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DOI: 10.3791/50599-v
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This study demonstrates the use of image cytometry for quantifying pathogenic fungi in association with host cells in culture. This method serves as an efficient alternative to traditional colony forming unit (CFU) enumeration.
Aquí, demostramos cómo citometría de imagen se puede utilizar para la cuantificación de hongos patógenos en asociación con células huésped en cultivo. Esta técnica se puede utilizar como una alternativa a la CFU enumeración.
El objetivo general de este procedimiento es cuantificar levaduras patógenas en asociación con células huésped sin placas de unidades formadoras de colonias. En primer lugar, infecte las células de macrófagos con capsulación de H o células de levadura de C albicans, tiña las células de macrófagos infectadas con naranja de aína y yoduro de propidio para resaltar las células de levadura viables. Luego, usando un citómetro de imágenes, capture una serie de imágenes y analice los parámetros de tamaño y forma para enumerar con precisión las células de levadura.
Los resultados de la citometría de imágenes se pueden utilizar eficazmente para cuantificar levaduras patógenas en asociación con células huésped. La idea de este método fue cuando investigaba en el campo de la patogénesis fúngica, en la que tuve que contar repetidamente las unidades formadoras de colonias para la cuantificación de la cápsula de Histoplasma del hongo patógeno. La principal ventaja de la citometría por imagen sobre el método estándar de enumeración de UFC es su mayor velocidad, ya que elimina los pasos laboriosos y lentos de la siembra, la incubación y el recuento de múltiples diluciones en serie de UFC al comparar el crecimiento de cepas de tipo salvaje y mutantes dentro de las células huésped.
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