Name: Un Abrigo Ropa de cama de Ensayo de Semillas para explorar Genéticamente In Vitro ¿Cómo la germinación de semillas en Controles Endosperma Arabidopsis thaliana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-09T21:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Aprende a ensamblar un ensayo de lecho de cubierta de semilla para estudiar cómo el endospermo controla la germinación en Arabidopsis thaliana. Este método permite investigar genéticamente la respuesta a señales ambientales in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabajo fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencia de Suiza y por el Estado de Ginebra.

Una vez que el SCBA se ensambla, el crecimiento de los embriones se monitoriza durante varios días. Por lo tanto, antes de que el procedimiento de disección de semillas y el montaje de la SCBA, hay que esterilizar las semillas para evitar contaminaciones futuras que podrían impedir la correcta valoración del efecto del material de cubierta de la semilla en el crecimiento embrionario. 1. Esterilización de semillas <ol><li> Vierta 50-60 l de semillas de Arabidopsis maduras y secas en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml y preparar una solución de etanol al 70%. </li><li> Añadir 1 ml de solución de etanol al 70% al tubo de microcentrífuga que contiene las semillas y agitar a temperatura ambiente durante 10 min a 1200 rpm en un agitador de vórtice. </li><li> Tubo de microcentrífuga Centrifugar durante 3 segundos a 4000 xg para concentrarse semillas en la parte inferior del tubo. </li><li> Aspirar la solución de etanol al 70% utilizando una punta de succión de vacío dejando cuidadosamente las semillas en la parte inferior del tubo de microcentrífuga. </li><li> Añadir 1 ml de agua destilada estéril para t<html> él tubo de microcentrífuga que contiene todavía las semillas. </li><li> Agitar a temperatura ambiente durante 10 min a 1200 rpm. </li><li> Tubo de microcentrífuga Centrifugar durante 3 segundos a 4000 xg para concentrarse semillas en la parte inferior del tubo. Aspirar el sobrenadante de agua usando una punta de succión de vacío dejando cuidadosamente las semillas en la parte inferior del tubo. </li><li> Añadir 1 ml de agua estéril agua destilada al tubo de microcentrífuga que contiene todavía las semillas. Asegúrese de que el flujo de agua suspende homogéneamente las semillas en el interior del tubo. El objetivo aquí es evitar una mayor agitación a fin de preservar la integridad de las semillas. </li><li> Deje que las semillas se depositan por gravedad en la parte inferior del tubo por el que sale del tubo inmóvil durante 30 seg. Aspirar el sobrenadante de agua usando una punta de succión de vacío dejando cuidadosamente las semillas en la parte inferior del tubo. </li><li> Repita cuatro veces los pasos 1.8 a 1.9. En general, el procedimiento de esterilización dura alrededor de 30 min. </li></ol> 2. Semilla Plating ontenido &quot;&gt; Todas las etapas subsiguientes se llevan a cabo dentro de una cabina de flujo laminar para preservar condiciones estériles. <ol><li> Preparar una placa de placa de Petri (100 mm de diámetro, 20 mm de altura) que contiene 30 ml de medio de germinación preparado por tratamiento en autoclave de una solución que contiene 4,3 g / l de Murashige y Skoog en 2,5 mM de 2 - (N-morfolino) etanosulfónico (MES-KOH , pH 5,7) y 0,8 g / l de agar. Deje que la solución se enfríe en un baño de agua a 50 ° C antes de verterla en la placa de placa de Petri. </li><li> Añadir 200 l de agua destilada estéril al tubo que contiene las semillas. Resuspender las semillas y transferirlos sobre la superficie del medio de germinación utilizando una pipeta estándar con una punta de 1 ml. </li><li> Eliminar el agua que rodea las semillas en la superficie del medio de germinación utilizando una punta de succión de vacío. </li><li> Deje la placa de Petri que contiene las semillas sin su tapa interior de la cabina de flujo laminar durante 2 horas para su posterior secado. Cierre la caja de Petri con la tapa y se deja reposar bajo el laminarCabina de flujo durante unos 90 min de manera que han pasado cerca de 4 horas desde el inicio del procedimiento de esterilización de semillas (paso 1.2). </li></ol> 3. Disección de Semillas Los siguientes pasos requieren trabajar con un estereomicroscopio colocado en el interior del gabinete de la campana de flujo laminar. Un fórceps Dumont # 5 con truncadas (es decir, romo) consejos facilita en gran medida el manejo de las semillas (Figura 1A). <ol><li> Prepare una nueva placa de placa de Petri que contiene 30 ml de medio de germinación. Coloque sobre la superficie de las dos medianas papeles rectangulares yuxtapuestas estériles Whatman 3MM (1,5 cm x 1,0 cm; Figura 1B, paso 1). Whatman 3MM de papel se esteriliza en un autoclave. </li><li> Traslado semillas en los papeles Whatman 3MM utilizando pinzas estériles (Figura 1B, paso 2). </li><li> Celebrar una semilla individual contra el papel Whatman 3MM presionando suavemente la semilla utilizando las puntas romas yuxtapuestas de las pinzas truncadas ( <strong&gt; Figura 1B, paso 3). </li><li> Cortar la cubierta de la semilla (testa y el endospermo) de la semilla usando una aguja de jeringa (por ejemplo, insulina U100 + jeringa jeringa de 1 ml, 0,33 mm (29 G) x 12,7 mm) (Figura 1B, etapa 4). La forma de las semillas de Arabidopsis es elipsoidal y se recomienda cortar la cubierta de la semilla a lo largo de los semi-eje principal más largas lo más cerca posible del lugar donde los cotiledones se unen a la radícula (es decir, lejos de la punta radical). Esto ayuda a la liberación segura del embrión en el siguiente paso del procedimiento de disección. </li><li> Empuje la semilla contra el papel Whatman 3MM usando las puntas romas yuxtapuestas de las pinzas truncado (Figura 1B, paso 5). Este paso libera el embrión a cabo la cubierta de la semilla a través de la abertura creada en el paso 3.4 (Figura 1B, paso 6). Se recomienda aplicar el empuje sobre la semilla donde la punta de los cotiledones son en más cercana a la punta de la radícula (es decir, alejado FRom la apertura). </li></ol> 4. Asamblea de la cubierta de la semilla de cama Assay (SCBA) Véase el análisis de la adecuada elección de la cantidad de cubiertas de las semillas y embriones. <ol><li> Prepare una nueva placa de placa de Petri que contiene 30 ml de medio de germinación. Lugar en la superficie del medio de una pieza rectangular estéril (3,5 cm x 5,0 cm) de malla de nylon (Figura 2, paso 1). </li><li> Para evitar daños, embriones y cubiertas de las semillas se pueden mover a la superficie de los bordes metálicos de la pinza empujando suavemente usando la aguja de la jeringa (figura 2, paso 2). Embriones de transferencia y las cubiertas de las semillas en la malla de nylon (figura 2, paso 3). </li><li> Montar una capa circular y única de cubiertas de las semillas utilizando las pinzas romas y la aguja asegurándose de que revestimientos de semillas están en la proximidad como mucho más cerca posible (figura 2, paso 4). Trate de exponer tanto como sea posible la apertura cubierta de la semilla generada por elaguja hacia arriba. Este paso no fue probado sistemáticamente. Sin embargo, se podría aumentar la eficiencia de la SCBA ya que se espera sustancias difusibles que inhiben el crecimiento del embrión para difundir directamente hacia el embrión en lugar de fuera de ella. </li><li> Coloque los embriones como una capa única circular en el centro de la cama cubierta de la semilla montado en el paso 4.3 (Figura 2, paso 5). Asegúrese de que los embriones se encuentran en la proximidad como mucho más cerca posible. </li><li> Incubar los SCBAs bajo luz continua (40 mmol / m 2 s ec) a 20-21 ° C. En el caso en que se utiliza un pulso de FR para detener la germinación, ensamble el SCBA con la luz normal, aplique el pulso FR como se describe 9 y dejar placa de Petri en la oscuridad. </li></ol>

<ol><li>Debeaujon, I., Leon-Kloosterziel, K. M., Koornneef, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+the+testa+on+seed+dormancy%2C+germination%2C+and+longevity+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Influence of the testa on seed dormancy, germination, and longevity in Arabidopsis.</a> Plant Physiol. 122, 403-414 (2000).</li>
<li>Baroux, C., Spillane, C., Grossniklaus, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+origins+of+the+endosperm+in+flowering+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolutionary origins of the endosperm in flowering plants.</a> Genome Biol. 3, reviews1026(2002).</li>
<li>Debeaujon, I., Lepiniec, L., Pourcel, L., Routaboul, J. -M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDebeaujon%2C+I+%22Seed+development%2C+dormancy+and+germination%22">Seed development, dormancy and germination</a>. , Blackwell Publishing. 25-43 (2007).</li>
<li>Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+dormancy+and+the+control+of+germination%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Seed dormancy and the control of germination.</a> New Phytol. 171, 501-523 (2006).</li>
<li>Bethke, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+aleurone+layer+responds+to+nitric+oxide%2C+gibberellin%2C+and+abscisic+acid+and+is+sufficient+and+necessary+for+seed+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis aleurone layer responds to nitric oxide, gibberellin, and abscisic acid and is sufficient and necessary for seed dormancy.</a> Plant Physiol. 143, 1173-1188 (2007).</li>
<li>Lee, K. P., Piskurewicz, U., Tureckova, V., Strnad, M., Lopez-Molina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+seed+coat+bedding+assay+shows+that+RGL2-dependent+release+of+abscisic+acid+by+the+endosperm+controls+embryo+growth+in+Arabidopsis+dormant+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A seed coat bedding assay shows that RGL2-dependent release of abscisic acid by the endosperm controls embryo growth in Arabidopsis dormant seeds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19108-19113 (2010).</li>
<li>Reed, J. W., Nagatani, A., Elich, T. D., Fagan, M., Chory, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytochrome+A+and+Phytochrome+B+Have+Overlapping+but+Distinct+Functions+in+Arabidopsis+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Phytochrome A and Phytochrome B Have Overlapping but Distinct Functions in Arabidopsis Development.</a> Plant Physiol. 104, 1139-1149 (1994).</li>
<li>Shinomura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+spectra+for+phytochrome+A-+and+B-specific+photoinduction+of+seed+germination+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Action spectra for phytochrome A- and B-specific photoinduction of seed germination in Arabidopsis thaliana.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 8129-8133 (1996).</li>
<li>Lee, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+and+genetically+distinct+control+of+seed+germination+by+phytochromes+A+and+B%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Spatially and genetically distinct control of seed germination by phytochromes A and B.</a> Genes Dev. 26, 1984-1996 (2012).</li>
<li>Lee, K. P., Lopez-Molina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+seed+germination+in+the+shade%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Control of seed germination in the shade.</a> Cell Cycle. 11, 4489-4490 (2012).</li>
<li>Piskurewicz, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gibberellic+acid+signaling+repressor+RGL2+inhibits+Arabidopsis+seed+germination+by+stimulating+abscisic+acid+synthesis+and+ABI5+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The gibberellic acid signaling repressor RGL2 inhibits Arabidopsis seed germination by stimulating abscisic acid synthesis and ABI5 activity.</a> Plant Cell. 20, 2729-2745 (2008).</li>
<li>Piskurewicz, U., Tureckova, V., Lacombe, E., Lopez-Molina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Far-red+light+inhibits+germination+through+DELLA-dependent+stimulation+of+ABA+synthesis+and+ABI3+activity%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Far-red light inhibits germination through DELLA-dependent stimulation of ABA synthesis and ABI3 activity.</a> EMBO J. 28, 2259-2271 (2009).</li>
<li>Debeaujon, I., Koornneef, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gibberellin+requirement+for+Arabidopsis+seed+germination+is+determined+both+by+testa+characteristics+and+embryonic+abscisic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gibberellin requirement for Arabidopsis seed germination is determined both by testa characteristics and embryonic abscisic acid.</a> Plant Physiol. 122, 415-424 (2000).</li>
<li>Sun, T. P., Kamiya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+GA1+locus+encodes+the+cyclase+ent-kaurene+synthetase+A+of+gibberellin+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis GA1 locus encodes the cyclase ent-kaurene synthetase A of gibberellin biosynthesis.</a> Plant Cell. 6, 1509-1518 (1994).</li>
<li>Alonso, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+insertional+mutagenesis+of+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genome-wide insertional mutagenesis of Arabidopsis thaliana.</a> Science. 301, 653-657 (2003).</li>
<li>Rook, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+sucrose-induction+mutants+reveal+the+modulation+of+sugar-induced+starch+biosynthetic+gene+expression+by+abscisic+acid+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Impaired sucrose-induction mutants reveal the modulation of sugar-induced starch biosynthetic gene expression by abscisic acid signalling.</a> Plant J. 26, 421-433 (2001).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Procedimiento El ensayo de cama cubierta de la semilla (SCBA) descrito aquí es en principio aplicable a cualquier circunstancia en la que se bloquea la germinación de semillas de Arabidopsis (o atrasados) y donde el endospermo se sospecha de implementar este arresto. Este último puede ser evidenciado por la eliminación de la cubierta de la semilla (testa y el endospermo) y observando que avanza el crecimiento de embriones más rápidas respecto a la observada cuando los embriones están rodeadas por la cubierta de...

En semillas maduras de Arabidopsis, la cubierta de la semilla se compone de la testa, una capa externa de tejido muerto de origen materno, y el endospermo, una sola capa de células de tejido vivo que rodea directamente el embrión 1. El endospermo y el embrión se derivan de acontecimientos de fertilización separados: el endospermo es un tejido triploide con dos materna y uno genoma paterno mientras que el embrión es un tejido diploide con uno materna y uno genoma paterno 2. La función principal tradicionalmente asignado al endospermo es la de un tejido nutritivo. Sin embargo, cada vez es más evidente que el endospermo también juega un papel central para el control de la germinación de semillas. Esta idea se convirtió en la primera patente en el caso de inactividad, un rasgo exhibido por semillas de nueva producción. Las semillas en dormancia no germinan a pesar de la presencia de condiciones de germinación favorables. Las semillas pierden su letargo después de un período de maduración y se convierten en nondormant, es decir que van a germinar cuando se expone a condiciones de germinación favorables. En muchas especies de plantas, incluyendo la planta modelo Arabidopsis, la cubierta de la semilla es absolutamente necesaria para evitar la germinación de las semillas latentes desde la extracción cubierta de la semilla desencadena el crecimiento embrionario y la ecologización de 3,4. En Arabidopsis, Bethke et al. Observó que la germinación se mantuvo reprimida después de la eliminación de la testa, manteniendo el endospermo que rodea el endospermo 5. Estas observaciones indican fuertemente que el endospermo es el tejido dentro de la cubierta de la semilla ejerciendo una actividad represiva en el embrión. Sin embargo, los experimentos de remoción de semillas capa no necesariamente ayudan a aclarar la naturaleza de la actividad represiva de germinación proporcionada por la cubierta de la semilla, ni la identificación de los genes que lo implementan. Recientemente hemos introducido un ensayo de la ropa de cama cubierta de la semilla (SCBA) en caso de cubiertas de las semillas y embriones están físicamente separados pero mantienen en estrecha proximidad de modo que la actividad represiva de germinación proporcionado por el endospermo se mantiene 6. El SCBA permite el uso combinatorio de cubierta de la semilla latente, nondormant y modificada genéticamente y los materiales embrionarias. Como resultado, las vías genéticas que controlan la germinación y operar específicamente en el endospermo y el embrión pueden ser diseccionados. El SCBA se utiliza en el contexto de la latencia para mostrar que el endospermo libera la fitohormona ácido abscísico (ABA) hacia el embrión a reprimir su crecimiento 6. Además podemos usar el SCBA para identificar las vías de señalización que actúan en el endospermo y tejidos embrionarios para promover la latencia. El papel del endospermo para controlar la germinación se fortaleció aún más al considerar el caso de las semillas nondormant expuestas a un pulso de rojo lejano (FR) de luz. Temprano en imbibición de la semilla se conoce un pulso de luz FR para inhibir la germinación de 7,8. Cuando cubiertas de las semillas se extrajeron a partir de semillas de un pulso de luz FRfue incapaz de inhibir la germinación, lo que sugiere fuertemente que el endosperma también puede reprimir la germinación de semillas nondormant 9. Sorprendentemente, el ERA también se podría utilizar para recapitular la inhibición FR-dependiente de la germinación. Esto permitió demostrar que la inhibición que FR-dependiente de la germinación de la semilla es también un proceso que implica la liberación de ABA del endospermo 9. Además, el SCBA permitió identificar las diferentes vías de señalización luminosa que funciona en el endospermo y el embrión para controlar la germinación de semillas nondormant en respuesta a señales de luz de 9,10. Por consiguiente, el SCBA parece ser una técnica fiable para explorar la función del endospermo en el contexto del control de la germinación de la semilla. También es una herramienta poderosa para evaluar in vitro si los genes sospechosos para controlar la germinación operan en el endospermo, el embrión o ambos tejidos. A continuación te detallamos los distintos pasos necesarios para montar un SCBA.

<table><tbody><tr><td>Thermomixer Comfort</td><td>Eppendorf AG</td><td>5355 000.011</td><td>Eppendorf AG, Hamburgo, Alemania</td></tr><tr><td>Vacusafe Comfort</td><td>INTEGRA Biosciences AG</td><td>158 310</td><td>Integra Biosciences AG, Zizers, Suiza</td></tr><tr><td>Placa de Petri (100 mm x 20 mm)</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>664 102</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Alemania</td></tr><tr><td>Murashige y Skoog</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5524</td><td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE. UU</td></tr>. <tr><td>MES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3671</td><td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE. UU</td></tr><tr>.<td>Agar (agar vegetal)</td><td>Duchefa Biochemie B.V.</td><td>P1001</td><td>Duchefa Biochemie, Haarlem, Países Bajos</td></tr><tr><td>Pinza Dumont #5</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>11251-10</td><td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg Alemania</td></tr><tr><td>Aguja de jeringa</td><td>BD Micro-Fine</td><td>324827</td><td>BD, Franklin Lakes, NJ EE. UU</td></tr>. <tr><td>Malla de nailon (SEFAR NYTEX)</td><td>SEFAR AG</td><td>03-50/31</td><td>Sefar AG, Heiden, Suiza</td></tr><tr><td>Cámara de crecimiento</td><td>CLF Plant Climatics</td><td>Planta Percival I-30BLLX</td><td>CLF Climatics, Wertingen, Alemania</td></tr><tr><td>Paclobutrazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46046</td><td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE. UU.</td></tr></tbody></table>

un abrigo ropa de cama de ensayo de semillas para explorar genéticamente<em&gt; in vitro</em&gt; ¿cómo la germinación de semillas en controles endosperma<em&gt; arabidopsis thaliana</em

A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana

El endospermo de Arabidopsis consta de una sola capa de células que rodea el embrión maduro y que juega un papel esencial para prevenir la germinación de semillas latentes o que de semillas nondormant irradiados por un pulso de luz roja lejana (FR). Con el fin de obtener una mayor comprensión de los mecanismos genéticos moleculares que subyacen a la actividad represiva de germinación ejercida por el endospermo, se ideó un ensayo de &quot;ropa de cama cubierta de la semilla&quot; (SCBA). El SCBA es un procedimiento de disección separar físicamente las cubiertas seminales y embriones de las semillas, que permite monitorizar el crecimiento de los embriones sobre una capa subyacente de cubiertas de las semillas. Sorprendentemente, el ERA reconstituye las actividades de represión de germinación de la cubierta de la semilla en el contexto de la latencia de las semillas y el control FR-dependiente de la germinación de la semilla. Desde la SCBA permite el uso combinatorio de cubierta de la semilla latente, nondormant y modificada genéticamente y los materiales embrionarias, las vías genéticas que controlan la germinación y específicamente operating en el endospermo y el embrión puede ser diseccionado. Aquí detallamos el procedimiento para ensamblar un SCBA.

El trabajo previo mostró que las semillas mutantes incapaces de sintetizar GA fueron incapaces de germinar como resultado de la acumulación de ABA alta en las semillas 11,12. Sin embargo, la incapacidad para germinar requiere la cubierta de la semilla desde su extracción provoca embrionario 13 crecimiento. Esto indica claramente que el endospermo de semillas que no pueden sintetizar GA es la liberación de ABA para bloquear el crecimiento embrionario. Por tanto, esperamos revestimientos de semillas ...

Se presenta el procedimiento para montar un ensayo de la ropa de cama cubierta de la semilla (SCBA) a partir de semillas de Arabidopsis thaliana. El SCBA ha demostrado ser una herramienta poderosa para explorar genéticamente in vitro y la forma en la germinación de los controles del endospermo de semillas de semillas latentes y en respuesta a las señales de luz. El SCBA es, en principio, aplicable en virtud de cualquier situación en la que se sospecha que el endospermo de influir en el crecimiento embrionario.

Un Abrigo Ropa de cama de Ensayo de Semillas para explorar Genéticamente<em&gt; In Vitro</em&gt; ¿Cómo la germinación de semillas en Controles Endosperma<em&gt; Arabidopsis thaliana</em

The Arabidopsis endosperm consists of a single cell layer surrounding the mature embryo and playing an essential role to prevent the germination of ...

El objetivo general de este procedimiento es armar un ensayo de lecho de cubierta seminal para explorar cómo el endospermo controla la germinación de semillas en un Arabidopsis en respuesta a diversas condiciones ambientales, tanto a nivel genético como in vitro. Esto se logra primero utilizando una aguja de jeringa y pinzas truncadas para diseccionar cuidadosamente la semilla, la cubierta y el embrión de semillas de Arabidopsis. En el segundo paso, las cubiertas seminales diseccionadas se transfieren suavemente a un medio de germinación.A continuación, las cubiertas de las semillas se ensamblan en una sola capa circular. En el último paso, los embriones se disponen en el centro del lecho de cubiertas de semillas ensamblado, también en una sola capa circular.El endospermo desempeña un papel esencial para controlar la germinación de semillas en nuestras semillas de ab autopsia. Y el ensayo de flexión del código de semilla es un procedimiento genético in vitro para identificar los componentes moleculares de las vías de señalización que actúan en el endospermo para el control de la germinación de semillas. En general, las personas conocen este método con dificultad porque es complicad

a-seed-coat-bedding-assay-to-genetically-explore-vitro-how-endosperm

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Se describe un protocolo utilizando portaobjetos de cámara y los medios para inmovilizar los cotiledones de la planta para la formación de imágenes confocal de la epidermis durante varios días de desarrollo, la documentación de diferenciación estomática. Proteínas marcadas con fluoróforo se puede seguir dinámicamente por la expresión y localización subcelular, mejorar la comprensión de sus posibles funciones durante la división celular y la diferenciación de células de tipo.

A largo plazo, de alta resolución de imagen confocal Time Lapse de<em&gt; Cotiledones Arabidopsis</em&gt; Epidermis durante la germinación

Este video muestra el ensayo de inhibición del crecimiento de plántulas en la planta Arabidopsis thaliana. Se determina el impacto del aumento de la concentración de elicitor de péptidos inmunes en el crecimiento de las plántulas.

Medición de la inhibición inducida por el sistema inmunitario del crecimiento de las plántulas

Se presenta un método eficiente y simple para aislar embriones en las primeras etapas de desarrollo...

Aislamiento eficaz y rápida de los embriones en etapa temprana de<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Semillas

En este artículo se describen los métodos para seleccionar los genes que controlan la permeabilidad plasmodesmal y el gradiente de ahí auxina durante la respuesta trópico. Esto incluye la medición del grado de respuesta trópico en hipocotilo   de Arabidopsis thaliana y comprobar la permeabilidad plasmodesmal por el ácido 8-hidroxipireno-1,3,6-trisulfónico carga (HPTS) y la evaluación del nivel de fin de callosa.

Una estrategia para validar el papel de callosa mediada Plasmodesmal de apertura de puerta en la respuesta Tropic

Aquí se presenta un protocolo para evaluar la supervivencia de semillas, germinación y la latencia en condiciones de campo utilizando enterrados, tiras de semillas etiquetadas y pruebas de viabilidad cloruro de tetrazolio (TZ).

Método fiable para evaluar la germinación de semillas, dormancia y mortalidad en condiciones de campo

Este protocolo describe un método para la observación de embriogénesis en Arabidopsis vía separación de óvulo, seguido por la inspección de la formación de patrones de embrión bajo un microscopio.

Un método para la caracterización de embriogénesis en Arabidopsis

El objetivo de este estudio fue determinar los efectos de la esterilización con gas cloro y el cloro en la germinación de la semilla de un genotipos gama de Arabidopsis crecen en medios estériles. Se han desarrollado protocolos de esterilización optimizado para prevenir el crecimiento de contaminantes microbianos mientras que proporciona la supervivencia satisfactoria de la semilla.

Método estandarizado para la esterilización de alto rendimiento de semillas de Arabidopsis

Una suave máquina de carga de fuerza táctil está construida a partir de cepillos de pelo humanos, brazos robóticos y un controlador. Los cepillos para el cabello son accionados por brazos robóticos instalados en la máquina y se mueven periódicamente para aplicar la fuerza táctil en las plantas. La fuerza de los toques capilares accionados por máquina es comparable a la de los toques aplicados manualmente.

Un Protocolo de Pantalla Mutante de Señalización de Señalización de Fuerza Táctil Y Repetible para el Estudio de la Thigmomorfogénesis de una Planta Modelo Arabidopsis thaliana

Este artículo describe dos métodos de fenotipado sin el uso de peelings epidérmicos para caracterizar los genes que controlan el desarrollo estomatizante. El primer método demuestra cómo analizar un fenotipo estomatizado utilizando una epidermis vegetal teñida con azul de toluidina. El segundo método describe cómo identificar ligandos estomacales y monitorear sus actividades biológicas.

Identificación de los genes implicados en el desarrollo estomatológico mediante la puntuación del fenotipo epidérmico

Aquí, describimos una herramienta avanzada diseñada para el monitoreo de la biosíntesis de clorofila durante las primeras etapas de la desetiolación de plántulas de Arabidopsis . La novedosa metodología proporciona imágenes no invasivas de fluorescencia de clorofila en tiempo real a alta resolución espacial y temporal.

Ensayo no invasivo para la determinación cinética de la biosíntesis de clorofila durante las primeras etapas de la desetiolación de Arabidopsis

Este protocolo describe la preparación de muestras intactas de la capa de células endospermas en semillas de Arabidopsis thaliana . El método solo requiere equipo de laboratorio común, como una aguja de inyección y pinzas de precisión, y permite obtener imágenes fluorescentes de células vivas de alta resolución de células endospermas tanto en semillas en desarrollo como maduras.

Preparación de tejido intacto para el análisis microscópico de la capa de células endospermas en semillas de Arabidopsis en desarrollo y maduras

Aprende a ensamblar un ensayo de lecho de cubierta de semilla para estudiar cómo el endospermo controla la germinación en Arabidopsis thaliana. Este método permite investigar genéticamente la respuesta a señales ambientales in vitro.

Un Abrigo Ropa de cama de Ensayo de Semillas para explorar Genéticamente In Vitro ¿Cómo la germinación de semillas en Controles Endosperma Arabidopsis thaliana (Video) | JoVE Journal

Un Abrigo Ropa de cama de Ensayo de Semillas para explorar Genéticamente

Explorar más videos