Name: Gavage adultos de pez cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 9 s
Description: Aprende la técnica de sonda gástrica oral en pez cebra adulto para investigar organismos patógenos transmitidos por vía oral-fecal. Este método permite administrar volúmenes precisos de soluciones de forma segura y eficiente en Danio rerio.

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La Universidad Rockefeller Center Bioscience comparativo proporcionó apoyo para este proyecto. Agradecemos Monnas Janelle de asistencia técnica.

1. Preparación de la solución anestésica <ol><li> Preparar una solución de 150 mg / L de MS-222 en agua sistema, ya sea a partir de una solución madre o de la forma en polvo. </li><li> Verificar el pH con un medidor de pH. </li><li> Tampón con bicarbonato de sodio, según sea necesario hasta que el pH es de entre 7-7,5. </li><li> Prepare un tanque de agua del sistema libre de MS-222 para los peces para recuperar pulg El tiempo de recuperación es generalmente menos de 1 min. </li></ol> 2. Preparación del Aparato de alimentación forzada <ol><li> Cortar el tubo de implantación clara 22-G a un poco más que la longitud aproximada de la boca a la bombilla intestinal de los peces. Al principio, le sugerimos anestesiar un pez para cada nuevo grupo que se utiliza para obtener la mejor estimación de la longitud necesaria. </li><li> Empuje el tubo de corte implantación clara sobre la aguja 22-G ½ pulgadas hasta que es seguro y no hay riesgo de desprendimiento. Si una aguja ½ 22-C no está disponible, cortar una aguja más larga a la aplicaciónroximately que la longitud. </li><li> Cuando se completa, el tubo de implantación del catéter se debe extender sobre 1 cm de la punta de la aguja, o más cortas si los peces son más pequeños. </li><li> Coloque la base de la aguja 22-G a un luerlok jeringa de 1 cc. </li></ol> 3. Preparación para Gavage <ol><li> Corte una ranura en una esponja con una hoja de bisturí. </li><li> Sumerja la esponja en agua sistema libre de MS-222. </li><li> Colocar la esponja humedecida en una superficie plana. </li><li> Elaboración de la solución al 5 l adecuado para una sonda en el tubo del catéter 22-G y una jeringa de 1 cc. </li></ol> 4. Anestesia y Gavage <ol><li> Rápido el pescado durante al menos 24 horas antes del procedimiento. </li><li> Coloque el pescado en la solución de MS-222 hasta que pierde su reflejo de enderezamiento, y no responde a una aleta de pinzamiento del rabo, pero mantiene el movimiento opercular. Esto suele tardar unos 2-3 min. </li><li> Retire el pescado de la solución anestésica y colóquelo enla ranura en la esponja con la cabeza ligeramente sobresale de la esponja, pero las branquias cubiertas por la esponja. </li><li> Mover la esponja en una posición vertical. </li><li> Abra la boca del pez cebra mediante el tubo de catéter 22-G. </li><li> Introduzca suavemente el tubo hasta que la punta está más allá de las branquias (aproximadamente 1 cm o la longitud de la tubería). El tubo de implantación no debería necesitar ser forzado. Resistencia sugiere el tubo puede estar golpeando el arco branquial o del corazón. </li><li> Si hay resistencia, retirar con cuidado, vuelva a colocar y vuelva a intentarlo. </li><li> Inyectar el material lentamente. </li><li> Si bien la inyección, asegúrese de que la solución no sale a través de las branquias o la boca. </li><li> Retire el pescado de la esponja y el lugar en el depósito de recuperación. </li><li> La recuperación se produce normalmente en menos de 1 min y se indica por el pez nadando en posición vertical y mantener el equilibrio. </li><li> Supervisar los peces para la regurgitación como se muestra mediante la visualización de los peces expulsa el material de su boca, o ningún movimiento opercular. </li><li> El pescado puede ser devuelto a su tanque normal una vez que se han recuperado. </li></ol>

<ol><li>Royes, J. -A. B., Chapman, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoyes%2C+J-AB+%22Preparing+Your+Own+Fish+Feeds%22">Preparing Your Own Fish Feeds</a>. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).</li>
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<li>Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricaine+methane-sulfonate+%28MS-222%29+application+in+fish+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Ichthyology%22%5BJournal%5D)">Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia.</a> Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).</li>
<li>Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+gastrointestinal+physiology+using+a+novel+intestinal+transit+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish.</a> Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Significado Esta técnica es una mejora y proporciona varias ventajas con respecto a las dos técnicas descritas anteriormente para gavage adultos de pez cebra. En primer lugar, el uso de una esponja para contener los peces permite a una persona para llevar a cabo el procedimiento, en lugar de una técnica descrita anteriormente requiere dos personas. 7 En segundo lugar, la tubería implantación del catéter es más flexible que los catéteres IV, que puede ayudar a minimizar el trauma secu...

Los métodos actuales para la administración por vía oral de compuestos pez cebra incluyen compuestos administración superior con recubrimiento en piensos, mezclados en las dietas de gelatina, 1 bioencapsulado en salmuera camarones 2, mezclados con lípidos en dietas encapsuladas 3, cera perlas rociado 4 ya través de las dietas a base de gluten. 5 Limitaciones de estos métodos de administración oral incluyen altas tasas de lixiviación y el consumo incompleto o impredecible compuesto por cada ejemplar. Estas variables son problemáticos debido a que en estudios de enfermedades infecciosas, sabiendo que la dosis infecciosa administrados a los peces puede ser crítico para el éxito del estudio. Además, el trabajo previo ha demostrado que ciertos compuestos administrados en baños de agua causan lesión tóxica al pez cebra branquias antes de que los efectos intestinales que pueden ser objeto de estudio se producen. 6 Alimentación forzada es un método estándar utilizado en otras especies de animales de laboratorio para administrar cantidades precisas de un producto con akconcentración nown de estudio en la investigación biomédica y farmacéutica. Sólo recientemente los métodos para gavage pez cebra ha descrito en la literatura. Una técnica se describe un método de dos persona que utiliza una vaina de catéter 24-G unida a una pipeta de 2-20 para entregar 5 l de solución. 7 El método descrito tenía una tasa de mortalidad del 8,7% y 39% en la primera y segunda ensayo, respectivamente, la mayor parte de la mortalidad se atribuyó a las hembras grávidas. La segunda técnica de alimentación forzada describe jeringas por sonda de punta roma se utilizan para administrar 5 l de solución a medakas (latipes latipes). 8 La información sobre la mortalidad no fue proporcionada y el proceso exacto de la realización de la sonda no se describió. De acuerdo con el Consejo Canadiense de Cuidado de Animales y el pez cebra de laboratorio, hasta el 1% del peso corporal de los peces puede ser administrado a través de una sonda. 9,10 Nuestro objetivo fue desarrollar un método reproducible, segura y eficaz de entregar los volúmenes precisos de comlibra por vía oral a adultos de pez cebra de ambos sexos y en todas las etapas de la reproducción. Este procedimiento sería aplicable para cualquier estudio en el que se requiere la administración oral precisa de un compuesto.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Equipo</td></tr><tr><td>A esponja</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-cc jeringa luer lock</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-G Micro-Renathane Tubo de implantación (corte)</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 aguja de 22 G (cortada, si es necesario)</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medidor de pH</td><td>Sonda</td><td></td><td></td>Hanna</tr><tr><td>1 hoja</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr> de bisturí<td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Reactivo/Material</td></tr><tr><td>MS-222 (Finquel)</td><td>Argent Laboratories</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gavage adultos de pez cebra

Gavaging Adult Zebrafish

El pez cebra se ha convertido en un importante modelo in vivo en la investigación biomédica. Métodos eficaces deben desarrollarse y utilizarse para suministrar compuestos o agentes en soluciones para la investigación científica. Los métodos actuales para la administración de compuestos por vía oral a adultos de pez cebra son inexactos debido a la variabilidad en el consumo voluntario por los peces. Un procedimiento de alimentación forzada fue desarrollado para suministrar cantidades precisas de agentes infecciosos al pez cebra para el estudio en la investigación biomédica. Pez cebra adulto de más de 6 meses de edad fueron anestesiados con 150 mg / l de buffer MS-222 y alimentadas por sonda con 5 l de solución mediante tubos flexibles implantación del catéter conectado a una corte 22G punta de la aguja. El tubo flexible se redujo en la cavidad oral del pez cebra hasta que la punta de la tubería de extenderse más allá de las branquias (aproximadamente 1 cm). A continuación, la solución se inyecta lentamente en el tracto intestinal. Este método fue eficaz 88% del tiempo, con la recuperación de los peces sin incidentes. Esteprocedimiento también es eficaz como una persona puede alimentación por sonda 20-30 peces en una hora. Este método se puede utilizar para administrar con precisión agentes para estudios de enfermedades infecciosas, o estudios de otros compuestos en adultos de pez cebra.

Ambos sexos de los peces, incluyendo hembras grávidas fueron alimentadas por sonda con éxito (Figura 1). Un procedimiento exitoso tarda menos de un minuto con el líquido no visto que sale de las branquias o la boca. El tubo entra fácilmente, sin violencia, sin sangre visto después de la retirada del catéter. El procedimiento es rápido, requiere aproximadamente 10 min a la alimentación forzada de 3 a 4 peces, con un promedio de 30-45 seg por pez. El pez cebra no debe ser alim...

El creciente uso de pez cebra como modelo animal requiere el desarrollo de métodos eficaces para la entrega de cantidades conocidas de compuestos y soluciones. El procedimiento de alimentación forzada se describe a continuación permite la administración oral de volúmenes precisos de la solución de forma fiable, segura y eficiente para adultos de pez cebra.

Gavage adultos de pez cebra

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

El objetivo general de este video es demostrar una técnica para la administración oral en peces cebra adultos. Desarrollamos esta técnica con el fin de estudiar organismos patógenos que se transmiten a través de la vía fecal-oral. Puede utilizarse para administrar una cantidad precisa de solución.Para el estudio en peces cebra adultos. El proceso completo consta de cuatro pasos. El primero es preparar el aparato de gavaje.El segundo paso consiste en anestesiar el pez con 150 miligramos por litro de MS 222 tamponado. El tercer paso es administrar el pez por sonda con su solución. Y el último es la recuperación del pez y la vigilancia de efectos adversos.Para preparar el aparato de gavaje, corte el tubo de implantación de calibre 22 a la longitud adecuada para el pez, conéctelo a la aguja de calibre 22 y fíjelo al jeringa de 1 ml con cierre tipo luer. Cuando su solución esté lista, puede aspirarse dentro del aparato. Para la administración al pez cebra, se debe hacer un corte en la esponja con una hoja de bisturí o tijeras, de modo que cuando el pez se coloque dentro de la esponja, quede firmemente sujeto.La esponja debe remojarse previamente en agua del sistema para mantenerla húmeda. También debe prepararse un tanque de recuperación compuesto por agua del sistema sin anestésico, para colocar los peces adecuadamente una vez finalizado el procedimiento. Deje en ayunas a los peces al menos 24 horas antes del procedimiento.Utilizando una red, transfiera el pez al tanque de anestesia MS 22. Una vez que el pez esté anestesiado, como lo demuestra la falta de respuesta a un pellizco en la aleta caudal, retire el pez de la solución anestésica y colóquelo en la esponja de manera que la cabeza sobresalga ligeramente de la esponja, pero las branquias queden cubiertas. Coloque la esponja en posición vertical y, con el tubo de implantación de calibre 22, abra la boca del pez cebra.Inserte suavemente el tubo hasta que la punta esté más allá del nivel del corazón. La longitud varía según el tamaño del pez, y si hay resistencia, retire suavemente el tubo, reposiciónelo e intente nuevamente. No debería ser necesario forzar el tubo hacia abajo del tracto intestinal del pez cebra.Una vez en la ubicación adecuada, inyecte la solución y retire el tubo. Coloque el pez en el tanque de recuperación liberándolo desde la esponja. Si se realiza correctamente, el tubo debería deslizarse fácilmente dentro del tracto intestinal del pez cebra.No se observará ninguna solución saliendo por las branquias o la boca. No se visualizará sangre en la punta del tubo ni procedente de las branquias del pez. El problema más común es la salida de líquido por la boca o las branquias, lo que indica que el tubo no se introdujo lo suficientemente dentro del pez.Este procedimiento tiene una tasa de éxito general del 88 %. Cuando se realiza correctamente, no deben administrarse más de cinco microlitros de líquido, ya que una cantidad mayor reduce considerablemente la tasa de éxito del procedimiento. Cuando intentamos administrar 10 microlitros de solución, la tasa de éxito general disminuyó al 50 %. En este video, demostramos cómo realizar la gavaje en peces cebra adultos. Este procedimiento puede utilizarse para administrar con precisión cantidades conocidas de soluciones a peces cebra.Las ventajas de esta técnica frente a las técnicas descritas anteriormente son que utiliza un material más flexible y que las hembras preñadas pueden ser alimentadas por sonda de manera más efectiva. Gracias por ver este video y buena suerte con su trabajo.

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