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Immunology and Infection
El uso de citometría de imagen para la cuantificación de hongos patógenos en asociación con las c...
El uso de citometría de imagen para la cuantificación de hongos patógenos en asociación con las c...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Use of Image Cytometry for Quantification of Pathogenic Fungi in Association with Host Cells

El uso de citometría de imagen para la cuantificación de hongos patógenos en asociación con las células huésped

Full Text
13,450 Views
07:58 min
June 19, 2013

DOI: 10.3791/50599-v

Charlotte Berkes1,2, Leo Li-Ying Chan2,3, Alisha Wilkinson1,2,3, Benjamin Paradis2,3

1Department of Biology,Merrimack College, 2Center for Biotechnology and Biomedical Sciences,Merrimack College, 3Department of Technology R&D,Nexcelom Bioscience LLC

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study demonstrates the use of image cytometry for quantifying pathogenic fungi in association with host cells in culture. This method serves as an efficient alternative to traditional colony forming unit (CFU) enumeration.

Key Study Components

Area of Science

  • Fungal pathogenesis
  • Cellular microbiology
  • Quantitative imaging techniques

Background

  • Pathogenic yeasts can be challenging to quantify using traditional methods.
  • CFU enumeration is labor-intensive and time-consuming.
  • Image cytometry offers a faster alternative for quantification.
  • The study focuses on the interaction between macrophages and pathogenic yeasts.

Purpose of Study

  • To quantify pathogenic yeasts in host cells without using CFU methods.
  • To improve the efficiency of quantifying fungal infections.
  • To provide a reliable method for analyzing yeast-cell interactions.

Methods Used

  • Infection of macrophage cells with H capsulation or C albicans yeast cells.
  • Staining of infected cells with aine orange and propidium iodide.
  • Image capture using an imaging cytometer.
  • Analysis of size and shape parameters to enumerate yeast cells.

Main Results

  • Image cytometry effectively quantifies pathogenic yeasts in host cells.
  • The method reduces the time and labor involved in CFU enumeration.
  • Results can be used to compare growth between wild type and mutant strains.
  • The technique enhances the study of fungal pathogenesis.

Conclusions

  • Image cytometry is a viable alternative to CFU enumeration.
  • This method streamlines the quantification process for researchers.
  • It opens new avenues for studying host-pathogen interactions.

Frequently Asked Questions

What is image cytometry?
Image cytometry is a technique used to analyze the physical and chemical characteristics of cells using imaging technology.
How does this method compare to CFU enumeration?
Image cytometry is faster and eliminates the need for plating and counting colony forming units, making it more efficient.
What types of cells were used in this study?
Macrophage cells were infected with pathogenic yeast cells for the study.
What stains were used in the procedure?
Aine orange and propidium iodide were used to stain the infected macrophage cells.
Can this method be applied to other pathogens?
Yes, the principles of image cytometry can be adapted to study various pathogens in different contexts.
What are the advantages of using image cytometry?
The main advantages include increased speed, reduced labor, and the ability to analyze multiple parameters simultaneously.

Aquí, demostramos cómo citometría de imagen se puede utilizar para la cuantificación de hongos patógenos en asociación con células huésped en cultivo. Esta técnica se puede utilizar como una alternativa a la CFU enumeración.

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar levaduras patógenas en asociación con células huésped sin placas de unidades formadoras de colonias. En primer lugar, infecte las células de macrófagos con capsulación de H o células de levadura de C albicans, tiña las células de macrófagos infectadas con naranja de aína y yoduro de propidio para resaltar las células de levadura viables. Luego, usando un citómetro de imágenes, capture una serie de imágenes y analice los parámetros de tamaño y forma para enumerar con precisión las células de levadura.

Los resultados de la citometría de imágenes se pueden utilizar eficazmente para cuantificar levaduras patógenas en asociación con células huésped. La idea de este método fue cuando investigaba en el campo de la patogénesis fúngica, en la que tuve que contar repetidamente las unidades formadoras de colonias para la cuantificación de la cápsula de Histoplasma del hongo patógeno. La principal ventaja de la citometría por imagen sobre el método estándar de enumeración de UFC es su mayor velocidad, ya que elimina los pasos laboriosos y lentos de la siembra, la incubación y el recuento de múltiples diluciones en serie de UFC al comparar el crecimiento de cepas de tipo salvaje y mutantes dentro de las células huésped.

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