Métodos de recolección de leche Ratones y Reeves Muntjac Deer
19 de julio de 2014
La recolección de leche a partir de modelos animales facilita varias vías de investigación: comprender la inmunidad pasiva, identificar patógenos responsables de la transmisión vertical y, mediante el uso de ratones transgénicos, incluso la producción comercial de proteínas que se encuentran en la leche materna humana. Aquí ilustramos un método simple para la recolección de leche en ratones y ciervos muntjac de Reeves.
El objetivo general de este procedimiento es demostrar cómo recolectar leche de un ratón o de un venado mutt jack de Reeve para su uso en una variedad de experimentos científicos. Esto se logra primero administrando oxitocina al animal para estimular la eyección de leche, luego se anestesia al animal. A continuación, un investigador extrae manualmente la leche mientras un segundo investigador la recoge.
El último paso consiste en garantizar la seguridad del animal mientras se recupera de la anestesia. En última instancia, se pueden recolectar aproximadamente entre cinco y 30 mililitros de leche de perro mestizo por sesión, o hasta 450 microlitros de leche de ratón por sesión. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes, como aquellos que requieren equipos especializados, es que esta técnica es relativamente económica y fácil de aprender.
Este método puede ayudar a responder varias preguntas científicas, como si un patógeno puede transmitirse de la madre a la descendencia a través de la leche. Las personas nuevas en este método suelen desanimarse porque se requiere práctica para extraer adecuadamente la leche. Stephanie Full Away, una técnica de nuestro laboratorio, me ayudará en este procedimiento para estimular la liberación de leche en un ratón lactante.
Administre dos unidades internacionales por kilogramo de oxitocina por vía intraperitoneal inmediatamente antes de recolectar la leche, anestesie al ratón y aplique una pequeña cantidad de lubricante ocular en cada ojo para evitar que los ojos del ratón se sequen mientras espera que el anestésico haga efecto. Prepare algunas toallitas estériles con alcohol, un pipetaman P200, puntas de pipeta estériles y un recipiente para contener la leche, como un tubo eppendorf de 1,5 mililitros o un vial criogénico de 1,2 mililitros. La extracción de leche requiere dos investigadores.
Uno, el exprimidor de leche inmoviliza al animal y extrae la leche; el otro, el recolector de leche, recoge la leche teniendo cuidado de evitar la contaminación del recipiente de recolección. Utilizando una gasa estéril con alcohol, el exprimidor limpia suavemente la zona mamaria antes de la ordeña.
Un minuto o dos después de la inyección de oxitocina, el descenso de leche se vuelve visible en la zona mamaria del ratón. Exprese manualmente la leche del pezón utilizando el pulgar y el índice para masajear y comprimir suavemente el tejido mamario en movimiento ascendente hasta que comience a formarse una gota visible de leche en la base del pezón. El recolector de leche presiona ahora el émbolo del pipeta P200 hasta su primer tope para expulsar el aire de la punta de la pipeta y prepararse para la recolección de leche.
Luego, el recolector de leche coloca la punta de la pipeta en la parte superior de la gota de leche. Teniendo cuidado de no acercar demasiado la punta al pezón o a la piel, y libera lentamente la presión sobre el émbolo para aspirar la leche dentro de la punta de la pipeta, presionando la punta de la pipeta contra la pared del tubo de recolección para que no se pierda líquido. El recolector de leche utiliza el pulgar para presionar el émbolo más allá del primer tope y expulsar la leche dentro del recipiente.
Continúe exprimiendo manualmente la leche de cada pezón moviéndose en sentido horario o antihorario. Es aceptable regresar a un pezón previo para extraer más leche, especialmente si produce más leche que otros pezones. Al finalizar la recolección de leche, permita que el ratón despierte de la anestesia.
Una vez que la hembra se mueva con facilidad dentro de la jaula, colóquela nuevamente en su jaula original junto con su camada para estimular la eyección de leche. En ciervas lactantes de la raza mut jack reeve, administre 10 unidades internacionales por kilogramo de oxitocina por vía intramuscular y, a continuación, anestesie inmediatamente al mut jack. El nivel de anestesia se considera adecuado si solo hay reflejos menores al tocar las orejas y si el extractor de leche puede sostener al mut jack sin lucha.
A continuación, aplique una pequeña cantidad de lubricante en cada ojo para evitar que los ojos del macho mut se sequen. Equipe tanto al extractor de leche como al colector de leche con gasa empapada en etanol y varios tubos cónicos de polipropileno de 15 mililitros para contener la leche. A medida que la oxitocina comienza a hacer efecto, la eyección de leche se vuelve visible en la zona mamaria de los machos mut.
Tanto el extractor de leche como el recolector de leche deben usar guantes y desinfectarlos con gasa empapada en etanol. Asimismo, utilice gasa empapada en etanol para desinfectar todo el ordeño y cada tetina individual del animal, sosteniendo la cabeza del animal en una posición cómoda que permita respirar con facilidad y evite la regurgitación del rumen. El recolector de leche coloca el tubo de recolección cerca de la tetina que se está ordeñando sin tocarla en la piel.
El extractor de leche utiliza el pulgar y el índice para comprimir suavemente el tejido mamario en un movimiento ascendente hasta que el pezón esté lleno de leche, y luego realiza un suave movimiento de rodadura para expulsar la leche del pezón hacia el tubo que sostiene el recolector de leche. La leche sale en forma de chorro, por lo que es importante colocar el tubo de recolección de manera que se desperdicie la menor cantidad posible de leche. La ubre de Mt Jack se divide en cuadrantes.
El extractor de leche continúa extrayendo leche de cada cuadrante hasta que la leche ya no fluye fácilmente. Si no se puede extraer leche de un pezón, extraiga primero de todos los demás pezones antes de regresar al primero; al finalizar la recolección de leche, administre aamaz por vía subcutánea para revertir rápidamente la anestesia con bam, y finalmente supervise la hembra hasta que pueda caminar, comer y beber por sí misma. Esta figura indica que se pueden obtener entre 100 y 450 microlitros de leche de un ratón lactante.
Los volúmenes máximos de leche se obtuvieron entre ocho y doce días posparto utilizando dos unidades internacionales por kilogramo de oxitocina. Aquí se muestra el rendimiento aproximado de leche de un ratón lactante representado según el tamaño de la camada en el ciervo mut jack de Reeve. El volumen de leche recolectado por sesión varió entre cinco y treinta mililitros, dependiendo del anestésico utilizado y del tiempo posparto; las fechas de inicio y finalización de las recolecciones de leche para las hembras mut jack se muestran en esta tabla.
La leche se recolectó un promedio de 80 días, con un rango de 18 a 150 días. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en aproximadamente una hora, dependiendo del número de animales de los que se desee recolectar en una sola sesión. Al realizar este procedimiento, siempre es importante recordar que la seguridad de los animales es lo primero. Tras seguir este procedimiento, puede ser necesario procesar la leche, seguido de pruebas in vitro o bioensayos, lo que podría ayudar a responder preguntas adicionales sobre los componentes presentes en la leche.
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Descripción general
Este artículo demuestra un método para recolectar leche de ratones y de ciervos muntíacos de Reeves, facilitando la investigación sobre inmunidad pasiva y la identificación de patógenos. La técnica es rentable y fácil de aprender, lo que la hace accesible para diversos experimentos científicos.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología
- Modelos animales
Antecedentes
- La recolección de leche contribuye a comprender la inmunidad pasiva.
- Ayuda a identificar los patógenos responsables de la transmisión vertical.
- Los ratones transgénicos pueden utilizarse para la producción comercial de proteínas.
- El método es aplicable tanto a ratones como a ciervos muntíacos de Reeves.
Objetivo del estudio
- Demostrar una técnica sencilla de recolección de leche.
- Facilitar la investigación en inmunología y estudios de patógenos.
- Proporcionar una alternativa económica a los métodos existentes.
Métodos Utilizados
- Administrar oxitocina para estimular la eyección de leche.
- Anestesiar al animal para una recolección segura.
- Extracción manual de leche por parte de los investigadores.
- Garantizar la seguridad del animal durante la recuperación.
Resultados principales
- Recolección de 5 a 30 mililitros de leche de ciervo muntjac por sesión.
- Recolección de hasta 450 microlitros de leche de ratón por sesión.
- La técnica es relativamente económica en comparación con métodos especializados.
- Fácil de aprender para los investigadores.
Conclusiones
- El método proporciona un enfoque práctico para la recolección de leche.
- Apoya diversos experimentos científicos en inmunología.
- Mejora la comprensión del papel de la leche en la inmunidad y la transmisión de enfermedades.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
La recopilación confiable de leche de modelos de animales pequeños permite estudios mecanicistas sobre la transmisión vertical, la inmunidad pasiva y la biología de la glándula mamaria en investigaciones preclínicas. Este método accesible apoya los flujos de trabajo de descubrimiento temprano y traslacional al proporcionar volúmenes suficientes de muestra para ensayos inmunológicos y de patógenos posteriores. Su bajo costo y requisitos mínimos de equipo facilitan su adopción más amplia en carteras de I+D que investigan mecanismos de enfermedad entre madre y descendencia.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite investigar la transmisión de patógenos de la madre a la descendencia en modelos animales controlados.
- Apoya la desestimación mecanicista de hipótesis relacionadas con la inmunidad pasiva y la biología de la lactancia.
- Proporciona validación funcional de dianas implicadas en procesos de enfermedad mediados por la leche.
Desarrollo de Pruebas y Cribado
- Genera muestras de leche validadas para ensayos cuantitativos de inmunodetección y detección de patógenos.
- Facilita la estandarización de ensayos al permitir la recolección reproducible de muestras entre cohortes.
- Apoya la adquisición escalable de muestras para flujos de trabajo de cribado sin necesidad de equipo especializado.
Investigación Traductiva y Preclínica
- Alinea los resultados del modelo animal con preguntas relevantes para la enfermedad sobre transmisión vertical e inmunidad.
- Permite la continuidad desde hallazgos en etapa de descubrimiento hasta la validación preclínica de las vías de enfermedad materno-infantil.
- Proporciona datos ajustados por riesgo para avanzar hipótesis terapéuticas materno-filiales.
Integración de la Línea de Producción y Flujo de Trabajo
Este método de recolección de leche se integra en la fase temprana de descubrimiento y en la etapa preclínica, apoyando flujos de trabajo desde la comprobación de hipótesis hasta la investigación traslacional sobre la salud materno-infantil.
- Biología del Descubrimiento: Facilita estudios basados en hipótesis sobre lactancia, inmunidad y transferencia de patógenos.
- Selección: Proporciona muestras de leche reproducibles y cuantitativas para el desarrollo de ensayos posteriores.
- Análisis: Permite la medición de biomarcadores inmunológicos y relacionados con patógenos en la leche recolectada.
- Investigación Traducional: Conecta los hallazgos en modelos animales con estudios preclínicos sobre la transmisión vertical de enfermedades.
- Reutilización Empresarial: Ofrece un protocolo estandarizado y de bajo costo adaptable a múltiples programas de investigación.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva en los modelos de enfermedad materno-filial y en la validación de dianas.
- Valor operativo: Mejora la reproducibilidad y escalabilidad de la recolección de muestras de leche en diversos estudios.
- Valor estratégico: Facilita decisiones eficientes de avance o interrupción en programas terapéuticos materno-infantiles.
- Impacto en la cartera: Reduce las barreras técnicas, permitiendo una priorización ajustada al riesgo en la investigación sobre transmisión vertical.
Consideraciones de Implementación
- Requiere conocimientos básicos en manejo de animales y anestesia para una recolección de muestras segura y eficaz.
- Se necesita una instrumentación mínima: pipetas estándar para ratones, tubos cónicos para ciervos y material estéril.
- La estandarización entre equipos se facilita mediante pasos procedimentales claros y resultados reproducibles.
- Adaptable a diferentes modelos de animales pequeños con ajustes menores del protocolo según sea necesario.
- El rendimiento de la muestra puede variar según la especie, la etapa de lactancia y la destreza del operador.
