Diferencias Evaluación de Capacidad Competitiva de espermatozoides en Drosophila

El objetivo general del siguiente experimento es probar las diferencias en la capacidad competitiva de los espermatozoides entre los machos drosophila, melanogaster con genotipos distintos. Esto se logra mediante el seguimiento de marcadores genéticos visibles que identifican la paternidad de la progenie de una hembra apareada con dos machos diferentes, genotipos en el ensayo, primero se permite a las hembras aparearse con un macho de referencia y luego se les permite aparearse con un macho experimental. La fracción de la descendencia seleccionada por el macho experimental se infiere examinando la coloración de los ojos de la progenie.

Los resultados comparan indirectamente la capacidad competitiva de los espermatozoides masculinos experimentales por su rendimiento relativo con los espermatozoides masculinos de referencia. Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas clave en los campos de la genética y la evolución en biología, como la evaluación del impacto de un factor genético en la capacidad competitiva de la SPR, demostrando este procedimiento será S y estudiantes de pregrado de nuestro laboratorio. El siguiente protocolo ilustra el análisis de un factor genético llamado sic, que presumiblemente codifica una proteína involucrada en la motilidad de los espermatozoides.

Comience colocando de 15 a 20 viales en cada vial. Espolvoree ligeramente el medio con unos pocos gránulos de levadura activa seca. Para facilitar la posición de ove.

Utilice siempre medios nutritivos frescos, como un medio de levadura de harina de maíz. Luego, a cada vial, agregue de ocho a 10 hembras, pero no más, y agregue cinco machos. La identificación del sexo se puede lograr mediante la inspección visual de algunas diferencias morfológicas.

Guarde los viales a 25 grados centígrados y transfiera los adultos a viales nuevos al menos cada tres a cinco días. Transfiera a los adultos cada dos días para obtener el mejor resultado. Retenga los frascos que contienen el huevo para cosechar la progenie.

El número de viales necesarios dependerá del número de machos experimentales en el estudio y del número estimado de individuos necesarios para obtener potencia estadística. Cuatro o cinco días después de que los padres sean transferidos fuera de un vial, aumente la superficie disponible para la pupación en el vial insertando un papel multidoblado en el medio. Examina los frascos en busca de pupas oscurecidas cuando sean visibles.

Esas moscas saldrán dentro de las 24 horas, de 11 a 12 días después de que se colocó la cruz por primera vez. Comience a cosechar hembras vírgenes y machos ingenuos de estos viales. A primera hora de la mañana, descarte las moscas que emergieron durante la noche.

Luego, una o dos veces durante el día, en intervalos de cuatro a seis horas, recoja las moscas de los viales, anestesia las moscas introduciendo dióxido de carbono en el vial. A continuación, golpea las moscas y sexúralas bajo el microscopio estereoscópico. Coloque las moscas deseadas en diferentes viales por sexo y fenotipo y etiquete los viales adecuadamente.

No cargue los viales con más de 10 posiblemente. Las hembras vírgenes establecen un ciclo de 12 a 12 luces oscuras en las moscas para regular su tiempo de oclusión a su favor. Las horas pico de oclusión ocurren una o dos horas después del amanecer subjetivo, y dos horas antes de que se apaguen las luces.

Hay dos versiones de este experimento. Se les conoce como el ensayo de ataque y el ensayo de defensa. En esta sección se describe cómo realizar el ensayo de ofensa en la mañana del primer día, configurando el primer apareamiento con un aspirador.

Un aspirador consiste en una pieza de tubo unida a una punta de pipeta con una barricada que mantiene las moscas aspiradas en la punta. El orificio de la punta se ensancha. Para las moscas, prepare frascos que contengan diez hembras vírgenes de cuatro o cinco días de edad.

Con 10 machos de referencia naïve se prepararon dos o tres viales de este tipo al día durante cinco días consecutivos. Para cada vial, permita que las moscas se apareen durante dos horas, luego deseche los machos de referencia y transfiera cada hembra a un nuevo vial usando un aspirador, etiquete cada vial V uno y deje a la hembra en el vial durante dos días. Al tercer día, se establece el segundo apareamiento para los machos ingenuos del otro genotipo para cada hembra.

Dos horas antes del anochecer subjetivo, use un aspirador para transferir a la hembra a un nuevo vial con tres, cinco o seis machos experimentales del mismo genotipo. Etiquete los viales con el genotipo masculino y etiquete el nuevo vial V dos. A la mañana siguiente es el cuarto día.

Dos horas antes de que las moscas sean subjetivas, al amanecer se descartan los machos mediante el uso del aspirador. Al sexto día, transfiera cada hembra a otro vial nuevo etiquetado como V tres. El 10º día, desechar las hembras el 17º día.

Inspeccione los viales V one de la progenie. Determine si la hembra era virgen o no cuando se apareó con la cota de correo de referencia y si se apareó con la cota de correo de referencia. El mismo día, inspeccione la progenie de los dos viales V derribando las moscas con carbón.

Ordénalos por color de ojos y sexo. Luego anote el número de progenie engendrado por el primer y segundo macho. En este experimento, solo la progenie femenina puede ser asignada inequívocamente como citada por la referencia o los machos experimentales.

En otros experimentos, también se podrían utilizar diferentes marcadores genéticos para determinar la paternidad de la descendencia masculina. Deseche la progenie inspeccionada, pero guarde los dos viales V por un segundo. Inspección el día 20, registre la paternidad de la progenie de los dos viales V por segunda vez y realice la primera inspección de la progenie emergida de los tres viales V.

Luego, tres días después, el día 23, inspeccione la progenie emergida en V tres. Una vez más, los recuentos de progenie registrados deben organizarse adecuadamente para una fácil inspección visual y un análisis eficiente con un paquete estadístico para cada hembra y los recuentos de V dos y V tres. Para calcular el número total de progenies citadas por el macho de referencia y el macho experimental, se calcula la puntuación P dos para cada hembra como la proporción de progenie citada por el macho experimental sobre la progenie de los machos experimentales y de referencia.

Algunas hembras deben ser excluidas del análisis. En primer lugar, las que no tenían descendencia o tenían una progenie muy limitada, las segundas hembras que murieron durante el procedimiento y las terceras hembras que solo fueron inseminadas con éxito por uno de los dos machos. Busque diferencias estadísticas en los dos valores de P.

Entre los tipos experimentales de hombres, se utilizan pruebas paramétricas o no paramétricas basadas en el sesgo de la distribución de valores de P dos y la dependencia entre la varianza y la proporción media. Por lo general, los datos no se distribuyen normalmente. La transformación del signo de arco, también conocida como transformación angular, se puede aplicar a los valores originales de P dos antes de la prueba T de un estudiante o una prueba NOVA, o simplemente usar pruebas no paramétricas como los experimentos de WIL Coxin de dos ofensas con Drosophila melanogaster.

Los machos experimentales se realizaron uno con y otro sin un conglomerado funcional de ESIC. En total, entre el 58% y el 83% de las mujeres fueron informativas. Los varones sin un conglomerado funcional de ESIC mostraron puntuaciones de P dos significativamente más bajas en comparación con los varones con el conglomerado de ESIC intacto.

Esto indica que el grupo SIC aumenta la capacidad competitiva de los espermatozoides. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar experimentos de doble apareamiento, para que pueda detectar las diferencias en la capacidad competitiva de los espermatozoides entre los machos mutantes y de control.