Name: Duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Aprende a medir la duración de la comida como marcador cuantitativo del dolor orofacial en roedores. Este método no invasivo evalúa la nocicepción mediante módulos de alimentación computarizados sin restricción animal.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

En este modelo a las ratas o ratones se les dio alimento y agua ad libitum. El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Odontología baylor de la Universidad de Texas A&M aprobó todos los protocolos experimentales. A continuación, los ajustes específicos se muestran en cursiva y se utilizan específicamente para el modelo de artritis de la ATM de rata. Los ratones también se pueden utilizar en este modelo y el dolor dental alternativo y el dolor orofacial miogénico modelos animales también se pueden utilizar42,43.
1. Configuración del software
<ol><li>Cargue el software Animal Monitor para las unidades de alimentación en la computadora.</li>
	<li>El software Animals Monitor ahora se abre haciendo clic en el icono y en la selección del menú de archivos elija la opción desplegable "configuración".</li>
	<li>En la ventana "Configuración del monitor animal" desmarque la casilla titulada "Pellet Delivered Input"(Figura 1A). Nota: Esta casilla generalmente está marcada en la fábrica de forma predeterminada. Anule la selección de esta opción. Una vez que el investigador anula la selección de esta opción, los resultados se registran mediante la eliminación de un pellet del canal en lugar de cuando se está dispensando un pellet. Nota: Cuando se marca la casilla "Nombre automático de archivos", el software nombrará automáticamente los archivos (Figura 1A). Esta casilla suele estar marcada en la fábrica de forma predeterminada.</li>
	<li>Configure las luces del temporizador para que se enciendan a las 06:00 (6:00 a.m.) y se apaguen a las 20:00 (8:00 p.m.). Nota: el hardware para las unidades de los alimentadores fue modificado de modo que las luces dentro de las cajas no sean controladas por el software sino que estén atados con alambre en lugar de otro a un temporizador aislado de 24 horas. Por lo tanto, la "Luz de la casa" indicada en el software de configuración no era funcional en estos ejemplos.</li>
	<li>Seleccione el menú desplegable editar y elija Experimentar. Aparece una ventana con el título "Box 01 -"(Figura 1B).</li>
	<li>Introduzca el nombre de archivo con el que se guardarán los datos en esta ventana. Nota: si no se introduce ningún nombre de archivo, el software nombrará automáticamente los archivos de datos. Los detalles del experimento se pueden agregar en esta ventana y guardar con los archivos de datos. La información de la ventana también se puede guardar y utilizar para experimentos posteriores.</li>
	<li>Introduzca un número mayor que el tiempo total del experimento en el cuadro de entrada titulado "Duración del experimento (días):". Nota: Esto asegurará que el software guarde los datos hasta que se complete el experimento, un error puede ser establecer este valor demasiado corto, lo que impedirá que el software grabe los datos aunque los animales todavía estén en los módulos de alimentación.</li>
	<li>Introduzca 24 en el cuadro de entrada titulado "Número de horas en un día". Nota: la longitud se puede modificar a las especificaciones del experimentador.</li>
	<li>Ingrese 10 en el cuadro titulado "Criterios de fin de período de comida (min):" Nota: para las ratas, una comida se definió utilizando un criterio de 10 minutos de fin de la comida basado en estudios anteriores48 (es decir, una comida se cuajó antes y después por un período de 10 minutos de no se tomaron pellets) y el tamaño mínimo de la comida se fijó en tres pellets por comida en este paquete de software.</li>
	<li>Introduzca 45 en el cuadro titulado "Tamaño del pellet (mg)". Si un individuo quería usar ratones, ingrese 20 dentro de esta ventana.</li>
	<li>Para las ratas agregue 45 mg de pellets de chow de roedores a la tolva dispensadora del alimentador. Nota: para ratones añadir 20 mg de roedores chow pellets a la tolva chow.</li>
	<li>En la sección "Fase" de la ventana Experimento ingrese el término Día en el campo "Nombre" y en el campo "# de Horas" escriba 24 (Figura 1B). Nota: debajo de la sección "Fase" hay dos grandes camposabiertos. El primer campo abierto grande se rellenará con el texto introducido en los campos anteriores "Fase" y "Nombre".</li>
	<li>El siguiente gran campo abierto tendrá el encabezado "Day Phase" Introduzca en el campo titulado "Name" la palabra Light e introduzca en el campo titulado "Percent" el número 60. Nota: este texto introducido rellenará el campo grande a continuación.</li>
	<li>A continuación introduzca en el campo titulado "Nombre" la palabra Oscuro e introduzca en el campo titulado "Porcentaje" el número 40. Nota: con estas entradas el 60% del día se atribuirá a la fase de luz y el 40% se atribuirá a la fase oscura. Cuando el software calcula los patrones de comida esta información se utilizará. Estos ajustes son típicos para los animales hembras en bicicleta que se mantienen en un ciclo de luz / oscuridad de 14:10.</li>
	<li>Seleccione el botón "Establecer todas las cajas como esta". Guarde esta información y, a continuación, pulse Aceptar.</li>
	<li>Aparece la pantalla "Cuadros de inicio", seleccione los alimentadores para activar y pulse OK (Figura 1C).</li>
	<li>A continuación, aparecerán las ventanas de tiempo de ejecución de Animal Monitor con los datos del patrón de comida (Figura 1D). Nota: monitoree y registre el "# de Pellets Dispensados" desde esta ventana para determinar la salud actual de la rata. Una rata macho sana que pesa alrededor de 300 g típicamente comerá entre 300-800 45 mg pellets al día.</li>
	<li>Los archivos se generan diariamente y se guardan automáticamente que tienen un archivo . CSV. Abra estos archivos para recuperar datos de patrón de comida como la ingesta de alimentos, el número de comida, la duración de la comida, el tamaño de la comida o el intervalo intermedio. Los intervalos para estos patrones de comida se pueden calcular para todo el día o para una fase del día como la fase oscura y clara. Como se indicó anteriormente, los ajustes son para un ciclo de luz / oscuridad 14:10. Los datos brutos de cuándo se eliminó cada pellet de la vaguada también se registran como un raw. Archivo CSV. Nota: En versiones anteriores del software un tamaño mínimo de comida de 3 pellets no se utiliza en los cálculos para generar el . Archivo CSV.  Además, para obtener la duración media de la comida utilizando el software más antiguo, debe restar 10 minutos de los valores de la columna Duración media de la comida del . Archivo CSV. Cuando el software está funcionando, el operador puede seleccionar manualmente la opción de menú desplegable de archivos y seleccionar diariamente "guardar datos sin procesar". Esto guardará los datos sin procesar durante un período de 24 horas en lugar de para todo el experimento. Estos datos sin procesar pueden ser procesados por software alternativo a discreción del usuario. Nota: en los resultados mostrados utilizamos software alternativo para incluir un tamaño mínimo de comida de 3 pellets.</li>
</ol>2. Ensayo de duración de la comida
<ol><li>Coloque ratas individuales en las cámaras atenuadas por sonido equipadas con alimentadores de pellets activados por computadora de fotobeam. Nota: en estas unidades de alimentación hay botellas de agua graduadas y sartenes de residuos en las que se coloca una hoja de papel absorbente grueso. En la tolva dispensadora del alimentador se pueden agregar pellets de chow de roedor de 45 mg para ratas o pellets de chow de roedor de 20 mg para ratones. Los pellets de Chow se dispensan en un comedero en forma de V y en la parte inferior de este comedero hay un fotoboste. Un pellet dispensado en el canal se detectará rompiendo este fotobeam. Una vez que una rata elimina este pellet del canal de alimentación, el fotobeam se restaura y esto indica a la computadora que deje caer otro pellet. La restauración del fotobeam también activa la computadora para registrar la fecha y la hora y mantiene un recuento de los pellets dispensados. Este recuento de pellets se analiza para determinar la ingesta de alimentos, el número de comidas, la duración de la comida, el tamaño de la comida o el intervalo intermeal durante cualquier parte del día utilizando el software Med Assoc. De nuevo el crudo . Archivo de datos CSV puede ser analizado por software externo39,40,49-51.</li>
	<li>Registrar el número total de pellets ingeridos, la cantidad de agua consumida y el peso de los animales para discernir la salud general de las ratas durante la experimentación.</li>
	<li>Enjuague las botellas de agua y llénese con agua dulce diariamente y agregue chow a la tolva del alimentador cuando sea necesario.</li>
	<li>Vierta la bandeja de residuos y el papel absorbente grueso debajo de la jaula diariamente y sople el polvo de la parte móvil del alimentador diariamente usando aire de alta presión. Nota: se requiere equipo de protección personal(por ejemplo, batas, guantes, máscaras y máscaras).</li>
	<li>Retire los pisos, las bandejas de residuos y las botellas de agua después de que se complete el experimento y lave estos componentes. Además, retire la electrónica de alimentación del lavado de enjaulado a mano o en un lavavajillas.</li>
</ol>3. Inducción de la artritis de la ATM
<ol><li>Coloque a los animales en los comederos al menos 4 días antes de la experimentación. Nota: estos datos se reportarán como predía para obtener un comportamiento de alimentación basal. Luego, los animales se retiran del comedero para su tratamiento. Un tipo de tratamiento era inducir un TMJ artrítico. Para este modelo, las ratas se inyectan con el adyuvante completo de Freund (CFA) a las 08:00(es decir, al comienzo de la fase de luz) después de que las ratas se anestesian con isoflurano (5% de flujo).</li>
	<li>Inyecte 250 mg de CFA en 50 L bilateralmente en el espacio periarticular de cada ATM. Nota: en el ejemplo(Figura 2)se inyectaron 250 mg de CFA en 50 L en cada ATM, pero dosis tan bajas como 10 mg en volúmenes tan pequeños como 15 μl son efectivas durante períodos de tiempo más cortos52.</li>
	<li>Inyecte ratas control TMJ con 50 L de solución salina al 0,9%. Nota: todos los animales eran móviles dentro de 5 minutos o menos después de la inducción de la anestesia. En el caso de que se administrara una dosis menor de AFC en menor volumen, las ratas control recibirían este mismo volumen de solución salina.</li>
</ol>

No hay nada que revelar.

Los pacientes de TMJ con dolor orofacial reportan un aumento del dolor con un aumento del tiempo de masticación, de modo que, el ciclo de masticación se alarga cuanto más tiempo el individuo ha estado masticando45,53-56. Nuestro ensayo de comportamiento permite pruebas similares en ratas y ratones al medir la duración de la comida39. Un estudio inédito reciente sugirió que la prueba del filamento de von Frey tenía mayor sensibilidad que medidas de la duración de la comida, mostrando un cambio signif...

Se han utilizado modelos animales para estudiar el dolor y la nocicepción asociados con el daño orofacial y/o la inflamación1,2,pero la falta de modelos animales apropiados resulta en una comprensión incompleta de los mecanismos. Aunque los modelos actuales nos ayudan a comprender diversos mecanismos implicados en el dolor orofacial agudo y crónico, existen fortalezas y debilidades en estos modelos animales.
Muchos modelos miden las respuestas nociceptivas conductuales para duraciones cortas. El acicalamiento facial es una respuesta conductual conocida después de la constricción de los nervios faciales3. Otros estudios midieron el frotamiento facial con la proa ipsolateral o la parte posterior, así como, el desliceo de la cabeza después de administrar inyecciones de formol en la articulación temporomandibular (ATM) o el labio4-7. Las latencias de retirada de la cabeza es otro modelo para medir el comportamiento nociceptivo en el que se utiliza un medidor de analgesia de movimiento de cola modificado para cuantificar la respuesta nociceptiva (esdecir, la retirada de la cabeza) después de aplicar calor a la almohadilla vibrissae afeitada de una rata8. La actividad muscular digásttrica y masetera también se ha registrado como un correlato del dolor después de las inyecciones de glutamato en la ATM9. Otro estudio ha medido los cambios en los parámetros del sueño para evaluar las respuestas nociceptivas en ratas masculinas y femeninas con una ATM inflamada, estos parámetros incluyeron latencia del sueño, movimiento ocular rápido (REM), porcentaje de sueño no REM y porcentaje de sueño REM10. La mayoría de los modelos animales que miden las respuestas nociceptivas conductuales utilizan un marco de tiempo corto, es decir, minutos a horas por día11-14. Además, la mayoría de las pruebas con modelos animales ocurren durante la fase de luz y en un animal nocturno, como una rata, esto puede causar estrés que puede confundir los resultados nociceptivos15-18. Los ensayos anteriores miden la respuesta nociceptiva en diferentes condiciones orofaciales, pero por corta duración y, por lo tanto, solo se pueden usar para estudiar trastornos agudos. Un ensayo alternativo ha utilizado la expresión facial como medida de nocicepción de duración moderada, pero esta metodología puede ser subjetiva19.
Para evaluar la nocicepción orofacial persistente o crónica algunos han utilizado la aplicación de un filamento de von Frey en la superficie de la piel para evaluar la sensibilidad mecánica de animales sometidos a constricción nerviosa o inflamación de la ATM3,20. Liverman et al. 2009 midieron las respuestas de abstinencia utilizando monofilamentos graduados después de las inyecciones de CFA en el músculo masetero de ratas 21,22. 2008 inyectaron la ATM con CFA y luego durante 14 días cuantificaron comportamientos nociceptivos a la estimulación mecánica o de calor o frío aplicada sobre la región de la ATM. Desafortunadamente, estos ensayos de comportamiento nociceptivos implican restricción animal, que producen hormonas del estrés, aprendizaje o comportamientos alternativos que pueden interferir con los resultados medidos.
Los modelos para medir la nocicepción en los dientes utilizan el reflejo de apertura de la mandíbula, pero este método puede ser poco fiable23 o impreciso24. La actividad electromiográfica se ha utilizado para medir la nocicepción dental25,pero este método típicamente requiere que el animal esté inconsciente, aunque en un estudio se investigó la nocicepción dental en ratas que se movían libremente26. En 2008, Khan estudió la relación entre la nocicepción dental y la función masticatoria utilizando un medidor de tensión sensible27, pero este modelo de duración de la mordedura requiere restringir al animal de la actividad normal 28. La fuerza de mordida es una medida confiable del dolor de dientes en humanos, pero debido a que las ratas requieren entrenamiento y/o restricción para medir la fuerza de mordedura se introduce una fuente de estrés que puede producir hallazgos con importancia fisiológica cuestionable29-31
Algunas limitaciones de la restricción y el estrés se pueden superar mediante el uso de un diseño de operando para evaluar los comportamientos nociceptivos. Un modelo operante utiliza la evitación de una temperatura incómoda para evaluar y caracterizar la nocicepción orofacial32-35. Este modelo de recompensa-conflicto se basa en una recompensa de leche endulzada para inducir al roedor a posicionar su rostro voluntariamente contra una sonda térmica calentada o enfriada34,36. Sin embargo, la prueba requiere entrenamiento con animales, pero una fortaleza del ensayo es que los datos se recopilan de manera automatizada.
Otro modelo animal utilizó la disfunción de roedura inducida por la nocicepción como índice de nocicepción orofacial37. Sin embargo, el roedor está confinado a un tubo y su único escape es roer a través de una espiga para salir. Una ventaja de este modelo es que mide la función de la mandíbula después de una lesión de mandíbula aguda o crónica en ratones. Sin embargo, el roedor está confinado, lo que agrega un comportamiento competidor alternativo de confusión, es decir, escape, que sería estresante y, por lo tanto, podría influir en los resultados del ensayo de nocicepción.
La duración de la comida se ha utilizado para medir la nocicepción en animales con artritis de la ATM38-41,exposición a la pulpa dental42y daño muscular43. Un roedor que experimentó la nocicepción orofacial comieron más lentamente después de que el animal iniciara una comida. Los pacientes que experimentan dolor de la ATM también tardan más en masticar sus alimentos y la duración del ciclo se acorta cuando el dolor de la ATM disminuye44-46. Se espera que el alargamiento de la duración de las comidas cuando el dolor de la ATM está presente sea un "comportamiento de protección", definido operacionalmente como comportamiento nociceptivo47.
La duración de la comida mide la nocicepción de la ATM utilizando un método no invasivo durante un máximo de 19 días en ratas macho y hembra y 6 días (período más largo probado) en ratones machos y podría describirse como un marcador biológico de nocicepción38-41. En apoyo de que la duración de la comida mide respuestas nociceptivas, la nocicepción puede reducirse mediante una intervención farmacológica que hace que la duración de la comida del animal vuelva a la normalidad38,40,41. Esto también se confirmó cuando las neuronas nociceptivas fueron destruidas con capsaicina; después de la destrucción del nervio la duración de la comida de los animales no fue aumentada después de la inyección de CFA en el TMJ 40.
A continuación se muestra el protocolo sobre cómo obtener y analizar estadísticamente los datos de duración de las comidas.

<table><tbody><tr><td>Software para monitores de animales</td><td>Med Assoc. Inc</td><td>SOF-710</td><td>East Fairfield, VT</td></tr><tr><td>Pellets de precisión sin polvo, roedores, a base de granos&nbsp;</td><td>Bio-Serv</td><td>F0165</td><td>Pellets de 45 mg, 50,000/caja</td></tr><tr><td>Pellets de precisión sin polvo, roedores, a base de granos&nbsp;</td><td>Bio-Serv</td><td>FO163</td><td>20 mg pellets</td></tr><tr><td>Complete Freund's Adyuvant</td><td>Chondrex, Inc.</td><td>7001</td><td>Ningún registrador proporciona la concentración de 5 mg/ml. Puede usar CFA de otras fuentes, siempre y cuando el investigador use esta fuente de manera consistente</td></tr></tbody></table>.

duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores

Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents

Un alargamiento en duración de la comida se puede utilizar para medir un aumento en hiperalgesia mecánica orofacial que tiene semejanzas al comportamiento de guarda de seres humanos con dolor orofacial. Para medir la duración de la comida, las ratas desenfrenadas se mantienen continuamente en módulos de alimentación computarizados atenuados por sonido durante días o semanas para registrar el comportamiento de alimentación. Estas cámaras atenuadas por sonido están equipadas con dispensadores de pellets chow. El dispensador tiene un abrevadero de pellets con un fotohae colocado en la parte inferior del canal y cuando un roedor elimina un pellet del comedero, este haz ya no se bloquea, lo que indica a la computadora que deje caer otro pellet. La computadora registra la fecha y hora en que se tomaron los pellets del canal y a partir de estos datos el experimentador puede calcular los parámetros de la comida. Al calcular los parámetros de la comida, una comida se definió en base al trabajo anterior y se fijó en 10 min (en otras palabras, cuando el animal no come durante 10 min, que sería el final de la comida del animal) también el tamaño mínimo de la comida se estableció en 3 pellets. La duración de la comida, el número de comida, la ingesta de alimentos, el tamaño de la comida y el intervalo entre comidas pueden ser calculados por el software para cualquier período de tiempo que el operador desee. De los parámetros de alimentación que pueden ser calculados la duración de la comida se ha mostrado para ser un marcador biológico no invasor continuo del nociception orofacial en ratas y ratones masculinos y ratas femeninas. Las mediciones de la duración de las comidas son cuantitativas, no requieren entrenamiento ni manipulación animal, requieren participación cortical y no compiten con otros comportamientos inducidos experimentalmente. Estos factores distinguen este análisis de otros métodos operante o reflejos para registrar la nocicepción orofacial.

La duración de la comida es un correlato conductual del dolor orofacial y las mediciones de la duración de la comida se han aplicado a animales con artritis de la ATM(Figura 2)y caries dental(Figura 3). En un experimento, las ratas tenían artritis de TMJ después de administrar una alta dosis del magnesio 250 de CFA y este tratamiento indujo un aumento significativo en la duración de la comida por 19 días(cuadro 2). Una dosis más baja de CFA (magnesio 10) inyectado en cad...

Un alargamiento en duración de la comida representa comportamiento nociceptivo orofacial en roedores similares al comportamiento de guarda de seres humanos con dolor orofacial. Comer es un comportamiento que no requiere entrenamiento ni manipulación animal, requiere participación cortical y no compite con otros comportamientos inducidos experimentalmente, distinguiendo este ensayo de mediciones alternativas de reflejos u operandos.

Duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores

A lengthening in meal duration can be used to measure an increase in orofacial mechanical hyperalgesia having similarities to the guarding behavior of ...

El objetivo general de este procedimiento es determinar que las mediciones de la duración de las comidas son un correlato cuantitativo del dolor en la mandíbula y los dientes. Esto se logra primero colocando a las ratas en jaulas alimentadoras para obtener una medición basal de la duración de las comidas. Una vez obtenidas las mediciones basales, se inyecta un agente inductor del dolor en la articulación temporomandibular o en la articulación de la rodilla como control. Después de la inyección, el animal se devuelve a la jaula alimentadora y se observa el comportamiento alimentario hasta que regresa a niveles basales. Finalmente, se recopilan y analizan los datos para demostrar que los animales con dolor mandibular tienen duraciones de comida más largas. Existen muchas ventajas al utilizar la duración de las comidas y los patrones alimentarios para analizar el dolor en modelos roedores, pero consideramos que dos de las principales ventajas de este modelo frente a otros tipos de modelos son que no es necesario restringir a los animales, ni tampoco es necesario entrenar al animal.Hace algunos años, observamos que no existía un buen método para medir el dolor orofacial en un modelo animal. Esto nos llevó a explorar la posibilidad de que el análisis del patrón de alimentación pudiera utilizarse para medir el dolor orofacial. Esto condujo al desarrollo del modelo que hemos utilizado actualmente para medir el dolor orofacial.Los estudios de duración de las comidas se realizan en cámaras con atenuación acústica equipadas con dispensadores de alimento activados por computadora que añaden alimento para roedores al comedero, compuesto por gránulos de 45 miligramos. Estos gránulos se dispensan en el canal inferior, que está equipado con un haz de luz fotoeléctrica. Sobre la abertura del haz de luz fotoeléctrica se coloca una cubeta de vidrio para evitar que partículas obstruyan su trayectoria.Una vez que una rata retira la pastilla del comedero, se restablece el haz de luz fotoeléctrico y la computadora recibe la señal para soltar otra pastilla. De este modo, siempre hay disponible una pastilla sin esfuerzo adicional por parte del animal. Después de llenar la botella de agua, coloque papel absorbente en la bandeja de desechos situada debajo.Para comenzar, cargue el software del monitor de animales y seleccione configuración en el menú desplegable para configurar las unidades dispensadoras. Desactive la casilla de entrada de pastilla dispensada para registrar cuándo la pastilla es retirada del comedero en lugar de cuándo es dispensada. A continuación, active la casilla de nombrado automático de archivos para que los archivos sean nombrados automáticamente.Después de seleccionar la opción de experimento en el menú desplegable de edición, introduzca el nombre del archivo en la nueva ventana para asegurar que los datos se recojan correctamente. Ingrese un valor que supere el tiempo total del experimento en el cuadro de duración del experimento en días. A continuación, establezca el número de horas en un día en 24 para el período de alimentación y los criterios.Introduzca un valor de 10 minutos. Introduzca 45 en el cuadro titulado tamaño del pellet en miligramos. En la sección de fase de la ventana del experimento, introduzca el término día en el campo de nombre y en el campo de número de horas.Tipo 24 como ejemplo. Bajo el encabezado de fase diurna, ingrese la palabra luz en el campo de nombre e ingrese 60 en el campo de porcentaje. Repita este procedimiento ingresando oscuro en el campo de nombre con un valor porcentual de 40.A continuación, seleccione el botón marcar todas las casillas como esta. Guarde esta información y luego pulse aceptar. Cuando aparezca la pantalla de casillas de inicio, seleccione los alimentadores que desea activar y pulse aceptar.A continuación, aparecerán las ventanas de tiempo de ejecución del monitor de animales con los datos del patrón de alimentación. Después de observar el comportamiento alimentario basal, retire al animal del comedero para inducir dolor por artritis de la articulación temporomandibular. Una vez anestesiado, localice la articulación temporomandibular e inyecte adyuvante completo de Freund en el espacio articular.Repita este procedimiento en el otro lado. Las ratas de control se inyectan con 50 microlitros de solución salina al 0,9 %. Otro grupo de animales se inyecta con CFA en la articulación de la rodilla.Después de la inyección, devuelva los animales a la unidad alimentadora tan pronto como se recuperen de la anestesia. Durante el ensayo de duración de la comida, supervise el comportamiento alimentario de las ratas artríticas hasta que la duración de su comida regrese a los niveles basales. Esto puede tardar entre uno y 19 días, dependiendo de la dosis de CFA.La configuración del software establecida previamente registrará el número de pastillas dispensadas durante un período de tiempo específico en el ensayo. Enjuague y reemplace las botellas de agua diariamente y agregue alimento al depósito del comedero. Cuando sea necesario, sustituya el papel absorbente diariamente para obtener los mejores resultados.Sople el polvo del canal y las partes móviles del alimentador utilizando aire a presión y limpie diariamente la cubeta. Limpie la trayectoria del haz de luz si se observa alguna obstrucción. Al finalizar el estudio, retire y lave todos los componentes de la jaula.Los archivos se generan diariamente y se abren automáticamente para recuperar datos del patrón alimenticio, como la ingesta de alimento, el número de comidas o la duración de las comidas. Alternativamente, los patrones alimenticios pueden calcularse utilizando software propietario, dependiendo de las necesidades del investigador en este experimento. Las ratas con artritis inducida por CFA en la articulación temporomandibular mostraron un aumento significativo en la duración de las comidas durante 19 días en comparación con los animales inyectados con solución salina o aquellos que recibieron inyecciones de CFA en la rodilla.Este método puede aplicarse a otras formas de dolor oral, como se muestra aquí. La duración de la comida también aumentó en ratas que experimentaban dolor tras la exposición de la pulpa dental. Al utilizar este procedimiento, hay dos aspectos que probablemente necesitará solucionar a diario.Cuando se utilizan ratas dolly spray de aproximadamente 300 gramos, deberían consumir entre 300 y 600 gránulos al día. Si consumen menos de 300 gránulos, probablemente haya un problema con el sensor ubicado en la parte superior de la unidad alimentadora, el cual simplemente necesita limpiarse. Si consumen más de 600 gránulos, el problema probablemente sea el sensor del comedero, que también requeriría limpieza.Entonces, estas son solo dos cosas que debe tener en cuenta al realizar este ensayo. El modelo de análisis del patrón de alimentación presenta varias ventajas sobre otros modelos al estudiar el dolor orofacial. El modelo implica vías corticales y, por lo tanto, no mide simplemente mecanismos reflejos.El modelo se puede utilizar las 24 horas del día y no provoca comportamientos alternativos. Este modelo se convierte entonces en una herramienta muy poderosa para el estudio del dolor orofacial.

meal-duration-as-measure-orofacial-nociceptive-responses

Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Este video muestra la inducción de dolor neuropático orofacial en un modelo de rata mediante la ligadura del nervio infraorbitario. Esto da como resultado daño a los nervios e inflamación, causando una señalización de dolor anormal e imitando las condiciones de dolor crónico, que se pueden usar para estudiar el ensayo de dolor orofacial.

Inducción de dolor neuropático orofacial en un modelo de rata a través de ligaduras de nervios infraorbitarios

Se presenta un sistema operante fácil de usar y de alto rendimiento para la evaluación de los comportamientos de dolor en roedores despierto, consciente. El Dispositivo de Evaluación del Dolor Orofacial (OPAD) puede evaluar el dolor a través de un paradigma de recompensa / conflicto proporcionando así una forma más humana de las pruebas. Este protocolo dará más datos clínicos relevantes y de la traducción de los roedores.

El uso del Dispositivo de Evaluación Dolor Orofacial operante (OPAD) para medir los cambios en el comportamiento nociceptivo

Se describe un protocolo para examinar el desarrollo de la hiperalgesia y la tolerancia en ratones inducida por opioides. Sobre la base de la medición de las respuestas nociceptivas térmicas y mecánicas de los animales no tratados previamente y tratados con morfina, que permite cuantificar el aumento en la sensibilidad al dolor (hiperalgesia) y disminuir en la analgesia (tolerancia) asociada con la administración de opiáceos crónica.

Evaluación de la hiperalgesia inducida por la morfina y analgésicos Tolerancia en ratones utilizando térmicas y mecánicas Modalidades nociceptivos

En este trabajo ofrecemos detalles de los métodos de producción y control de calidad de una proteína de fusión recombinante de IL4-10. También mostramos cómo probar la efectividad de esta proteína para resolver el dolor en un modelo murino de dolor inflamatorio.

Desarrollo de proteínas recombinantes para el tratamiento de dolor crónico

Aquí se proporciona un protocolo que detalla los pasos para establecer un modelo animal de dolor crónico post-isquemia (CPIP). Este es un modelo bien reconocido que imita el síndrome de dolor regional complejo humano tipo I. Se evalúan más a fondo las hipersensibilidades mecánicas y térmicas, así como los comportamientos nocifensos inducidos por la capsaicina observados en el modelo de rata CPIP.

Modelo de dolor crónico post-ischemia para el síndrome de dolor regional complejo tipo I en ratas

El síntoma más notable de la migraña es el dolor de cabeza severo, y se plantea la hipótesis de que esto está mediado por neuronas sensoriales que inervan las meninges. Aquí, presentamos un método para aplicar localmente sustancias a la duramadre de una manera mínimamente invasiva mientras se utiliza la hipersensibilidad facial como resultado.

Estimulación dural y pruebas periorbitarias de von Frey en ratones como modelo preclínico de dolor de cabeza

El ensayo mecánico de evitación de conflictos se utiliza como una lectura no reflexiva de la sensibilidad al dolor en ratones que se puede utilizar para comprender mejor las respuestas afectivo-motivacionales en una variedad de modelos de dolor de ratón.

Ensayo mecánico de evitación de conflictos para medir el comportamiento del dolor en ratones

Este protocolo describe la evaluación de la hipersensibilidad mecánica en un modelo de rata de dolor orofacial neuropático utilizando un dispositivo de evaluación del dolor orofacial basado en operantes.

Evaluación de la hipersensibilidad mecánica inducida por lesión nerviosa en ratas mediante un ensayo de dolor operante orofacial

La lesión crónica por constricción del nervio infraorbitario distal en ratones induce cambios en el comportamiento espontáneo (aumento de la actividad de acicalamiento facial) y el comportamiento nocifensivo en respuesta a la estimulación táctil (hiperreactividad a la estimulación del cabello de von Frey) que son signos de dolor continuo y alodinia, y sirven como modelo para el dolor neuropático del trigémino.

Lesión crónica por constricción del nervio infraorbitario distal (DIoN-CCI) en ratones para estudiar el dolor neuropático del trigémino

Este protocolo describe cómo la medición de la fuerza de mordida y el umbral de retirada de la cabeza puede capturar el comportamiento del dolor en el dolor de la articulación temporomandibular (ATM) inflamatorio inducido por el adyuvante completo de Freund (CFA).

Medición del dolor en la articulación temporomandibular mediante ensayos de fuerza de mordida y filamentos de von Frey en ratones

Los avances recientes en la investigación del dolor destacan el potencial de la fotoneuromodulación utilizando diodos emisores de luz verde (GLED) como tratamiento no farmacológico. GLED modula las vías del dolor, ofreciendo un alivio eficaz del dolor. Este artículo tiene como objetivo estandarizar y refinar los protocolos de exposición a GLED, mejorando la consistencia entre estudios y avanzando en la aplicación clínica de esta terapia.

Optimización de las técnicas de fotoneuromodulación para evaluar el papel de los diodos emisores de luz verde en el tratamiento del dolor

Aprende a medir la duración de la comida como marcador cuantitativo del dolor orofacial en roedores. Este método no invasivo evalúa la nocicepción mediante módulos de alimentación computarizados sin restricción animal.

Duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores

Explorar más videos