Name: Biopolímeros Nano basados en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada? (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 20 s
Description: Aprenda a sintetizar nanofármacos basados en ácido polimálico para terapia personalizada del cáncer de mama Her2 positivo. Este método biotecnológico permite la producción de plataformas de liberación dirigida con alta pureza óptica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Agradecemos enormemente el apoyo financiero de los NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, las subvenciones del Departamento de Neurocirugía del Centro Médico Cedars-Cedars y Arrogene Technology Inc.

Todos los experimentos se ajustan a las disposiciones oficiales de los animales, incluidos los procedimientos quirúrgicos y no quirúrgicos realizados en vivo y están en plena conformidad con los protocolos del IACUC. 1. Bioproducción de ácido polimálico <ol><li> Haga crecer un cultivo de siembra de esférulas en agar y la transferencia de los plasmodios a 100 ml de medio de cultivo utilizando un 25 ° C Thermo declarado incubadora y medio de cultivo basal 8,9. </li><li> Produce una cantidad de gravedad llena 500 ml plasmodios micro bajo la exclusión de la luz con el fin de evitar la esporulación. </li><li> Preparar 80 g de CaCO 3 en suspensión en 8 L de medio basal en 10 L de recipiente biorreactor. Transferir los 500 ml envasados ​​plasmodios micro en el recipiente de reacción montado y permitir que el bioproceso de 75 horas a 25 ° C, 10 L / min de flujo de aire filtrado y 150 rpm de agitación mediante un agitador segmento. </li><li> Terminar cuando el caldo de cultivo tiene un pH de 4,8 que indica el final de la producción de MPLA y medir el contenido de MPLA por tque hidroxamato / Fe (III) de ensayo. </li><li> Enfriar el caldo a 17 ° C y permiten que las células se asienten por gravedad. </li><li> Se enfría a 4 ° C y ajustar el pH a 7,5, utilice 2 M NaOH. Bombear el sobrenadante a través de una columna llena con 1,5 l de DEAE-celulosa en la parte inferior dirección hacia arriba (DEAE grano grueso, equilibrada con 20 mM de Tris-HCl, pH 7.5 a 5 ° C). </li><li> Lavar con 3 columnas de tampón que contiene NaCl 0,3 M después de cambiar la dirección de arriba a abajo y eluir PMLA en presencia de 0,7 M de NaCl. </li><li> Ajuste a 0,1 M CaCl2 y precipitar PMLA-Calcio con 80% etanol helado. Fraccionar sobre Sephadex G25 en PMLA-calcio de 80 a 300 kDa, 50 - 80 kDa, y 10 - 50 kDa, utilizar agua en ausencia de tampón y sal. </li><li> Pasar cada fracción sobre un 120H + columna de Amberlite IR, y congelar inmediatamente el ácido polimálico de flujo a través en nitrógeno líquido durante la liofilización. </li><li> Disolver en acetona seca. Después de la filtración, el disolvente se retiraen la corriente de aire seco, se liofiliza y se almacena a -20 ° C. </li></ol> 2. Síntesis de a base de ácido polimálico Nano Drogas <ol><li> Activar grupos carboxilo de MPLA (P) mediante la mezcla de 116 mg (1 mmol unidades malyl) de PMLA-H en 1 ml de acetona anhidra y 1 mmol de N-hidroxisuccinimida y 1 mmol diciclohexil carbodiimida en 2 ml de dimetil formamida (DMF). Se agita a 20 ° C durante 3 h. Añadir 0,05 mmol de mPEG 5000-NH 2 (0,05% en moles de unidades malyl) en 1 ml de DMF seguido de 0,05 mmol de trietilamina (TEA). </li><li> Añadir gota a gota disuelto en DMF 0,4 mmol de éster etílico de leucina (Loet) (40% en moles de unidades malyl), 0,1 mmol de ácido 2-tiol-1-etilamina (2-MEA) (10% en moles de unidades malyl) y 0,5 mmoles de TEA, todos disueltos en DMF. Después de cada adición, deje 1 hora y compruebe que no se completó la reacción de ninhidrina negativo de respuesta (capa-cromatografía fina, TLC). </li><li> No retire los restos de éster NHS por hidrólisis espontánea con solución salina tamponada con fosfato (30 min, pH 6,8). Desalar más de PD-10 Columna, obtener &quot;preconjugate&quot; como un polvo blanco por liofilización. Seco tienda a menos 20 ° C. </li><li> Disolver 30 mg de anticuerpo (mAb, IgG2a-κ) en 4,5 ml de fosfato de sodio 100 mM, NaCl 150 mM, pH 5,5. </li><li> Reducir los enlaces disulfuro con Tris 5 mM (acetato de 2-carboxi) de clorhidrato de fosfina durante 30 min a 20 ° C y purificar sobre columna PD-10. </li><li> Disolver Mal-PEG 3400-MAL en 2 ml del mismo tampón y añadir el mAb reducido a un volumen final de 10 ml y se agita durante la noche a 4 ° C. Se concentra hasta 2,5 ml durante Vivaspin 20, la exclusión de 30 kDa, y purificar a través de Sephadex G75. Verifique producto sobre sec-HPLC y medir la cantidad fotométrica a 280 nm de longitud de onda. </li><li> Adjuntar Mal-PEG-MAL-mAb a &quot;preconjugate&quot; tioles obtención de P / PEG 5000 (5%) / Loet (40%) / mAb (0,2%) / 2-MEA (10%). Para ello, mezclar 5 ml de 200 nmol mAb-PEG 3400-Mal a 50 mg (p / mPEG 5000 / LOEt/2-MEA) en el pH por encima de 5,5, ajustar la concentración de sulfhyDryl a 2 mM y se incuba a 20 ° C durante 3 horas (rendimiento 98%). </li><li> Solubilizar 3&#39;-H 2 N-AON en DMF / PBS (pH 7,2) y reaccionar con N-succinimidil-3-(2-piridilditio) propionato (SPDP) en (01:01 v / v) de DMF / metanol (prueba de ninhidrina ) y purificar AON-PDP sobre Sephadex LH20-en metanol, y luego en agua y se liofiliza. </li><li> Incubar 800 nmol AONs activados en el buffer de pH 5,5 con el Mal-PEG 3400-Mal-MAB-preconjugate anteriormente preparado durante toda la noche hasta que se termina la reacción de intercambio de disulfuro. </li><li> Incorporar fluorescente Alexa Fluor 680-maleimida formando tioéter con polímero-2-MEA-SH. Bloquear el exceso de sulfhidrilos con 3-piridilditio-propionato (PDP) y purificar sobre Sephadex G75. Almacenar a 4 ° C o se congeló a -80 ° C hasta su uso posterior. </li></ol> 3. Ensayos y Propiedades <ol><li> Realizar pruebas para la pureza y la estabilidad en PBS y suero a 4 ° C y 37 ° C por análisis SEC-HPLC. Utilice sulfonato poliestireno como molecLos estándares de peso Ular. Mida distribución de tamaño nano y zeta potenciales. Utilice los sistemas comerciales. </li><li> Añadir a 320 l muestra de 160 l de 10% (w / v) de cloruro de hidroxilamonio y 160 l de 10% (w / v) de NaOH. Después de 10-15 minutos, mezclar con 160 l de 5% (w / v) de Fe (III) Cl 3 en el 12% (v / v) de HCl y leer A 540 de hidroxamato / Fe (III). Calcular PMLA asumiendo 1 mg / ml PMLA corresponde a 2,5 A 540. </li><li> Hidrolizar el fármaco de nano durante la noche en HCl 2 M a 110 ° C y ensayo de ácido málico en la cromatografía de fase inversa con referencia a las muestras cargadas con las normas de ácido málico. Cleave la droga nano con ditiotreitol 100 mM y medir Morpholino-AON por HPLC en fase reversa cuantitativa frente a estándares Morpholino AON. </li><li> Tomar drogas nano sin escote y medir anticuerpos usando un kit de ensayo de proteínas. Cuantificar mPEG al permitir que su reacción con ferrothiocyanate amonio, a continuación, se extrae con cloroformo y leer la absorbencia a 510 nm de longitud de onda 10 </sup&gt;. </li><li> Realice ELISA con 5 l de drogas nano (1-10 mg MAB) por pocillo ensayar la actividad de anticuerpos y coligación. Utilice 0,5 mg / pocillo receptor de transferrina y HER2, respectivamente, como antígenos de placa recubierta y anticuerpos secundarios acoplados a peroxidasa. </li><li> Calcular logrado% para AON, MPEG y mAb con respecto a ácido málico (100%) y comparar con el% previsto por diseño (ver ejemplos Tabla 1 y Tabla 2). </li></ol> 4. Pruebas in vitro <ol><li> Incubar el fármaco nano con células cancerosas cultivadas y medida de células supervivientes con el tiempo por su actividad para reducir reactivo amarillo [3 - (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5 - (3-carboximetoxifenil) -2 - (4-sulfofenil )-2H-tetrazolio, sal interna] (MTS) a un colorante azul y leer la absorbancia relativa con un fotómetro. Siga las instrucciones del proveedor kit. </li><li> Preparar extractos de células in vitro o ex vivo para la transferencia Western. Utilice helada extracción buffer que contiene SDS y cóctel inhibidor de la proteasa. Proteínas separadas por electroforesis en gel de reducción de SDS-poliacrilamida. </li><li> Realice el Western Blot para las proteínas de interés en los extractos de la muestra. Utilice anticuerpos secundarios conjugados con fosfatasa alcalina. </li><li> Uso de la microscopia confocal para demostrar la captación celular y co-localización de nano plataforma de polímero de drogas, AON y endosomas usando etiquetado de fluorescencia. Adjunte Alexa Fluor 680 a la plataforma conjugado nano y Lissamina a AONs como etiquetas fluorescentes. Utilice un microscopio 5X escáner espectral y células cancerosas vivas para visualizar la distribución de las moléculas marcadas </li><li> Membranas endosoma mancha con tinte fluorescente Estiril Red y demuestran colocalización endosoma o liberación. </li></ol> 5. Ensayo in vivo <ol><li> Preparar el modelo de ratón de cáncer de mama positivo para HER2 humana (Tac de ratón desnudo: Cr: (MCR)-Foxnnm). Inserte un 0,72 mg liberando pellet 17β-estradiol (versión 90-días) subcutaneously en el cuello de cada ratón. </li><li> Luego inyecte 1 x 10 7 células tumorales BT-474 por vía subcutánea en el flanco derecho y se dejó crecer el tumor. </li><li> Iniciar el tratamiento cuando los tumores son 120 mm 3 en tamaño mediante la inyección en la vena de la cola 150 conjugado nano l que contiene 2,5 mg / kg de AON y / o 4,5 mg / kg de cada anticuerpo. Para el tratamiento inyectar dos veces por semana, total de seis veces. </li><li> Mida el tamaño del tumor con calibres dos veces el débil y el cálculo de volúmenes utilizando la fórmula (longitud x profundidad x anchura) x (π / 6). La eutanasia a los animales 2 semanas después de la inyección final y después de la sedación con una solución de ketamina y dexmedetomidina seguido por dislocación cervical. </li><li> Aislar los tumores y las secciones de tinción con H &amp; E para la evaluación morfológica. </li><li> Para la evaluación de la distribución de drogas a escala animal, utilizar un sistema de imágenes de fluorescencia. Inyectar la Alexa Fluor 680 drogas nano etiqueta e imagen a las 24 y 48 h. </li><li> La eutanasia a los animales y detectar el fluorEscence en tumores y órganos aislados y perfundidos. </li></ol>

<ol><li>Koboldt, D. C., Fulton, R. S., McLellan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumors.+Cancer+Genome+Atlas+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Comprehensive molecular portraits of human breast tumors. Cancer Genome Atlas Network.</a> Nature. 490, 61-70 (2012).</li>
<li>Kwong, L. N., Costello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+NRAS+signaling+differentially+regulates+survival+and+proliferation+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Oncogenic NRAS signaling differentially regulates survival and proliferation in melanoma.</a> Nat. Med. 18, 1503-1510 (2012).</li>
<li>Gerlinger, M., Rowan, A. J., et al. Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGerlinger%2C+M+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. Gerlinger, M., Rowan, A. J. 366, 883-892 (2012).</li>
<li>Yap, T. A., Workman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+cancer+genome%3A+strategies+for+the+discovery+and+clinical+development+of+targeted+molecular+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Pharmacol.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Exploiting the cancer genome: strategies for the discovery and clinical development of targeted molecular therapies.</a> Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 52, 549-573 (2012).</li>
<li>Chatterjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Biomarkers%3A+Knowing+the+Present+and+Predicting+the+Future%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncol%22%5BJournal%5D)">Cancer Biomarkers: Knowing the Present and Predicting the Future.</a> Future Oncol. 1, 37-50 (2005).</li>
<li>Suh, K. S., Sarojini, S., Youssif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Banking%2C+Bioinformatics%2C+and+Electronic+Medical+Records%3A+The+Front-End+Requirements+for+Personalized+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tissue Banking, Bioinformatics, and Electronic Medical Records: The Front-End Requirements for Personalized Medicine.</a> J. Oncology. , (2013).</li>
<li>Ljubimova, J. Y., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatible+nanopolymers%3A+the+next+generation+of+breast+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Medicine%2C+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Biocompatible nanopolymers: the next generation of breast cancer treatment.</a> Future Medicine, Nanomedicine. 7, 1-4 (2012).</li>
<li>Lee, B. -S., Vert, M., Holler, E. Water-soluble aiphatic polyesters: poly(malic acid)s. Biopolymers 3a. Steinbüchel, A. , Wiley VCH. Weinheim (Bergstrasse). 75-103 (2002).</li>
<li>Lee, B. -S., Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycefin%2C+a+new+prototype+of+multifunctional+nanoconjugate+based+on+poly%28beta-L-malic+acid%29+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Polycefin, a new prototype of multifunctional nanoconjugate based on poly(beta-L-malic acid) for drug delivery.</a> Bioconjugate Chem. 17, 317-326 (2006).</li>
<li>Nag, A., Mitra, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+colorimetric+assay+for+estimation+of+polyethylene+glycol+and+polyethylene+glycolated+protein+using+ammonium+ferrothiocyanate%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochem%22%5BJournal%5D)">A colorimetric assay for estimation of polyethylene glycol and polyethylene glycolated protein using ammonium ferrothiocyanate.</a> Analytical Biochem. 237, 224-231 (1996).</li>
<li>Ding, H., Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+brain+tumor+growth+by+intravenous+poly%28beta-L-malic%29+acid+nanobioconjugate+with+pH-dependent+drug+release%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Inhibition of brain tumor growth by intravenous poly(beta-L-malic) acid nanobioconjugate with pH-dependent drug release.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107, 18143-18148 (2010).</li>
<li>Inoue, S., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanobioconjugate+inhibition+of+HER2%2Fneu+signaling+and+synthesis+provides+efficient+mouse+breast+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Nanobioconjugate inhibition of HER2/neu signaling and synthesis provides efficient mouse breast cancer treatment.</a> Cancer Research. 71, 1454-1464 (2011).</li>
<li>Maeda, H., Sawa, T., Konno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+tumor-targeted+delivery+of+macromolecular+drugs%2C+including+the+EPR+effect+in+solid+tumor+and+clinical+overview+of+the+prototype+polymeric+drug+SMANS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Mechanism of tumor-targeted delivery of macromolecular drugs, including the EPR effect in solid tumor and clinical overview of the prototype polymeric drug SMANS.</a> J. Control. Release. 74, 47-61 (2001).</li>
<li>Ljubimova, J. Y., Fujita, M., Ljubimov, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28malic+acid%29+nanoconjugates+containing+various+antibodies+and+oligonucleotides+for+multitargeting+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomed%22%5BJournal%5D)">Poly(malic acid) nanoconjugates containing various antibodies and oligonucleotides for multitargeting drug delivery.</a> Nanomed. 3, 247-265 (2008).</li>
<li>Inoue, S., Patil, R., Portilla-Arias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+nanobioconjugate+inhibiting+EGFR+expression+in+triple+negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Novel nanobioconjugate inhibiting EGFR expression in triple negative breast cancer.</a> PLoS One. 7, 1-9 (2012).</li>
<li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Delivery+of+Doxorubicin+via+pH-Controlled+Hydrazone+Linkage+Using+Multifunctional+Nano+Vehicle+Based+on+Poly%28%CE%B2-L-malic+Acid%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Mol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(β-L-malic Acid).</a> Int. J. Mol. Sci. 13, 11681-11693 (2012).</li>
<li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temozolomide+delivery+to+tumor+cells+by+a+multifunctional+nano+vehicle+based+on+poly%28%CE%B2-L-malic+acid%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Temozolomide delivery to tumor cells by a multifunctional nano vehicle based on poly(β-L-malic acid).</a> Pharm. Res. 27, 2317-2329 (2010).</li>
<li>Ljubimova, J. Y., Portilla-Arias, J., Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+and+efficacy+evaluation+of+multiple+targeted+polymalic+acid+conjugates+for+triple-negative+breast+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Drug+Target%22%5BJournal%5D)">Toxicity and efficacy evaluation of multiple targeted polymalic acid conjugates for triple-negative breast cancer treatment.</a> J. Drug Target. 21, 956-967 (2013).</li>
</ol>

Los autores Julia Y. Ljubimova, Keith L. Black, y Eggehard Holler son accionistas de Arrogene Technology Inc.

La ruta experimental para la preparación de medicamentos nano de un polímero natural biodegradable se presentó que se puede utilizar en la síntesis de la medicina personalizada. La descripción comienza con la producción controlada y la purificación de ácido polimálico, que es una plataforma versátil para la síntesis de drogas nano. Utilizando técnicas reproducibles, el polímero se obtiene con alto peso molecular y en la pureza extrema adecuado para síntesis farmacéuticas. La síntesis se describe por un medicamento nano que se muestra para el tratamiento eficaz del cáncer de mama HER2-positivo. La descripción se puede traducir en la síntesis de la mayoría de otros fármacos nano para el tratamiento del cáncer. Orientación implica anticuerpos tales como Herceptin que se unen a un antígeno específico de tumor, tales como proteína HER2 o cualquier otro marcador tumoral que se internaliza de manera eficiente. El fármaco de nano ofrece una selección de oligonucleótidos antisentido y quimioterápicos que inhibe eficazmente el crecimiento del cáncer bajo Tretamiento. En el ejemplo, Herceptin vinculante para HER2 y la hibridación específica de oligonucleótidos antisentido con HER2-mRNA de codificación resultó en el bloqueo sostenido de HER2-señalización y reducción grave de cáncer de mama HER2-positivo. Basado en el principio subyacente de la focalización del tumor y la inhibición de la expresión génica mediante oligonucleótidos antisentido hemos actualizado sintetizado varias otras drogas nano y éxito inhibido glioblastoma humano preclínica y el cáncer de mama triple negativo 11,14-18. El trabajo de síntesis comienza con la preparación de la plataforma de drogas nano altamente purificada, que es el ácido polimálico del sobrenadante del cultivo de Physarum polycephalum (una especie de la familia &quot;moho de fango&quot;). La preparación enfatiza altos pesos moleculares del polímero, en principio, lo que permite la unión de numerosos anticuerpos, péptidos, oligonucleótidos y otras moléculas que funcionan en la entrega de fármaco activo y la inhibición del crecimiento del tumor. Following el cultivo y la purificación controlada, calidad reproducible de polímero en rendimientos predecibles se ha producido. El polímero se almacena bajo condiciones convenientes para cualquier momento. La síntesis de conjugados de nanopartículas PMLA que comienzan con la activación química de los carboxilatos polímero colgante se lleva a cabo en unos pocos pasos sintéticos. En entre los pasos, la síntesis se puede colocar opcionalmente en espera que permite la preparación de cantidades arbitrarias de intermedios y por lo tanto se puede utilizar en un escalado. El progreso de la síntesis se sigue por TLC y SEC-HPLC, y tanto la composición y la actividad del fármaco de nano se controla mediante ensayos específicos para el grupo químico cuantitativo, ELISA, y una variedad de mediciones físicas. Nuestra experiencia es que estas síntesis se han desarrollado sin contratiempos y de manera reproducible con excelentes rendimientos y pureza. Al optar por la especificidad de anticuerpos y oligonucleótidos antisentido cualquier variante de drogas nano se sintetiza favorablemente, según sea necesario en personalized medicamento. Las modalidades del tratamiento exitoso del cáncer de mama HER2-positivo humano son interlocutores válidos para la preparación de modelos de cáncer de ratón, la aplicación de drogas nano, imágenes, y el análisis del crecimiento del tumor. Los resultados de las pruebas de viabilidad in vitro en son útiles en la selección de la línea celular y el fármaco que conduce a ser utilizada en el experimento con animales. En vivo de imágenes de Xenogen valida que el fármaco nano está entregado de hecho en el tumor. Resultados de Western Blot revela si el nivel de ciertas proteínas respondió de la manera prevista durante el tratamiento del cáncer. Medición del tamaño del tumor informa sobre el éxito del tratamiento, es decir, sobre la inhibición, la recesión o la regresión. El ejemplo descrito refleja nuestra experiencia con otros fármacos nano a base de ácido polimálico que indican un alto grado de previsibilidad, la reproducibilidad y la ausencia de toxicidad notables. Resultados recientes sobre la toxicidad y la eficacia de múltiples tconjugados de ácido polimálico argeted para el tratamiento triple negativo cáncer de mama se encuentran en un fuerte apoyo de esta noción 18. Una característica clave es que nuestro fármaco nano es capaz de penetrar barreras biológicas: la barrera endotelial por la extravasación en el intersticial del tumor, la membrana de las células tumorales por absorción endosoma, y ​​la membrana del endosoma interrupción por la acción de los grupos de éster etílico de leucina o trileucina. La extravasación y la captación endosoma se llevan a cabo de forma fiable por los anticuerpos específicos vinculados a la droga nano. Anticuerpo receptor de transferrina anti-ratón de media afluencia eficiente en el tumor por transcitosis, probablemente debido a que el receptor se sobreexpresa en la mayoría de la vasculatura del tumor. Un anticuerpo diferente unido en las mismas funciones nano molécula conjugada en dirigir específicamente el fármaco nano en la célula tumoral receptor. La presencia de ambos anticuerpos, el uno para transcitosis y la otra para la absorción endosoma, es esencial para el funcionamiento óptimo. El análisis cuantitativo de mácido Alic y el anticuerpo es altamente recomendado para el control de la composición óptima del fármaco nano. Por último hay que señalar que el fármaco de nano covalente todo-en-uno administra el fármaco en forma unida químicamente en ruta a través de la vasculatura huésped en la célula tumoral receptor. La unión química hace que la mayoría de los fármacos inactivos (profármacos) hasta que se reconstituyen como medicamentos gratuitos por la escisión de la plataforma conjugado nano en el lugar de destino. Esto es importante porque la modalidad de reactivación proporciona un alto grado de seguridad durante el parto y una mínima posibilidad de evocar efectos secundarios dañinos. La versatilidad, eficacia y seguridad son atributos indispensables de una buena medicina personalizada.

En la era post-genómica en genomas de cáncer se han desentrañado (Centro Nacional de Biotecnología y el Atlas del Genoma del Cáncer), el tratamiento futuro del cáncer representará la diversidad genética de los tumores a menudo dentro del mismo tumor 1-4. Bioinformática y rápido, no es caro secuenciación de ADN permite la adquisición de genes / mutaciones malignas a nivel personal 2,4,5. Una vez que los genes han sido identificados, los pacientes serán tratados con la medicina personalizada para modificar o silenciar la expresión de genes malignos 6. La necesidad de dirigirse a las células cancerosas y liberar fármacos en estas células requiere de sistemas de entrega polifuncionales. Obviamente, las drogas nano pueden cumplir con este requisito 7. En una ola creciente de descubrimientos nanopartículas han demostrado ser adecuado para llevar las cargas útiles de los fármacos quimioterapéuticos, proteínas y / o material genéticamente activa a las células cancerosas. Sin embargo, los efectos adversos siguen siendo advestida. Uno de ellos relacionado con la falta de biodegradabilidad puede causar la deposición de material en el tejido y órganos sanos con la probabilidad de provocar enfermedades. Para minimizar la deposición, se introdujo ácido polimálico no tóxico y no inmunogénico, que es de origen microbiano y biodegradable a H 2 O y CO 2 8. Utilizamos el polímero para sintetizar un tipo covalente todo-en-uno de la droga nano. Contiene agentes quimioterapéuticos unidos químicamente tales como temozolomida, doxorrubicina, o los oligonucleótidos antisentido y los grupos funcionales que sirven extravasación, la orientación del tejido, la entrega endosomolítico. Las drogas están intrínsecamente escinden de la plataforma nano cuando llegaron a la célula tumoral específica, regenerando así su actividad farmacéutica completa. Se describe el método de producción microbiana de la plataforma nano polímero, su purificación, y la síntesis química de un fármaco que contiene nano Trastuzumab (Herceptin) para el cáncerfocalización y un oligonucleótido antisentido para la inhibición de HER2 sobreproducción. En la aplicación de la droga nano a xenogeneico cáncer de mama HER2-positivo humano en ratones desnudos, se demuestra una alta eficacia del tratamiento contra el cáncer. Los principios de la orientación del tumor y el silenciamiento de gen introducido aquí para medicamentos nano ácido polimálico se pueden aplicar en el tratamiento de otros casos de cáncer.

<table><tbody><tr><td>2-Mercapto-1-etilamina (Cisteamina; 2MEA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30078-25G</td><td></td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Vector Laboratories, Burlingame, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lanzamiento de 90 días 17&beta;-pellet de estradiol&nbsp;</td><td>Investigación innovadora de América</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 680 C2 maleimida</td><td>Invitrogen</td><td>A20344</td><td></td></tr><tr><td>Amberlite IR 120H</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6428</td><td></td></tr><tr><td>Emulsión antiespumante Y-30</td><td>Sigam-Aldrich</td><td>A5758</td><td></td></tr><tr><td>Cadena anti-laminina-411 mAbs</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-59980</td><td></td></tr><tr><td>Anti-pAkt</td><td>mAb Señalización celular</td><td>9271S</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PARB mAb</td><td>BD Biosciences</td><td>556494</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-von Willebrand Factor&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>AB6994</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de levadura Bacto</td><td>Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td><td>212720</td><td></td></tr><tr><td>Señalización celular</td><td>de beta-actina</td><td>3700</td><td></td></tr><tr><td>BT-474&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>HTB-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato de calcio</td><td>Alfa Aesar</td><td>36337</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensayo de proliferación celular</td><td>Promega, Madison, WI, EE. UU</td>. <td>PR-G3580</td><td></td></tr><tr><td>Centriplus 100&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>4414</td><td></td></tr><tr><td>Diciclohexilbodimida</td><td>Fluka</td><td>36650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Eosina</td><td>Cardinal Health</td><td>S7439-4</td><td></td></tr><tr><td>Galardin (inhibidores de MMP)&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-994</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH</td><td>Señalización de Células&nbsp;</td><td>2118</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Cardinal Health</td><td>S7439-3</td><td></td></tr><tr><td>Hemin de cerdo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>51280</td><td></td></tr><tr><td>Herceptin</td><td>Genentech</td><td>15534</td><td></td></tr><tr><td>Herceptin (Western blot)</td><td>Señalización celular</td><td>2165S</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a-kappa malignoma murino</td><td>Sigma</td><td>M77695X5m</td><td></td></tr><tr><td>Immun-Star AP Paquete de sustrato</td><td>Biorad</td><td>170-5012</td><td></td></tr><tr><td>Immun-StarTM AP Paquete de sustrato&nbsp;</td><td>Biorad</td><td>170-5012</td><td></td></tr><tr><td>LAL Reactivo agua&nbsp;</td><td>Lonza, MD</td><td>W50-1000</td><td></td></tr><tr><td>Laminina-411 mAbs</td><td>Abcam</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Éster etílico de leucina (LOEt)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>61850-10G-F</td><td></td></tr><tr><td>Limulus Lisado de amebocitos (LAL) Pruebas PYROGENT-5000</td><td>Cambrex BioScience</td><td>N384</td><td></td></tr><tr><td>Lissamin-Morpholino AON</td><td>Gene Tools</td> Ácido L-málico <td>hecho a</td><td></td>medida</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6413</td><td></td></tr><tr><td>Malato deshidrogenasa&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2634</td><td></td></tr><tr><td>Mal-PEG-Mal</td><td>Laysan</td><td>mal-PEG-mal-3400</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>Leche, descremada en polvo&nbsp;</td><td>Proteómica</td><td>M203-10G</td><td></td></tr><tr><td>Oligonucleótidos morfolinos&nbsp;</td><td>GeneTools</td><td>hecho</td><td></td>a medida</tr><tr><td>mPEG5000</td><td>Lysan</td><td>mPEG-NH2-5000</td><td></td></tr><tr><td>N-hidroxisuccinima (NHS)&nbsp;</td><td>ACROS Organics</td><td>15727100</td><td></td></tr><tr><td>Ninhidrina</td><td>Merck</td><td>1.06762.0100</td><td></td></tr><tr><td>Sándwich de papel de filtro de membrana de nitrocelulosa</td><td>Invitrogen</td><td>LC2001</td><td></td></tr><tr><td>Sándwich de papel de filtro de membrana de nitrocelulosa, 0.45 y micro; m&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>LC2001</td><td></td></tr><tr><td>Novex &reg; Tampón de transferencia de tris-glicina (25x)</td><td>Invitrogen</td><td>LC3675</td><td></td></tr><tr><td>Ratones desnudos [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&nbsp;</td><td>Taconic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 10x</td><td>Gibco</td><td>10010-49</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 1x</td><td>Gibco</td><td>70013</td><td></td></tr><tr><td>PD-10 columnas de desalinización</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851</td><td></td></tr><tr><td>Physarum polycephalum M3CVII</td><td>ATCC 204388</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA ensayo de proteínas&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Cóctel de inhibidores de proteasa</td><td>Roche</td><td>1.18362E+11</td><td></td></tr><tr><td>Detector de proteínas ELISA Kit</td><td>KPL</td><td>54-62-18</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G-25 superfino</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0031</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G-75&nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0050</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex-LH20&nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0090</td><td></td></tr><tr><td>SKBR-3&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td></td></tr><tr><td>SPDP</td><td>Proteochem&nbsp;</td><td>C1116</td><td></td></tr><tr><td>Streamline-DEAE</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0994</td><td></td></tr><tr><td>Styryl Red FM 1-43&nbsp;</td><td>Tecnologías de la Vida&nbsp;</td><td>T-3163</td><td></td></tr><tr><td>TBS 10x</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6435</td><td></td></tr><tr><td>TCEP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4706-2G</td><td></td></tr><tr><td>TLC, láminas de alúminia recubiertas de sílice</td><td>Merck, Darmstadt, DE</td><td>60F254</td><td></td></tr><tr><td>Trileucina (LLL)</td><td>Bachem</td><td>H-3915</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-114&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X114</td><td></td></tr><tr><td>Tween&reg; 20&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20&nbsp;</td><td>VWR</td><td>14005-302</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vector Laboratories, Burlingame, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dexmedetomidina</td>, <td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>Atipamezol</td>, <td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>Carprofeno</td>, <td>Pfizer</td><td></td><td></td>,</tr><tr><td>Betadine</td><td>, Foster and Smith, Wisconsin</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

biopolímeros nano basados ​​en ácido polimálico de focalización de múltiples marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?

Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Los tumores con grado y morfología similares a menudo responden de manera diferente al mismo tratamiento debido a las variaciones en el perfil molecular. Para dar cuenta de esta diversidad, se desarrolla la medicina personalizada para silenciar los genes asociados a las neoplasias malignas. Los nanofármacos satisfacen estas necesidades dirigiéndose al tumor y administrando oligonucleótidos antisentido para el silenciamiento de genes. Dado que los fármacos para el tratamiento se administran a menudo de forma repetida, es deseable la ausencia de toxicidad y una respuesta inmunitaria insignificante. En el ejemplo que se presenta aquí, se sintetiza un nanomedicamento a partir de la plataforma biodegradable, no tóxica y no inmunogénica ácido polimálico mediante ligadura química controlada de oligonucleótidos antisentido y moléculas dirigidas a tumores. La síntesis y el tratamiento se ejemplifican para el cáncer de mama humano Her2 positivo utilizando un modelo experimental de ratón. El caso se puede trasladar hacia la síntesis y el tratamiento de otros tumores.

Un ejemplo de un fármaco de nano a base de ácido polimálico se presenta hacia el diseño racional de la medicina personalizada que es aplicable al cáncer. En él se describe la síntesis de un fármaco nano para tratar el cáncer de mama HER2-positivo humano en un ratón desnudo.

Biopolímeros Nano basados ​​en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

El objetivo general es establecer una plataforma a escala nanométrica abierta para un protocolo universal de síntesis de medicina personalizada basada en el perfil genético de la enfermedad de una persona, especialmente en el caso del cáncer. Primero, produzca y purifique el ácido polimalico a partir del microorganismo frum polycephalum; active químicamente el PMLA purificado en sus grupos carboxílicos laterales. Una los grupos funcionales pequeños y el enlazador MEA mediante la sustitución de los grupos activados y convierta los grupos activados no utilizados nuevamente en grupos carboxílicos mediante hidrólisis.A continuación, agregue los anticuerpos y las moléculas antisentido mediante los grupos sulfhidrilo del espaciador, MEA y tapa. El espaciador no utilizado mediante reacción con PDP al finalizar la prueba evalúa la composición y la función del compuesto principal. El fármaco nano surge a partir de un modelo animal como ratones que portan humanos agresivos.El cáncer de mama positivo para HER2 puede determinar la eficacia del tratamiento y también si este se lleva a cabo sin efectos secundarios no deseados. La principal ventaja de la bioproducción frente a los métodos sintéticos existentes, como la polimerización por apertura de anillo, es que el biopolímero conserva la pureza óptica completa y no está contaminado con subproductos. Esta familia de nanofármacos PolyPhen puede dirigirse a cualquier tipo celular basándose en un direccionamiento específico y regular la expresión de proteínas.Generalmente, el tratamiento del cáncer mediante nanofármacos PHE es muy eficaz en varios modelos animales, especialmente en cánceres cerebrales y de mama primarios. Inicialmente tuvimos la idea de este método para bloquear la síntesis de la laminina específica de glioblastoma en sus isoformas, y posteriormente demostramos el direccionamiento y la inhibición de las proteínas HER2 y del cáncer de mama triple negativo para prevenir el crecimiento tumoral. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el diagnóstico del cáncer mediante imágenes ópticas y resonancia magnética.Los medicamentos poli-nano pueden proporcionar información sobre la administración de fármacos para el tratamiento del cáncer. También pueden aplicarse a otras condiciones patológicas, como enfermedades infecciosas, alivio del dolor y trastornos neurológicos. Después de cultivar una cepa de plasmodio a partir de spial, inocule 100 mililitros de medio de cultivo basal y cultive la muestra a 25 grados Celsius.El incubador termorregulado produce una cantidad de microplasma modia compactada por gravedad, excluyendo la luz. Para evitar la esporulación en un biorreactor de 10 litros, disuelva 80 gramos de carbonato de calcio en ocho litros de medio basal, luego transfiera el microplasma modia compactado al recipiente de reacción montado y configure el bioproceso durante 75 horas. A 25 grados Celsius, con un flujo de aire filtrado de 10 litros por minuto y agitación de 150 RPM mediante una barra agitadora segmentada.Cuando el caldo de cultivo tenga un pH de 4,8, detenga el cultivo para medir la producción de ácido polimaléico. Enfriar ahora el caldo a 17 grados Celsius y permitir que las células sedimenten por gravedad, y eliminar el sobrenadante del cultivo del reactor. Ajustar el pH a 7,5.Ahora, aspire el sobrenadante desde la parte inferior a través de una columna de celulosa DEAE de 1,5 litros equilibrada con clorhidrato de tris 20 milimolar pH 7,5 a cinco grados Celsius. Luego, pase tres volúmenes de columna de tampón de lavado que contenga cloruro de sodio 0,3 molar desde la parte inferior hasta la superior de la columna y eluya el PMLA en presencia de cloruro de sodio 0,7 molar. Ajuste la fracción eluida de PMLA a cloruro de calcio 0,1 molar y agregue etanol al 80% frío con hielo para precipitar el PMLA de calcio. A continuación, fraccione por tamaño el PMLA de calcio utilizando Cidex G-25 y agua.Finalmente, pase cada fracción a través de una columna de luz ámbar e inmediatamente congele el flujo de ácido polimalico en nitrógeno líquido y liofilice antes de almacenar a menos 20 grados Celsius. Para activar los grupos carboxilo del PMLA, mezcle un milimol de unidades de ácido málico de P-M-L-A-H en un mililitro de acetona anhidra y un milimol, de cada uno, de hidroxiciánido y carbodiimida ciclohexil en dos mililitros de dimetilformamida; después de agitar a 20 grados Celsius durante tres horas, añada 0,05 milimoles de metil-PEG-amina en un mililitro de DMF seguido de 0,05 milimoles de trietilamina.Luego, agregue de forma gota a gota 0,4 milimoles de éster etílico de leucina y, tras una hora, verifique la finalización de la reacción mediante la respuesta negativa al ensayo de hyn en cromatografía en capa fina. De manera similar, agregue 0,1 milimoles de dos mer-capto, 1 etilamina y 0,5 milimoles de TEA. Elimine el exceso de éster de NHS mediante hidrólisis espontánea con solución salina tamponada con fosfato.Desalifique mediante una columna PD 10 y liofilice para obtener un polvo blanco; almacene este preconjugado seco a menos 20 grados Celsius. A continuación, añada 30 miligramos de anticuerpo en 4,5 mililitros de cloruro de sodio 150 milimolar en fosfato de sodio 100 milimolar a pH 5,5. Reduzca los enlaces disulfuro con tris 5 milimolar, clorhidrato de carboxietil fosfina 2, y purifique mediante una columna PD 10.Ahora, disuelva el IDE PEG IDE en dos mililitros del tampón anterior, aunque a pH 6,3. Añada el anticuerpo reducido y agite a 20 grados Celsius durante una hora. Concentre hasta 2,5 mililitros mediante AVEVA spin 20 con exclusión de 30 kilodalton y luego purifique mediante cidex G 75.Ahora verifique el producto mediante HPLC con columna de exclusión por tamaño. Mida la cantidad a 280 nanómetros y también confirme la ausencia de impurezas a otras longitudes de onda. A continuación, mezcle 50 miligramos del precursor con 200 MLEs del PEG IDE conjugado con anticuerpo en cinco mililitros de tampón pH 6,3.Ajuste la concentración de sulfhidro a dos milimolares e incube a 20 grados Celsius durante tres horas. Para obtener un rendimiento del 98 %, solubilice el oligonucleótido antisentido amino tres primos, haga reaccionar con un volumen de SPDP, purifique el A-O-N-P-D-P sobre Cidex LH 20 en metanol, luego evapore el metanol, disuelva el producto en agua y liofilice. Incube ahora 800 nanomoles del aos activado con el preconjugado de anticuerpo PEG a MEA SH durante la noche. Cuando la reacción de intercambio de disulfuro haya finalizado, incorpore el bloque de colorante fluorescente, bloquee los excesos de sulfhidros con PDP y purifique sobre Cidex G 75.Almacene el nano fármaco final a base de ácido polimalico a menos 20 grados Celsius. Para estimar el contenido de ácido polimalico durante la producción, proceda de la siguiente manera: a 320 microlitros de muestra, agregue 160 microlitros de cloruro de hidroxilamonio al 10% y 160 microlitros de hidróxido de sodio al 10%. Después de 10 a 15 minutos, mezcle con 160 microlitros de solución de cloruro férrico al 5% y visualice la formación de un color púrpura oscuro a 540 nanómetros. A continuación, hidrolice el nano fármaco durante la noche en ácido clorhídrico dos molar a 110 grados Celsius utilizando un ensayo con ampolla sellada para ácido maleico mediante cromatografía de fase reversa.Utilizando muestras enriquecidas con estándares de ácido maleico. Ahora, escindir el fármaco nano con dihidroxi-tiol 100 milimolar y medir los oligonucleótidos antisentido morpho mediante HPLC cuantitativa de fase reversa frente a estándares de ON morpho. Usando el fármaco nano escindido, medir el contenido de anticuerpo mediante un kit de ensayo de proteínas para cuantificar el contenido de PEG Malik.Primero, reaccione con tiocianato de amonio, luego extraiga con cloroformo y mida la absorbancia a 510 nanómetros. Evalúe la actividad del anticuerpo y la co-ligación mediante ELISA utilizando cinco microlitros de nano fármaco por pocillo y 0,5 microgramos por pocillo de Her2 como antígeno recubierto en placa. Finalmente, calcule el porcentaje obtenido para el oligonucleótido antisentido, EG y anticuerpo con respecto al ácido maleico.Comparar con el porcentaje previsto por el diseño del fármaco. Este enfoque estratégico bimodal hacia el fármaco nano emplea Herceptin para inhibir la vía de señalización HER2 y un ON específico para HER2 para bloquear la transcripción de los anticuerpos del receptor HER2, lo que facilita la transcitosis mediante el TFR endotelial del vaso tumoral. La plataforma nanoconjugada de ácido polimaléico fue producida por microplasmo cultivado y purificada; la activación de los grupos carboxílicos del PMLA facilitó la síntesis del andamiaje preconjugado.Y finalmente, el nanoconjugado de plomo. Los ensayos Eli SA demostraron la retención de anticuerpos monoclonales activos durante toda la síntesis del fármaco nano. Con ambos anticuerpos ensamblados en la misma plataforma polimérica, la microscopía confocal de fluorescencia rastreó la absorción celular del fármaco nano.Las imágenes superpuestas en cero y tres horas se analizaron junto con los endosomas marcados. Los coeficientes de correlación de Pearson para la colocalización indican la liberación del nano fármaco desde los endosomas hacia el citoplasma y la disociación de un ON del nano fármaco mediante la escisión dependiente de glutatión de un enlace disulfuro en el citoplasma. In vitro, el nano fármaco principal inhibió significativamente el crecimiento de manera más efectiva en la línea celular que sobreexpresa HER2.Experimentos in vivo en ratones portadores de cáncer de mama humano BT474, con sobreexpresión de HER2, mostraron una inhibición del crecimiento superior al 95 % mediante el nano fármaco principal que contiene Herceptin®. Y el inmunotransferencia ex vivo específico para HER2 indicó la inhibición tanto de la síntesis de HER2 como de la fosforilación de AKT, y la escisión de PARP marcó la apoptosis. La regresión tumoral en respuesta al tratamiento con el fármaco se demuestra mediante la reducción del tamaño del tumor y el agotamiento de las células tumorales mediante examen histológico.Ahora debería tener una buena comprensión de cómo utilizar una plataforma nano biocompatible para lograr un tratamiento personalizado eficaz sin efectos secundarios y obtener un fármaco nano con una composición controlada y actividades funcionales verificadas. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse con alta reproducibilidad tras su desarrollo. Esta técnica que emplea una plataforma nano de ácido poliacrílico para la administración dirigida de oligonucleótidos antisentido allana el camino para que los investigadores en el campo de la medicina nano personalizada exploren tratamientos contra tumores dirigidos a marcadores moleculares tumorales específicos identificados mediante análisis genéticos personalizados. Farmacológicamente, los agentes activos y las células pueden ser extremadamente peligrosos.Siempre se deben tomar precauciones, como usar mascarilla y guantes, al realizar este procedimiento.

polymalic-acid-based-nano-biopolymers-for-targeting-multiple-tumor

Research

Investigación

JoVE Journal

Chemistry

Química

El objetivo de este protocolo es describir la preparación y caracterización de fármacos físicamente atrapados y poco solubles en agua en sistemas micelares de administración de fármacos compuestos por copolímeros de bloques anfifílicos.

Preparación y Caracterización de Individual y Multi-fármaco cargado físicamente atrapado poliméricos micelas

Aquí, presentamos un protocolo para la síntesis del péptido de Unión placentaria condroitin sulfato A (plCSA-BP)-conjugados polímero lipídico nanopartículas via solo paso sonicación y bioconjugate técnicas. Estas partículas constituyen una novedosa herramienta para la entrega específica de la terapéutica para tumores más humanos y trofoblastos placentarios para tratar cánceres y trastornos placentarios.

Síntesis y caracterización de placenta condroitina sulfato (plCSA) - Targeting lípido - nanopartículas de polímero

Cáncer de ovario forma metástasis a lo largo de la cavidad peritoneal. Aquí, presentamos un protocolo y uso ácido fólico-receptor dirigido resonancia superficie-realzada Raman scattering crónicas que revelan estas lesiones con alta especificidad por radiométrica la proyección de imagen. Las crónicas son administrados por vía intraperitoneal a los ratones vivos, y las imágenes derivadas se correlacionan con la histología.

Superficie-realzado resonancia Raman dispersión Nanoprobe Ratiometry para la detección de cáncer ovárico microscópico a través del Receptor del folato dirigidos a

Aquí presentamos un protocolo para estudiar la localización in vivo de anticuerpos en modelos de xenoinjertos tumorales en ratones.

Análisis de la distribución de tumores y tejidos de anticuerpos terapéuticos específicos del antígeno objetivo

En este protocolo, las nanopartículas de oro modificadas con doxorrubicina AS1411-g-PEI-g-PEG se sintetizan a través de reacciones de amida de tres pasos. Luego, la doxorrubicina se carga y se administra a las células cancerosas diana para el tratamiento del cáncer.

Síntesis De Aptamer-PEI-g-PEG Nanopartículas De Oro Modificadas Cargadas Con Doxorrubicina Para La Administración De Fármacos Dirigidos

En este trabajo, proporcionamos un protocolo para biofuncionalizar nanomateriales magnéticos con anticuerpos para la diana celular específica. Como ejemplos, utilizamos nanocables de hierro para atacar las células cancerosas.

Biofuncionalización de Nanomateriales Magnéticos

Un paso necesario en el desarrollo de aptámeros anticancerosos es probar su unión al objetivo. Demostramos un ensayo basado en citometría de flujo para estudiar esta unión, enfatizando la importancia de incluir un aptámero de control negativo y células cancerosas que sean positivas o negativas para esa proteína en particular.

Un ensayo de unión a proteínas de superficie celular basado en citometría de flujo para evaluar la selectividad y la especificidad de un aptámero anticanceroso

La barrera hematoencefálica es un obstáculo importante en la administración de terapias para el glioblastoma, una enfermedad para la que no hay cura. Aquí, reportamos una nano plataforma terapéutica de óxido de hierro guiada por imágenes in vivo que puede eludir esta barrera fisiológica en virtud de su tamaño y acumularse en el tumor.

Entrega de nanopartículas de una carga útil de oligonucleótidos en un modelo animal de glioblastoma multiforme

Este artículo presenta una forma mejorada de una novedosa técnica glicómica de abajo hacia arriba diseñada para analizar el perfil composicional agrupado de glicanos en biofluidos no fraccionados a través de la descomposición química de los glicanos en sus monosacáridos específicos de enlace constituyente para su detección por GC-MS. Las aplicaciones potenciales incluyen la detección temprana del cáncer y otros trastornos afectivos de los glicanos.

El análisis de glicanos Nodo: un enfoque de abajo hacia arriba para Glicómica

Se han detallado esquemas de síntesis para preparar nanopartículas peludas altamente estables a base de fibra de madera y biopolímeros funcionales basados en celulosa.

Altamente estable, funcional Hairy nanopartículas y biopolímeros con fibras de madera: Hacia Nanotecnología Sostenible

Aprenda a sintetizar nanofármacos basados en ácido polimálico para terapia personalizada del cáncer de mama Her2 positivo. Este método biotecnológico permite la producción de plataformas de liberación dirigida con alta pureza óptica.

Biopolímeros Nano basados ​​en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada? (Video) | JoVE Journal

Biopolímeros Nano basados ​​en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?

Explorar más videos

Biopolímeros Nano basados en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?