Name: Un ensayo de una sola mosca por el comportamiento de forrajeo en Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Aprende a cuantificar cambios conductuales por privación alimentaria en Drosophila melanogaster mediante un ensayo automatizado de búsqueda de alimento. Este método permite estudiar la relación entre circuitos neuronales y respuestas olfativas.

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Este trabajo fue apoyado por becas de investigación a JWW del Instituto Nacional de Salud (R01DK092640) y la Fundación Nacional de Ciencia (0.920.668).

1. Fly Collection y el hambre <ol><li> Posterior a las moscas experimentales bajo condiciones de temperatura y humedad controladas (por ejemplo, 21 ° C, humedad relativa 50-60%) en un 12 hr luz / oscuridad ciclo. </li><li> Recoger las moscas hembra en el día de la eclosión y colocarlos, junto con 4-5 machos, en nuevos frascos de comida (máximo 30 por vial). Edad vuela 2-5 días. </li><li> Preparar las cámaras de hambre mosca. <ol><li> Empuje un único tejido (4,8 x 8,4 pulgadas) hasta el fondo de un frasco de plástico vacía. Completamente empape el tejido con agua destilada. Utilice un objeto para empujar hacia abajo en el tejido y apretar suavemente el exceso de agua. </li><li> Invierta el frasco para desechar el exceso de agua. Debe haber suficiente agua para mantener las moscas hidratados y la cámara de la inanición húmeda, pero no lo suficiente como para ahogar a las moscas. </li></ol></li><li> Transfiera las moscas del frasco de comida en una cámara de la inanición y conecte el vial sobre 18-24 horas antes de que comience el experimento. Guarde elviales bajo condiciones de temperatura y humedad controladas durante la noche hasta el experimento comienza el día siguiente. </li></ol> 2. Preparación del olor del alimento <ol><li> Preparar una solución de agarosa al 1% mediante la adición de 0,1 g de agarosa de baja temperatura de fusión a 10 ml de agua destilada en un matraz de vidrio. Calentar la solución de agarosa en el microondas justo hasta que comience a hervir, pero mucho antes de que hierva de nuevo. <ol><li> Detener el microondas y agitar el frasco una vez. Repita este paso dos veces más hasta que la agarosa se haya disuelto completamente. Mantenga la solución de agarosa en estado líquido, manteniendo el frasco caliente sobre una placa caliente a 50 ° C. </li></ol></li><li> Añadir 990 l de la solución de agarosa al 1% y 10 l de vinagre de sidra de manzana a un tubo Eppendorf de 1,5 ml para obtener una solución de vinagre de sidra de manzana 1%. Vortex la solución hasta que se mezcle y coloque en una incubadora de baño seco ajustado a 50 ° C. </li></ol> 3. Sala de pruebas y configuración Cámara Comportamiento <ol><li&gt; Establecer la sala de pruebas a las condiciones deseadas (por ejemplo, temperatura y humedad). </li><li> Encienda el panel de LED (660 nm). </li><li> Enjuague las cribas y placas de ensayo con agua caliente y calentar en un horno de secado hasta que toda la humedad se haya evaporado. Enfriar los tamices y los platos a la temperatura ambiente antes de la prueba los experimentos iniciales. </li><li> Coloque un plato poco profundo en la parte superior de la placa difusora y llenarlo con agua para aumentar la humedad local y para enmascarar el agua de la gota de agarosa. </li><li> Colocar los tamices en el plato de agua. </li></ol> 4. Vuela Cargando en las placas de ensayo Diagramas con las especificaciones de las placas de prueba se pueden encontrar en la sección Archivos Suplementarios. La placa de la prueba está hecha de acrílico transparente y consta de 6 escenarios de prueba. Un sencillo control deslizante contiene cámaras de retención que permiten la carga de la mosca, la contención temporal, y la liberación simultánea de 6 moscas en sus respectivas cámaras enel inicio del experimento. Cruz filar grabadas en el centro de cada escenario en la placa indican dónde odorantes deben pipetearse. <ol><li> Inserte los controles deslizantes en la placa de pruebas de acrílico. </li><li> Deslice suavemente el aspirador en el vial más allá del tapón de algodón y permiten unos 6 moscas a pie hasta el aspirator.it es fundamental para ser lo más suave posible en el manejo de ellos. Uno puede tomar ventaja de la conducta mosca fototácticas para inducir moscas a arrastrarse hacia el aspirador al señalar la apertura vial hacia una fuente de luz tenue. Si es necesario, también se puede aplicar una suave succión para aspirar aproximadamente 6 moscas hembras. </li><li> Inserte la punta del aspirador en el primer agujero de la placa de la prueba. Permitir una sola mosca pase a la celda de detención y suavemente avanzar el cursor hacia adelante para cargar una mosca en el siguiente hoyo. Continúe hasta moscas ocupan los 6 celdas de detención de la placa. </li><li> Pipetear 5 l de solución de agarosa de sidra de manzana vinagre 1% directamente sobre el centro de la CRoss-pelos en la cara interior de la placa de la prueba. </li></ol> 5. Colocación de la placa de pruebas <ol><li> Para centrar la plancha de prueba, abra el archivo llamado &quot;Posicionamiento Tool.vi.&quot; &quot;LabVIEW VI para la herramienta de posicionamiento. vi se pueden encontrar en la sección Archivos Suplementarios. Ejecute el archivo haciendo clic en la flecha blanca en la esquina superior izquierda de la pantalla. </li><li> Coloque la placa de prueba en la parte superior del tamiz de manera que la abertura Arena enfrenta el piso de tamiz y el objetivo es el olor en el techo de la placa. Alinear el punto de mira grabadas en parte posterior de la plancha de prueba con la mira en la pantalla del monitor. </li><li> Cuando la alineación se ha completado, abortar la ejecución haciendo clic en el punto rojo situado cerca de la esquina superior izquierda de la pantalla. </li></ol> 6. Registre el Fly Posición durante el experimento <ol><li> Para realizar un seguimiento y registrar las coordenadas de la marcha durante cada ensayo de búsqueda de alimentos, abra el archivo de software de adquisición &quot;Fly seguimiento -. Seis Zones.vi &quot;LabVIEW VIs para&quot; Tracking Fly - Seis Zones.vi &quot;se pueden encontrar en la sección Archivos Suplementarios Ejecute el archivo haciendo clic en la flecha blanca en la esquina superior izquierda de la pantalla. . </li><li> Asigne un nombre al archivo y haga clic en &quot;Aceptar&quot;. </li><li> Avanzar en los controles deslizantes en las cámaras de prueba para liberar las moscas en las arenas de prueba. Tenga cuidado de no mover las cámaras de prueba, ya que esto dará lugar a la alineación incorrecta con coordenadas de software de análisis. </li><li> Haga clic en &quot;Start&quot; (comienza la grabación) y asegúrese de que la única fuente de luz en la cámara de pruebas es el panel LED de 660 nm. </li><li> Una vez finalizada la prueba, retire el tamiz y la cámara de comportamiento. Levante la placa de la prueba del tamiz y retire las moscas al sumergir la placa de hielo. Limpie suavemente la placa con agua caliente y eliminar los residuos de agarosa. Colocar las placas de ensayo en un horno de secado para eliminar la humedad. </li><li> Ventilar la zona de pruebas mediante la activación de un small ventilador durante aproximadamente 2 min. Apague el ventilador y cargar el siguiente grupo de moscas en la placa de la prueba siguiente. </li></ol> 7. Análisis de datos mediante software por pedido &quot;Análisis de Datos para Fly seguimiento en seis zonas&quot; se puede encontrar en la sección Archivos Suplementarios. Durante la adquisición de datos, la posición de la mosca individuo registros de software de adquisición de coordenadas de cada punto en un archivo de texto en tiempo. Una cámara digital único situado por encima de las placas de prueba adquiere imágenes a una velocidad de 0,5 Hz. El programa de software de análisis de &quot;Análisis de datos para Fly Tracking-seis zonas&quot; extrae la información de ese archivo de texto que a) calcular la velocidad media, b) determinar el punto de tiempo en el que una mosca se encuentra con éxito la fuente de olor, y c) crear ventanas gráficas que permitirá al usuario ver: la ubicación, la distancia de la mosca vuela desde la fuente de olor con el tiempo y la velocidad media mosca con el tiempo. También da formato a los datos para facilitar la exportación en un spreprograma adsheet. En esta macro, la búsqueda de latencia alimentaria se define como el punto en el tiempo que vuela pasar por lo menos 5 segundos dentro de un radio de 5 mm del centro de la arena. <ol><li> Abra el archivo de software de análisis de &quot;Análisis de datos para el seguimiento de la mosca - seis zonas&quot;. Bajo la pestaña &quot;Windows&quot;, haga clic en &quot;Crear nueva tabla.&quot; Repita este paso hasta que se hayan creado seis mesas. </li><li> Bajo la pestaña &quot;Macros&quot;, haga clic en &quot;Foodfinding.&quot; Un Panel principal debería aparecer con las siguientes opciones: Open Data Archivo sin formato para el diseño, Open Data Archivo sin formato de archivo de datos; Fly Location; Distancia, velocidad, diseño, FormatDataFile. </li><li> Para ver los datos en bruto sin anexar valores a un archivo de texto, haga clic en &quot;Abrir archivo de datos sin procesar para el diseño.&quot; Busque y seleccione el archivo de datos experimental en la ventana del navegador que aparece. Haga clic en &quot;Abrir&quot;. </li><li> Haga clic en &quot;Fly Location&quot; para ver la ubicación de cada marcha en cada uno de los seis escenarios (seis parcelas XY representan cada mosca &#39;s posición con el tiempo debería aparecer en la pantalla). </li><li> Haga clic en &quot;Distance&quot; para ver la distancia de cada mosca de la fuente de olor (seis parcelas que representan la distancia a la mosca de la fuente de olor con el tiempo deben aparecer en la pantalla). La línea horizontal en y = 5 mm indica el umbral a partir del cual se considera que la marcha que se encuentra en el origen de los alimentos. </li><li> Haga clic en &quot;Speed&quot; para ver la velocidad media de cada mosca durante el ensayo (seis parcelas que representan la velocidad de la marcha con el tiempo deben aparecer en la pantalla). </li><li> Haga clic en &quot;Formato&quot; para visualizar una presentación con todas las moscas ubicación, distancia, velocidad y gráficos, además de la velocidad media (durante los primeros 50 segundos) y la latencia de encontrar la fuente de olor para cada vuelo (Figura 1). Para ver correctamente el diseño, puede ser necesario ajustar los márgenes. Para hacer esto, primero haga clic en la ventana de diseño. Bajo la pestaña &quot;Archivo&quot;, haga clic en &quot;Configuración de página para el diseño.&quot; Cambiar los márgenes de0.2 pulgadas y haga clic en &quot;Aceptar&quot;. Inmediatamente a la izquierda de cada parcela lugar es una pequeña mesa con los títulos &quot;Speed&quot; y &quot;latencia&quot;. Los valores introducidos en cada epígrafe indican la velocidad media en mm / seg y la latencia de la búsqueda de alimentos en cuestión de segundos. Entradas en blanco bajo Latencia indican la marcha no pudo localizar la fuente del olor. Búsqueda latencia alimentaria se define como el punto de tiempo en el que las moscas pasaron al menos 5 segundos dentro de un radio de 5 mm desde el centro de la cámara. </li><li> Para imprimir una presentación, haga clic en el área de disposición (layout actualizaciones de archivo actual). Haga clic en &quot;Archivo&quot; y luego haga clic en &quot;Diseño de impresión&quot;. </li><li> Para ver el siguiente archivo, simplemente haga clic en &quot;Abrir archivo de datos sin procesar para el diseño.&quot; Haga clic en el siguiente archivo de datos brutos que desea ver y haga clic en &quot;Aceptar&quot;. Haga clic en la ventana de diseño para actualizar la ventana con el nuevo archivo de datos. </li><li> Los ajustes se pueden guardar en un archivo de experimento para su uso posterior. </li></ol> 8. Exportar datos deEl software de análisis de datos a una hoja de cálculo <ol><li> Para exportar datos de velocidad y latencia para cada archivo, haga clic en &quot;Open Data Archivo sin formato de archivo de datos.&quot; Seleccione un archivo de datos experimentales y haga clic en &quot;Abrir&quot;. Aparecerá una nueva ventana del navegador. </li><li> En la nueva ventana del explorador, haga clic en &quot;Nuevo&quot; y luego haga clic en &quot;Documento de texto&quot;. Nombre del nuevo documento de texto. Seleccione el archivo de texto recién nombrado y haga clic en &quot;Abrir&quot;. Esto almacena los datos del archivo de datos brutos en el archivo de texto. </li><li> Para exportar datos desde otro archivo, haga clic en &quot;Abrir archivo de datos brutos para archivo de datos.&quot; Haga clic en otro archivo y haga clic en &quot;Abrir&quot;. Seleccione el archivo de texto del paso 8.2). Continúe este proceso para los archivos de datos restantes que desea exportar. </li><li> Una vez que todos los archivos de datos deseados se han añadido al archivo de texto, haga clic en &quot;Formato de archivo de datos.&quot; Seleccione el documento de texto se utiliza para almacenar los datos de los pasos anteriores y haga clic en &quot;Open&quot; (un nuevo window se abrirá de forma automática). </li><li> Cree un nuevo documento de texto en la ventana, asigne un nombre al archivo y haga clic en &quot;Guardar&quot;. Esto crea un archivo de texto que contiene el nombre del archivo, la velocidad media, y la latencia para cada vuelan y se pueden importar en un programa de hoja de cálculo. </li><li> Parcelas acumulativas se construyen a partir de datos sobre el número total de moscas alcanzar el objetivo olor del alimento como función del tiempo (Figura 3). </li><li> Los conjuntos de datos experimentales se analizan para la significación estadística utilizando una prueba z para proporciones. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

Los autores declaran no tener ningún interés financiero en competencia.

En este protocolo, se describe un procedimiento paso a paso para el ensayo de comportamiento de búsqueda de alimento. Además de los olores relacionados con los alimentos, también se puede adaptar para el estudio de la capacidad de la mosca para localizar otros objetos de olor. Por ejemplo, se puede aplicar hacia el estudio de la yerba comportamiento localización en las moscas macho 3 Hay varias consideraciones adicionales para este protocolo que vamos a hablar aquí con respecto a este procedimiento.: <p c...

Estados de promover el hambre dos tipos de comportamientos del apetito: búsqueda de alimentos y consumo de alimentos 1. Este ensayo de comportamiento simple es útil para el estudio de los comportamientos asociados con la búsqueda de alimento quimiotácticos 2,3. En concreto, hace un seguimiento de la posición marcha, la velocidad al caminar y la latencia para localizar un blanco de olor de los alimentos. Latencia de hallazgo de alimentos sirve como métrica para medir los cambios en la sensibilidad del sistema de detección de olor de la mosca aguas abajo de los cambios en su estado de apetencia interna. Una versión manual de este ensayo se utilizó previamente para mostrar la señalización del receptor de GABA-B es importante para el comportamiento de olor localización en moscas adultas 3. La actual versión automatizada de la prueba fue fundamental en el estudio de cómo corto neuropéptido F (sNPF) Señalización remodela el mapa olfativa en Drosophila y las influencias apetitiva comportamientos 2. La prueba se realiza en una habitación oscura, temperatura y humedad controladas. Digitalcámaras de vídeo que figuran por encima de las placas de prueba de acrílico claras seguimiento moscas retroiluminada por 660 nm de la iluminación LED. Información de la cámara es procesada en tiempo real por un ordenador colocado junto a la zona de pruebas. Utilizamos el software de adquisición de datos para registrar y guardar las coordenadas de las posiciones de la mosca durante el periodo de prueba. En este paradigma, el sujeto se libera en una arena que contiene un olor del alimento en el centro; el objeto olor crea un olor gradiente de alimentos dentro de la arena que induce el comportamiento de búsqueda de comida en la mosca. Un protocolo similar de búsqueda de olores se ha aplicado hacia el estudio de chemosensation en solo larvas de Drosophila 7. Mientras que otros ensayos de comportamiento como el de cuatro campos olfatómetro 4,5 o el t-laberinto 6 evalúan olor de aversión o atracción comportamientos, este paradigma es el más adecuado para evaluar la sensibilidad y la quimiotaxis comportamientos olfativas. Varias ventajas clave acompañan esta assaY. En primer lugar, permite la adquisición rápida de grandes conjuntos de datos, debido a la recolección y análisis de datos son en su mayoría automatizado. En segundo lugar, este ensayo aísla y mide el comportamiento de las moscas individuales, eliminando así las señales sociales olfativos que pueden influir en su comportamiento. En tercer lugar, la sencillez del protocolo y el diseño experimental sencillo hacer el ensayo eficaz y fácil de enseñar a otros. Además, este ensayo puede ser utilizada para explorar aún más circuitos neurales que subyacen el comportamiento de búsqueda de alimentos mediante la combinación con la caja de herramientas genética extensa disposición de Drosophila melanogaster 8. Expresión dirigida de transgenes que el silencio o excitar las neuronas se pueden lograr con herramientas como el sistema GAL4-UAS, así como la ts1 UAS-shibire, UAS-tétanos-toxina, y UAS-TRPA1 (B) transgenes 9-12.

<table><tbody><tr><td>Espectro</td><td></td> <td>de vinagre de sidra de manzana</td> Agarosa <td>disponible comercialmente</td></tr><tr><td>, Tipo VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td><td>agarosa de baja temperatura de gelificación</td></tr><tr>Placa <td></td><td>de</td><td>prueba acrílica</td> La <td>placa personalizada contiene 6 arenas. Cada arena tiene 60 mm de diámetro y 6 mm de altura. Consulte los diagramas de placas de prueba para conocer las medidas específicas.</td></tr><tr><td>Plataforma LabVIEW V.8.5</td><td>National Instruments</td><td>776670-09</td><td>para programas: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi NOTA: "time.vi transcurrido", "tiempo en file.vi" y "detect.vi de dos objetos" se incluyen subrutinas que deben estar disponibles para que se ejecute el programa principal de adquisición de datos "FlyTracking--Six zones.vi".</td></tr><tr><td>LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Software de Adquisición 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>plataforma para macro: Análisis de datos para el seguimiento de moscas--Seis zonas</td></tr><tr><td>Basler scA1390-17fm</td> National <td>Instruments</td><td>779980-01</td><td>Cámara digital NOTA: controlador para cámara disponible en Baslerweb.com</td></tr><tr><td>Lente de 8 mm</td><td>National Instruments</td><td>780024-01</td><td>Lente para cámara digital Basler</td></tr><tr><td>Placa difusora de vidrio esmerilado</td><td>Edmund Optics</td><td>personalizado</td><td>Difumina la luz, 25 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>EE. UU. Std. No. 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>Tamiz con apertura nominal de 150 &mu; m</td></tr><tr><td colspan="4">Opción de iluminación Retroiluminación > 1</strongLED</td></tr> <tr><td>20 cm (20 cm x 20 cm)</td><td>Spectra West</td><td>BL47192</td><td>una opción de iluminación más sencilla pero más cara.</td></tr><tr><td>Fuente de alimentación para retroiluminación LED</td><td>Spectra West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Lighting Opción de 2</td></tr><tr><td>660 nm LEDs</td><td>Superbrightleds</td><td>RL5R1330</td><td>Longitud de onda 660 nm (aproximadamente 7 x 7 LED array para un panel de 14,7 x 9,75 pulgadas)</td></tr><tr><td>Fuente de alimentación de CC lineal</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D Fuente de</td><td>alimentación para panel LED</td></tr><tr><td>Placa de pruebas sin soldadura</td><td>Digikey</td><td>922354-ND Placa de</td><td>pruebas para LEDs</td></tr></tbody></table>

un ensayo de una sola mosca por el comportamiento de forrajeo en drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Para muchos animales, el hambre promueve cambios en el sistema olfativo de una manera que facilita la búsqueda de las fuentes de alimentos apropiados. En este artículo de vídeo, se describe un ensayo automatizado para medir el efecto del hambre o la saciedad en el comportamiento de búsqueda de comida dependiente olfativo en la mosca adulta fruta Drosophila melanogaster. En una caja hermética a la luz iluminada por la luz roja que es invisible para moscas de la fruta, una cámara vinculada al software de adquisición de datos personalizadas controla la posición de las seis moscas simultáneamente. Se limita Cada mosca caminar en arenas individuales que contienen un olor de comida en el centro. Las arenas de prueba descansan sobre un suelo poroso que sirve para evitar la acumulación de olores. Latencia para localizar la fuente de olor, una medida que refleja la sensibilidad olfativa en diferentes estados fisiológicos, se determina mediante análisis de software. Aquí, vamos a discutir la mecánica críticos de la gestión de este paradigma conductual y cubrimos cuestiones específicas relativas a loadi moscang, la contaminación de olores, la temperatura de ensayo, la calidad de los datos, y el análisis estadístico.

El software de análisis de datos y el diseño, un ejemplo de que se puede ver en la Figura 1, se utilizan para evaluar el rendimiento de cada mosca durante su prueba de 10 min de acuerdo con un conjunto de criterios de análisis. Los siguientes criterios se utilizan para determinar si los datos de cada una mosca se utilizarán para el análisis de datos y están diseñados para eliminar esas moscas que son incapaces de realizar la tarea de búsqueda de los alimentos debido a una lesión, enfermedad, estrés o fa...

En este artículo de vídeo, se describe un ensayo automatizado para medir el efecto del hambre o la saciedad en el comportamiento de búsqueda de comida dependiente olfativo en la mosca adulta fruta Drosophila melanogaster.

Un ensayo de una sola mosca por el comportamiento de forrajeo en Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar los cambios de comportamiento desencadenados por la privación de alimentos en la mosca adulta Salala Melanogaster. Esto se logra primero matando de hambre a las moscas durante 18 a 24 horas. El segundo paso es cargar moscas individuales en cámaras de comportamiento, cada una de las cuales contiene una fuente de olor atractiva en su centro.A continuación, un sistema informático con una cámara digital rastrea la posición de cada vuelo a lo largo del tiempo y los registra. Sus coordenadas para su posterior análisis de datos. El paso final es determinar la latencia de cada mosca para llegar a la fuente de olor utilizando un software personalizado.En última instancia, este ensayo de comportamiento de búsqueda de alimentos de alto rendimiento se puede utilizar para estudiar la relación entre la función del circuito neuronal y las respuestas conductuales. La principal ventaja de este ensayo sobre el método existente, al igual que los compañeros de equipo, es que cuantifica el comportamiento quimiotáctico en moscas individuales. Este método puede ayudar a responder preguntas en neurobiología, como qué circuitos neurológicos son importantes para el comportamiento quimiotáctico y cómo estos circuitos neurológicos son moderados por el estado fisiológico interno del animal.El objetivo de este método es obtener grandes conjuntos de datos de comportamiento en poco tiempo. Aunque este método nos ha dado información sobre el comportamiento de búsqueda de alimento, también se puede utilizar para estudiar otros comportamientos, como la localización de alimentos. La demostración visual de este método es fundamental.El manejo adecuado de las moscas y la ejecución del software informático son esenciales para el éxito de este experimento. Por lo general, las personas nuevas en este método pueden tener un poco de dificultad al principio porque se necesita algo de tiempo y paciencia para aprender a manejar las moscas con suavidad, lo que demuestra que el procedimiento será solo para la aguja. Póngase en contacto con un técnico de mi laboratorio antes de la recolección de moscas.Cría las moscas experimentales en condiciones controladas de temperatura y humedad en un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas. El día de la explosión de la EEC, anestesiar las moscas bajo dióxido de carbono antes de sexarlas bajo un microscopio. Se pueden utilizar varios criterios básicos para diferenciar entre hombres y mujeres.Los machos tienen un parche de cerdas negras en sus cuatro patas llamadas crestas sexuales que las hembras no tienen. Además, la punta del abdomen del macho está cubierta por una cutícula oscura y muestra genitales que no se ven en las hembras, recoja moscas hembras y colóquelas junto con cuatro o cinco machos de ojos blancos en nuevas limas de alimento con un máximo de 30 moscas por vial de edad. Las moscas durante dos a cinco días preparan las cámaras para la inanición de moscas empujando primero un solo pañuelo hasta el fondo de un frasco de plástico vacío, empapando completamente el tejido con agua destilada.A continuación, utilice un objeto para empujar el pañuelo y exprima suavemente el exceso de agua. Invierta el vial para desechar el agua sobrante. Debe haber suficiente agua para mantener a las moscas hidratadas y la cámara de inanición húmeda, pero no lo suficiente como para ahogar a las moscas.Aproximadamente de 18 a 24 horas antes de que comience el experimento, transfiera las moscas del frasco de comida a una cámara de inanición y tape el vial. Almacene los viales en condiciones controladas de temperatura y humedad durante la noche hasta que comience el experimento. Prepare una solución agro al 1% agregando 100 miligramos de aros a baja temperatura de fusión a 10 mililitros de agua destilada.En un frasco de vidrio. Caliente la solución agrícola en un microondas hasta que comience a hervir, pero antes de que hierva, detenga el microondas y agite el matraz una vez. Repite este paso dos veces más hasta que el aros se haya disuelto por completo.Mantenga la solución de Aros en estado líquido manteniendo el matraz caliente en una placa caliente. Ajustado a 50 grados centígrados, agregue 990 microlitros de la solución de aro al 1% y 10 microlitros de vinagre de sidra de manzana a un tubo de radiogoniometría invertido de 1,5 mililitros. Para hacer una solución de vinagre de sidra de manzana al 1%, agite la solución hasta que se mezcle antes de colocarla en una incubadora de baño seco configurada a 50 grados centígrados, configure la sala de pruebas en las condiciones deseadas, como temperatura y humedad.Encienda el panel LED de 660 nanómetros. Enjuague los tamices y las placas de prueba con agua caliente y caliéntelos en un horno de secado hasta que se evapore toda la humedad. Fresco. Los tamices y las placas hasta la temperatura de la sala de pruebas.Antes de comenzar los experimentos, coloque un plato poco profundo encima de la placa difusora y llénelo con agua para aumentar la humedad local y enmascarar el agua en la gota de aros. Finalmente, coloque los tamices sobre el plato de agua. La placa de prueba está hecha de acrílico transparente y consta de seis arenas de prueba.Un deslizador contiene cámaras de retención que permiten la carga de moscas, la contención temporal y la liberación simultánea de seis moscas en sus respectivas cámaras. Al comienzo del experimento, los puntos de mira grabados en el centro de cada arena en la placa indican que los odorantes deben pipetearse. Inserte los deslizadores en la placa de prueba acrílica.Deslice suavemente el aspirador en el vial más allá del tapón de algodón y permita que unas seis moscas entren en el aspirador. Es fundamental ser lo más amable posible al manipularlos. Se puede aprovechar la táctica fotográfica, el comportamiento de las moscas para inducir moscas, para caminar hacia el aspirador apuntando la abertura del vial hacia una fuente de luz tenue.Si es necesario, se puede aplicar una succión suave para aspirar aproximadamente seis moscas hembra. Evite seleccionar moscas macho de ojos blancos. Inserte la punta del aspirador en el primer orificio de la placa de prueba.Permita que una sola mosca pase a la celda de retención y avance suavemente el deslizador hacia adelante para cargar otra mosca en el siguiente orificio. Continúe hasta que las moscas. Ocupa las seis celdas de retención del plato.A continuación, pipetee cinco microlitros de una solución de vinagre de sidra de manzana al 1% directamente en el centro del punto de mira en la cara interior de la placa de prueba. Para centrar la placa de prueba, abra el archivo llamado Herramienta de posicionamiento vi. Ejecute el archivo haciendo clic en la flecha blanca en la esquina superior izquierda de la pantalla.Coloque la placa de prueba en la parte superior del sib de manera que la abertura de la arena mire hacia el piso del SIV y el objetivo de olor esté en el techo de la placa. Alinee los puntos de mira de la placa de prueba con los aires cruzados en la pantalla del monitor cuando se haya completado la alineación. Aborte la ejecución haciendo clic en el punto rojo ubicado cerca de la esquina superior izquierda del monitor para rastrear y registrar las coordenadas de la mosca.Durante cada prueba de búsqueda de alimentos, abra el archivo del software de adquisición. Seguimiento de moscas seis vi. Ejecute el archivo haciendo clic en la flecha blanca en la esquina superior izquierda del monitor.Asigne un nombre al archivo y, a continuación, haga clic en Aceptar. Avanza los deslizadores en las cámaras de prueba para liberar las moscas en las arenas de prueba. Tenga cuidado de no mover las cámaras de prueba, ya que esto conducirá a un registro incorrecto de las coordenadas.Haga clic en iniciar y asegúrese de que la única fuente de luz en la cámara de prueba sea el panel LED. Una vez finalizado el ensayo, retire el tamiz y la cámara de comportamiento. Levante la placa de prueba del tamiz y elimine las moscas sumergiendo la placa en hielo.Limpie suavemente la placa con agua caliente y elimine cualquier residuo de agros. Coloque las placas de prueba en un horno de secado para eliminar la humedad. Ventile el área de prueba encendiendo un pequeño ventilador durante aproximadamente dos minutos.Apague el ventilador y cargue el siguiente grupo de moscas en la siguiente placa de prueba. Proceda a realizar el análisis de datos utilizando un software personalizado como se describe en el protocolo de texto. El software de análisis de datos y el diseño se utilizan para evaluar el rendimiento de cada mosca durante su prueba de 10 minutos de acuerdo con un conjunto de criterios de análisis.Estos criterios se utilizan para determinar si los datos de cada mosca se utilizarán para el análisis de datos y están diseñados para eliminar aquellas moscas que no pueden realizar la tarea de búsqueda de alimentos debido a una lesión, enfermedad, estrés o falta de motivación, las moscas que están inactivas durante más de 300 segundos se consideran inactivas y se rechazan del conjunto de datos a menos que ya hayan logrado localizar la fuente de alimento o la exhibición. Una velocidad promedio superior a 10 milímetros por segundo durante al menos 100 segundos después del período de inactividad para seleccionar solo aquellas moscas que exhiben velocidades saludables durante las primeras etapas del olor activo. Solo se aceptan las moscas de búsqueda que se mueven dentro de un cierto rango de velocidades durante los primeros 50 segundos de la prueba, para el análisis de datos, se rechazan las moscas que no se mueven a través de los cuatro cuadrantes de la arena y se dirigen directamente a la fuente de alimento después de que comienza la prueba.Se considera que las moscas que se acercan y se alejan de la fuente de alimento dentro de un radio de 10 milímetros durante un mínimo de 50 segundos han encontrado con éxito la fuente de alimento. El gráfico que representa la distancia de la mosca desde la fuente de olor a lo largo del tiempo se puede utilizar para evaluar este raro caso: arenas con artefactos visibles en posición de mosca. También se rechazan las trazas.Los artefactos pueden ser creados por cualquier evento en el que el software de adquisición de datos detecte un objeto que no sea la mosca. A menudo aparecen como largas líneas rectas que se extienden a través de la arena o irradian desde su centro. Las moscas adultas hambrientas de 18 a 24 horas exhiben una mayor sensibilidad olfativa a los olores relacionados con los alimentos que sus contrapartes alimentadas.Un gráfico del porcentaje acumulado de moscas que localizan con éxito una fuente de olor a comida muestra que el 30% de todas las moscas hambrientas tienen éxito en un período de 10 minutos. En contraste, solo el 7% de todas las moscas alimentadas lo hacen. Las moscas hambrientas deberían exhibir una atracción significativamente mayor por el vinagre que por un vehículo agrícola solo, y esta observación se puede utilizar para solucionar problemas en las condiciones de prueba.Por ejemplo, cuando este experimento de búsqueda de alimentos se realizó a 32 grados centígrados con una humedad ambiental del 35% utilizando moscas de tipo silvestre, no se detectó ninguna diferencia significativa entre la atracción de las moscas al vinagre y el control de aros, esto probablemente se deba a una creciente atracción por el agua que se encuentra en la gota de agros a temperaturas de prueba más cálidas. Al aumentar la humedad de la prueba entre el 50 y el 60%, se corrigió este cambio de comportamiento y se restableció la diferencia significativa entre la atracción por el vinagre y el vehículo agropecuario. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en 12 años, incluyendo la prueba experimental de 10 minutos si se realiza correctamente.Al intentar este procedimiento, es importante recordar manipular las moscas con mucho cuidado para evitar lastimarlas o molestarlas. Recuerde que las placas de prueba y los tamices pueden estar extremadamente calientes cuando están en el horno de secado y, por lo tanto, deben retirarse mientras se usan guantes de cocina después de su revelado. Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la neurobiología exploraran los comportamientos quimiotácticos.Esta técnica también se puede adaptar para estudiar la capacidad de la mosca para localizar otros objetos olores. Por ejemplo, se puede aplicar al estudio del comportamiento de localización de pareja en moscas macho. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo prepararse para el experimento, ajustar las condiciones experimentales, ejecutar el experimento y analizar el rendimiento de cada mosca, lo que en última instancia le proporcionará un gráfico acumulativo que muestra el porcentaje de moscas que han localizado con éxito la fuente de olor.

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