identificar los molares y el hueso palatino, puede extraerse ya sea el molar o el hueso palatino. Primero, esta es una vista del aspecto lateral de la nariz, y esta vista muestra la eliminación de los molares en el lado derecho de la nariz. Utilizando el cráneo con el lado derecho del maxilar removido, se extrae el hueso palatino.

A continuación, rompa la maxila restante y los molares, y retire cualquier fragmento óseo grande del hueso palatino o de la maxila. Rompa y retire cualquier resto de hueso etmoidal que sobresalga cerca del epitelio olfatorio. Coloque la pinza fina debajo del hueso y levante el hueso para separarlo del tejido subyacente.

Alternativamente, utilice el fórceps de Rogers como se muestra aquí para romper el hueso y luego use la pinza fina para separar el hueso del tejido subyacente. Así es como se ve el cornete del epitelio olfativo humano. Con el hueso húmedo removido, este hueso será eliminado.

A continuación, se encuentra cuneiforme y medial al hueso nasal, y este hueso se eliminará utilizando gers. Tenga precaución durante este paso para evitar dañar la lámina cribosa. Una vez que el hueso esté fracturado, utilice pinzas para retirar el hueso.

A continuación se muestra una vista del hocico. Una vez que se ha eliminado este hueso, queda por revisar una última zona alrededor del órgano nasal V. Debido a que existe un hueso que separa los tubos apareados del órgano nasal V, que estoy eliminando justo ahora en esta disección.

Esta es la vista dorsal de una nariz que ha sido diseccionada utilizando nuestra técnica. A continuación, hemos girado una nariz para mostrar sus diferentes aspectos. Esta es la vista dorsal, seguida de la vista lateral del lado izquierdo de la nariz y la vista ventral.

Ahora mostramos en detalle las características de una nariz completamente diseccionada utilizando nuestra técnica, comenzando con el aspecto dorsal de la nariz. La primera parte que mostramos son los cornetes del epitelio refrector principal. Hay burbujas de aire en el tejido subyacente a los huesos nasales, y estas burbujas de aire se eliminan mediante aspiración de la muestra desde la vista lateral.

Mostramos el cornete intacto del epitelio olfativo humano. Observe que hay burbujas de aire presentes dentro de los cornetes. El tejido glandular se encuentra anterior al cornete y el epitelio respiratorio es visible desde esta vista lateral.

Desde la vista ventral, es visible el órgano nasal vulnerable. Esta imagen muestra una extensión de nuestra técnica de disección, eliminando los bulbos olfativos del cerebro y la nariz en un solo espécimen. Para preparar el tejido para el corte, primero tome un molde de plástico y llénelo con medio de temperatura óptima para corte.

Coloque el tejido de interés dentro del molde lleno y coloque el molde dentro de un círculo de grasa de silicona sobre un recipiente de plástico; se colocará un matraz sobre el círculo de grasa de silicona para crear un sello para el vacío. Nuestro laboratorio utiliza un vacío creado por el flujo de agua. Una vez creado el vacío mediante el flujo de agua, las burbujas son extraídas del tejido.

Se detiene el vacío apagando el agua y liberando el tubo. A continuación, retire el molde de plástico. Aquí estoy moviendo el tejido a su orientación deseada antes de congelar el tejido.

Nuestro laboratorio utiliza hielo seco para congelar los tejidos. Estos son resultados representativos del corte de una nariz mediante nuestra técnica de disección y tinción con rojo neutro. Esta es una sección horizontal que muestra los cornetes del epitelio efector del hombre, tejido glandular y epitelio respiratorio.

La segunda sección es una sección coronal que muestra el patrón de plegamiento complejo de los cornetes del epitelio olfatorio principal. En este video, mostramos una técnica para deshuesar manualmente la nariz y obtener un espécimen ideal para estudios morfológicos, inmunohistoquímicos o fisiológicos.