Name: Aislamiento Manual de células madre derivadas de tejido adiposo de Lipoaspirates Humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-26T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Aprende el aislamiento manual de células madre derivadas de tejido adiposo de lipoaspirados humanos mediante digestión enzimática con colagenasa. Este protocolo permite obtener células viables para estudios de diferenciación y aplicaciones en medicina regenerativa.

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Los autores desean reconocer y agradecer a aquellos más personal de investigación que han contribuido al desarrollo del protocolo descrito y su aislamiento de la ASC, incluyendo: Dr. H. Peter Lorenz, MD, Dr. Hiroshi Muzuno, MD, Dr. Jerry Huang, MD , el Dr. Adam Katz, MD, Dr. William Futrell, MD, Dr. Rong Zhang, DDS, PhD, Dr. Larissa Rodríguez, MD, Dr. Zeni Alfonso, PhD, y el Dr. John Fraser, PhD. Los resultados presentados fueron financiados, en parte, por las becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud, incluidos los NIAMS e Institutos NIDCR.

<ol><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-lineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).</li>
<li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+isolated+fat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolism of isolated fat cells.</a> J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).</li>
<li>Poznanski, W. J., Waheed, I., Human Van, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fat+cell+precursors.+Morphologic+and+metabolic+differentiation+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">fat cell precursors. Morphologic and metabolic differentiation in culture.</a> Lab Invest. 29 (5), 570-576 (1973).</li>
<li>Zuk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+Stem+Cells+in+Tissue+Regeneration%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived Stem Cells in Tissue Regeneration: A Review.</a> ISRN Stem Cells. , in press (2012).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li>
<li>Mitchell, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotype+of+human+adipose-derived+cells%3A+temporal+changes+in+stromal-associated+and+stem+cell-associated+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers.</a> Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16 (1), 91-104 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+freshly+isolated+and+cultured+cells+derived+from+the+fatty+and+fluid+portions+of+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates.</a> J Cell Physiol. 208 (1), 64-76 (2006).</li>
<li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li>
<li>Chung, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD90+%28Thy-1%29+Positive+Selection+Enhances+Osteogenic+Capacity+of+Human+Adipose-Derived+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">CD90 (Thy-1) Positive Selection Enhances Osteogenic Capacity of Human Adipose-Derived Stromal Cells.</a> Tissue Eng Part A. , (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+potential+of+adipose+stem+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Adipogenic potential of adipose stem cell subpopulations.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (3), 663-672 (2011).</li>
<li>Rada, T., Reis, R. L., Gomes, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+stem+cells+subpopulations+isolated+from+human+adipose+tissue+exhibit+different+chondrogenic+and+osteogenic+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Distinct stem cells subpopulations isolated from human adipose tissue exhibit different chondrogenic and osteogenic differentiation potential.</a> Stem Cell Rev. 7 (1), 64-76 (2011).</li>
<li>Heydarkhan-Hagvall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Adipose+Stem+Cells%3A+A+Potential+Cell+Source+for+Cardiovascular+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Human Adipose Stem Cells: A Potential Cell Source for Cardiovascular Tissue Engineering.</a> Cells Tissues Organs. 187 (4), 263-274 (2008).</li>
<li>Jack, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processed+lipoaspirate+cells+for+tissue+engineering+of+the+lower+urinary+tract%3A+implications+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+bladder+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Processed lipoaspirate cells for tissue engineering of the lower urinary tract: implications for the treatment of stress urinary incontinence and bladder reconstruction.</a> J Urol. 174 (5), 2041-2045 (2005).</li>
<li>Banas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hepatic+fate+specification+of+adipose-derived+stem+cells+and+their+therapeutic+potential+for+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Rapid hepatic fate specification of adipose-derived stem cells and their therapeutic potential for liver failure.</a> J Gastroenterol Hepatol. 24 (1), 70-77 (2009).</li>
<li>Schreml, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harvesting+human+adipose+tissue-derived+adult+stem+cells%3A+resection+versus+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Harvesting human adipose tissue-derived adult stem cells: resection versus liposuction.</a> Cytotherapy. 11 (7), 947-957 (2009).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Ahmad, J., Eaves, F. F., Rohrich, R. J. 3rd, Kenkel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+American+Society+for+Aesthetic+Plastic+Surgery+%28ASAPS%29+survey%3A+current+trends+in+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Surg+J%22%5BJournal%5D)">The American Society for Aesthetic Plastic Surgery (ASAPS) survey: current trends in liposuction.</a> Aesthet Surg J. 31 (2), 214-224 (2011).</li>
<li>Tierney, E. P., Kouba, D. J., Hanke, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+tumescent+and+laser-assisted+liposuction%3A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drugs+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Safety of tumescent and laser-assisted liposuction: review of the literature.</a> J Drugs Dermatol. 10 (12), 1363-1369 (2012).</li>
<li>Mojallal, A., Auxenfans, C., Lequeux, C., Braye, F., Damour, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+negative+pressure+when+harvesting+adipose+tissue+on+cell+yield+of+the+stromal-vascular+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater+Eng%22%5BJournal%5D)">Influence of negative pressure when harvesting adipose tissue on cell yield of the stromal-vascular fraction.</a> Biomed Mater Eng. 18 (4-5), 193-197 (2008).</li>
<li>Matsumoto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+preservation+at+various+temperatures+on+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates.</a> Plast Reconstr Surg. 120 (6), 1510-1517 (2007).</li>
<li>Francis, M. P., Sachs, P. C., Elmore, L. W., Holt, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+from+lipoaspirate+blood+and+saline+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Isolating adipose-derived mesenchymal stem cells from lipoaspirate blood and saline fraction.</a> Organogenesis. 6 (1), 11-14 (2010).</li>
<li>Boquest, A. C., Shahdadfar, A., Brinchmann, J. E., Collas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+stromal+stem+cells+from+human+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of stromal stem cells from human adipose tissue.</a> Methods Mol Biol. 325, 35-46 (2006).</li>
<li>Bunnell, B. A., Flaat, M., Gagliardi, C., Patel, B., Ripoll, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+isolation%2C+expansion+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation.</a> Methods. 45 (2), 115-120 (2008).</li>
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<li>Mosna, F., Sensebe, L., Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells%3A+a+user%27s+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells: a user's guide.</a> Stem Cells Dev. 19 (10), 1449-1470 (2010).</li>
<li>Zachar, V., Rasmussen, J. G., Fink, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+growth+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and growth of adipose tissue-derived stem cells.</a> Methods Mol Biol. 698, 37-49 (2011).</li>
<li>Williams, S. K., McKenney, S., Jarrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+lot+selection+and+purification+for+adipose+tissue+digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion.</a> Cell Transplant. 4 (3), 281-289 (1995).</li>
<li>Wang, H., Van Blitterswijk, C. A., Bertrand-De Haas, M., Schuurman, A. H., Lamme, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+enzymatic+isolation+of+fibroblasts+for+the+creation+of+autologous+skin+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Improved enzymatic isolation of fibroblasts for the creation of autologous skin substitutes.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 40 (8-9), 268-277 (2004).</li>
<li>Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+highly+defined+proteases+for+the+isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells.</a> Regen Med. 3 (5), 705-715 (2008).</li>
<li>Kurita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+centrifugation+on+cells+and+tissues+in+liposuction+aspirates%3A+optimized+centrifugation+for+lipotransfer+and+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of centrifugation on cells and tissues in liposuction aspirates: optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation.</a> Plast Reconstr Surg. 121 (3), 1033-1041 (2008).</li>
<li>Poloni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dedifferentiated+adipocytes+show+similar+properties+to+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dedifferentiated adipocytes show similar properties to bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 30 (5), 965-974 (2012).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+and+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine and tissue banking.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Tallone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+adipose+tissue+contains+several+types+of+multipotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human adipose tissue contains several types of multipotent cells.</a> J Cardiovasc Transl Res. 4 (2), 200-210 (2011).</li>
<li>De Francesco, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD34%2FCD90+ASCs+are+capable+of+growing+as+sphere+clusters%2C+producing+high+levels+of+VEGF+and+forming+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human CD34/CD90 ASCs are capable of growing as sphere clusters, producing high levels of VEGF and forming capillaries.</a> PLoS One. 4 (8), e6537(2009).</li>
<li>Haasters, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+immunocytochemical+characteristics+indicate+the+yield+of+early+progenitors+and+represent+a+quality+control+for+human+mesenchymal+stem+cell+culturing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Morphological and immunocytochemical characteristics indicate the yield of early progenitors and represent a quality control for human mesenchymal stem cell culturing.</a> J Anat. 214 (5), 759-767 (2009).</li>
</ol>

Los autores de este manuscrito son co-inventores de una patente propiedad de la Junta de Regentes de la Universidad de California y licenciado a Cytori Terapéutica.

El tejido adiposo para el aislamiento de las ASC puede venir en muchas formas: desde piezas sólidas de tejido obtenidas mediante resección o lipoplastia en trozos más pequeños obtenidos a través de cualquiera de extracción jeringa o lipoplastia asistida por succión (es decir, la liposucción). Ya sea que las células más SVF (y por tanto ASC) pueden obtenerse a partir de muestras de tejido adiposo resecados o aspirado es claro como estudios contradictorios se han presentado 16, 17. Es posible que cualq...

En el año 2001, una población putativo de células madre multipotentes a partir de tejido adiposo se describe en la revista Tissue Engineering 1. Estas células se les dio el nombre de Procesado células lipoaspirado o PLA, debido a su derivación a partir de tejido lipoaspirado procesado obtenidos a través de la cirugía estética. El método de aislamiento se describe en este artículo se basa en las estrategias enzimáticas existentes para el aislamiento de la fracción del estroma vascular (SVF) a partir de tejido adiposo 2. El SVF se ha definido como una población mínimamente procesado de las células rojas de la sangre, fibroblastos, células endoteliales, células de músculo liso, pericitos y pre-adipocitos que aún tienen que adherirse a un sustrato de cultivo de tejido 2, 3. Se propone El cultivo de esta SVF con el tiempo para eliminar muchas de estas poblaciones de células contaminantes y resultar en una, población fibroblástica adherente. Estos fibroblastos han sido identificados en la literatura en los últimos 40 años, como se pre-adipocitos. Sin embargo, nuestro grupo de investigación demostró que estas células poseían multipotencialidad mesodérmico y renombraron la población SVF adherente como células del EPL. Estudios posteriores de otros numerosos grupos de investigación se han sumado a este potencial, lo que sugiere tanto endodérmico y potenciales ectodérmicas (para revisión ver 4). Desde entonces, numerosos términos adicionales para estas células han aparecido en la literatura. Con el fin de proporcionar algún tipo de consenso, se adoptó el término células o ASC madre derivadas de tejido adiposo en la II conferencia anual IFATS 2. Como tal, el término ASC se utiliza en este artículo. El protocolo descrito en este artículo es un procedimiento relativamente simple que requiere un equipo de laboratorio estándar y utiliza reactivos simples tales como solución salina fosfo-tamponada, reactivos estándar de los medios de cultivo de tejidos y la colagenasa. Se puede producir un gran número de ASC en función de la cantidad de volumen de partida tejido adiposo y la subsiguiente Ctiempo ulture. Sin embargo, el procesamiento de una gran cantidad de tejido adiposo como puede presentar algunos problemas físicos que pueden ser mitigados hasta cierto punto el uso de este protocolo. Además, este protocolo no requiere instalaciones de cultivo de tejidos estériles y campanas de bioseguridad aprobados, necesitando por ello el uso de una instalación de cultivo de tejidos aprobado. Este requisito también puede disminuir la utilidad de la población ASC en aplicaciones clínicas a menos que se aislaron en las buenas prácticas de fabricación de instalaciones aprobadas (GMP) diseñados para el aislamiento y la expansión de los materiales para su uso clínico. Como alternativa, los sistemas automatizados que pueden aislar ASC en un sistema cerrado en el quirófano evitaría este tema clave y permitir el uso inmediato de ASC sin ninguna necesidad para la posterior expansión in vitro. Hasta la fecha, hay seis sistemas automatizados que están disponibles comercialmente para el aislamiento de células a partir de tejido humano. Estos sistemas pueden hacer que sea posible aislar unimportante número de ASC de grandes cantidades de tejido adiposo inmediatamente después de su cosecha. Estos ASC podrían ser reintroducidas en el paciente para una variedad de propósitos regenerativos sin el paciente tener que salir de la sala de operaciones. Además de este protocolo que describe el aislamiento manual de los ASC, un protocolo para el aislamiento automatizado de ASC utilizando el Sistema Celution se da también en un artículo complementario.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reactivo</fuerte></td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco&#8217; s Modificación de Eagle&#8217; s Medium)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>10-013-CV</td><td>con 4,5 g/ml de glucosa, L-glutamina, piruvato de sodio</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td>10.000 UI/ml penicilina/10.000 &#956; g/ml estreptomicina</td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-003-CF</td><td>250 &#956; g/ml anfotericina B</td></tr><tr><td>10X PBS (solución salina tamponada con fosfo)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td>sin calcio, sin magnesio</td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>20-031-CV</td><td>0,25 % tripsina/2,21mM EDTA</td></tr><tr><td>Colagenasa tipo IA (de Clostridium histolyticum)</td><td>Sigma</td><td>C2674</td><td>preparación bruta; < 125 unidades de digestión de colágeno/mg sólido</td></tr><tr><td>FBS (Suero Fetal Bovino) inactivado por calor</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100106</td><td>fuente USDA, inactivado por calor </td></tr><tr><td>Pipetas serológicas de 10 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas de 25 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-106</td><td></td></tr><tr><td>Tubos centrífugos de polipropileno de 50 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-106</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo de tejidos de 100 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo de tejidos de 150 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Unidades de filtro Stericup de 500 ml</td><td>Membrana Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>PES, 0.22 &#956; m pore</td></tr><tr><td>Filtros de células</td><td>FisherBrand</td><td>22-363-549</td><td>100 &#956; m malla de nylon</td></tr><tr><td>dexametasona - soluble en agua</td><td>Sigma</td><td>D-2915</td><td></td></tr><tr><td>L-ácido ascórbico 2 fosfato</td><td>Sigma</td><td>A-8960</td><td></td></tr><tr><td>&#946;-glicerofosfato sal disódica </td><td>Sigma</td><td>G-9422</td><td>también conocida como glicerofosfato</td></tr><tr><td>insulina</td><td>Sigma</td><td>I-6634</td><td>hecha de páncreas bovino</td></tr><tr><td>indometacina</td><td>Sigma</td><td>I-7378</td><td></td></tr><tr><td>apo-transferrina</td><td>Sigma</td><td>T-4382</td><td></td></tr><tr><td>TGF&#946; 1</td><td>R& D Systems</td><td>240-B-002</td><td>Aceite humano recombinante</td></tr><tr><td>Rojo O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Azul alcián</td><td>Sigma</td><td>A-5268</td><td></td></tr><tr><td>Nitrato de plata</td><td>Sigma</td><td>S-0319</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Fisher Scientific</td><td>30525-89-4</td><td>suministrado como stock al 16 %</td></tr><tr><td colspan="4">[encabezado]</td></tr><tr><td colspan="4">Equipo necesario</fuerte> </td></tr><tr><td>Clase II A/B Campana de bioseguridad</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Ensure tiene líneas de vacío para la aspiración</td></tr><tr><td>Centrífuga de sobremesa</td><td>Hermle Labnet</td><td>Z383</td><td>Se requiere rotor basculante para tubos de 50 ml, capaz de 1200xg</td></tr><tr><td>Baño de agua </td><td>Fisher Scientific Isotemp</td><td>S52602Q</td><td>capacidad de 5-10 L, capaz de 37C</td></tr><tr><td>Ayudas de pipeta automatizadas</td><td>Drummond Pipette Aid XL</td><td>4-000-105</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubadora</td><td>Thermo Scientific</td><td>Forma 310</td><td>de calor directo o agua encamisada</td></tr></tbody></table>

aislamiento manual de células madre derivadas de tejido adiposo de lipoaspirates humanos

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

En 2001, investigadores de la Universidad de California, Los Ángeles, describen el aislamiento de una nueva población de células madre adultas de tejido adiposo por liposucción que inicialmente denominan células lipoaspirado procesados ​​o células del EPL. Desde entonces, estas células madre se han renombrado como células o ASC madre derivadas de tejido adiposo y han pasado a convertirse en una de las poblaciones de células madre adultas más populares en el campo de la investigación con células madre y la medicina regenerativa. Miles de artículos ahora describen el uso de ASC en una variedad de modelos animales de regeneración, incluyendo la regeneración del hueso, la reparación del nervio periférico y la ingeniería cardiovasculares. Artículos recientes han comenzado a describir la miríada de usos para las ASC en la clínica. El protocolo se muestra en este artículo se describe el procedimiento básico para la mano y el aislamiento de las ASC enzimáticamente a partir de grandes cantidades de lipoaspirates obtenidos de los procedimientos cosméticos. Este protocolo se puede escalar fácilmente hacia arriba o hacia abajo para accommodcomió el volumen de lipoaspirado y puede ser adaptado para aislar las ASC de tejido graso obtenidos a través de abdominoplastías y otros procedimientos similares.

El contorno protocolo anterior describe un método manual, enzimática para el aislamiento de un SVF de una gran muestra lipoaspirado volumen. Dentro de este SVF son numerosas poblaciones de células, incluyendo la ASC. Numerosos estudios proponen que el cultivo de esta SVF en condiciones de cultivo de tejidos estándar se seleccione para una población de fibroblastos adherente probable que se compone principalmente del tipo ASC. Consistente con esto, hemos demostrado, usando citometría de flujo e inmunofluorescencia, que p...

En 2001, investigadores de la UCLA describen el aislamiento de una población de células madre adultas, denominada células madre o las ASC derivadas de tejido adiposo, a partir de tejido adiposo. En este artículo se describe el aislamiento de las ASC de lipoaspirates utilizando un protocolo de digestión manual, enzimática utilizando colagenasa.

Aislamiento Manual de células madre derivadas de tejido adiposo de Lipoaspirates Humanos

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

El objetivo general de este procedimiento es aislar células madre derivadas del tejido adiposo a partir de la grasa obtenida en forma de liposucción. Esto se logra primero eliminando la solución quirúrgica y lavando la liposucción para separar los glóbulos rojos contaminantes. El segundo paso consiste en liberar las células madre mediante digestión enzimática de la liposucción lavada con colagenasa.A continuación, las células liberadas en forma de fracción vascular estromal o SVF se recolectan mediante centrifugación. El paso final consiste en eliminar el sobrenadante y sembrar las células SVF para la selección y cultivo de las ASC adherentes. Finalmente, la inducción in vitro de estas ASC cultivadas hacia el hueso, la grasa y el cartílago.Las linajes pueden utilizarse para confirmar la presencia de estas células dentro del cultivo, además de confirmar su multipotencialidad. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la logística de trabajar con grandes volúmenes de liposucción antes de la recolección celular. Prepare una solución estéril de colagenasa tipo I y un medio de control estéril.Recolecte el aspirado de lippo en un recipiente de aspir

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este protocolo describe el aislamiento de tejido adiposo derivado de células estromales de lipoaspirado y la creación de un 4 mm de tamaño crítico defecto craneal para evaluar la regeneración esquelética.

La reparación de un modelo de defecto crítico del tamaño de calota Uso adiposo derivados de las células del estroma cosechadas desde lipoaspirado

Este video demuestra una técnica para aislar y cultivar células madre adiposas (ADSC) derivadas de la cresta neural marcadas con fluorescencia a partir de tejido adiposo del arco periaórtico murino. Tras el aislamiento, las NCADSC se detectan, se clasifican mediante la clasificación celular activada por fluorescencia y, posteriormente, se cultivan en una placa, lo que promueve la proliferación celular.

Aislamiento de células madre derivadas del tejido adiposo periaórtico murino

Aquí, presentamos un protocolo para obtener la fracción vascular estromal de tejido adiposo a través de una serie de procesos mecánicos, que incluyen múltiples centrifugados y emulsificación.

Micronización mecánica de Lipoaspirates para la terapia regenerativa

Este protocolo proporciona un método libre de enzimas para aislar las células madre mesenquimales de muestras de abdominoplastia y lipoaspiración utilizando un método explantado. La ausencia de enzimas duras o pasos de centrifugación proporciona células madre clínicamente relevantes que pueden utilizarse para estudios in vitro o transferirse de vuelta a la clínica.

Un método libre de enzimas para el aislamiento y la expansión de las células madre mesenquimales derivadas de adiposo humano

Aquí, presentamos microfragmentación libre de enzimas del tejido adiposo humano utilizando un dispositivo de sistema cerrado. Este nuevo método permite la obtención de racimos submilimétricos de tejido adiposo adecuado para el trasplante in vivo, el cultivo in vitro y el aislamiento y caracterización celular adicional.

Microfragmentación de tejido adiposo humano para fenotipado celular y caracterización de secretos

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

El presente protocolo describe una metodología mejorada para el aislamiento de ADSC que resulta en un tremendo rendimiento celular con ganancia de tiempo en comparación con la literatura. Este estudio también proporciona un método sencillo para obtener un número relativamente grande de células viables después de la criopreservación a largo plazo.

Técnica para la obtención de células madre mesenquimales a partir de tejido adiposo y caracterización de fracciones vasculares estromales en criopreservación a largo plazo

Los productos xenogénicos (químicos o derivados de animales) introducidos en los pasos de preparación/manipulación de la terapia celular se asocian con un mayor riesgo de reactividad inmune y transmisión patogénica en pacientes huéspedes. Aquí, se describe un método completo libre de xenogénicos para el aislamiento y la expansión in vitro de células madre derivadas de tejido adiposo humano.

Aislamiento y cultivo de células madre derivadas de tejido adiposo humano con un innovador método libre de xenogénicos para terapia humana

Este protocolo describe una metodología para aislar e identificar células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo (MSC) de ratas Sprague Dawley.

Aislamiento e identificación de células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo de ratas Sprague Dawley

Este protocolo describe el aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal (SVF) del tejido adiposo murino para obtener preadipocitos y lograr la diferenciación de los adipocitos in vitro. El uso de un disociador de tejidos para la digestión de la colagenasa reduce la variación experimental y aumenta la reproducibilidad.

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

Aquí presentamos un método estándar para aislar de forma eficiente células madre y adipocitos derivados del adiposo, caracterizado por una reducción del &gt; del 90% en el tiempo de procesamiento, alta viabilidad celular y amplia compatibilidad.

Aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino

Aprende el aislamiento manual de células madre derivadas de tejido adiposo de lipoaspirados humanos mediante digestión enzimática con colagenasa. Este protocolo permite obtener células viables para estudios de diferenciación y aplicaciones en medicina regenerativa.

Aislamiento Manual de células madre derivadas de tejido adiposo de Lipoaspirates Humanos

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