Name: Disminución de la concentración de itraconazol y Duración del éxito en el tratamiento de Batrachochytrium dendrobatidis La infección en anfibios (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprende a tratar infecciones por Batrachochytrium dendrobatidis en anfibios usando itraconazol a menor concentración y duración reducida. Este protocolo mejora el bienestar animal manteniendo la eficacia terapéutica.

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Me gustaría dar las gracias a CL Richards-Zawacki ayuda conceptualizar el diseño experimental y la asistencia con materiales, A. Pessier ayuda el establecimiento de un régimen de tratamiento y análisis de la necropsia, MWH Chatfield, MJ Robak, K. Tasker y D. Lenger ayuda en el laboratorio y apoyo y M. McFadden y P. Harlow en el Zoológico de Taronga para el uso de su espacio durante el rodaje. El proyecto fue financiado en parte por el Departamento de Vida Silvestre y Pesca de Louisiana a través de la subvención de la Comisión de Educación Ambiental de Luisiana otorgado a LA Brannelly y por Life Technologies.

Aprobación ética: Este estudio y sus métodos fueron aprobadas por Animal uso y cuidado Comité de la Universidad de Tulane (Protocolo n º 0.407.). 1. Las pruebas para detectar la infección por Bd <ol><li> Hisopado para Bd <ol><li> Animales hisopos con un hisopo de algodón estéril en cinco ocasiones en la zona ventral, cinco veces en cada muslo, cada lado, y cada extremidad por un total de 45 golpes. Swabbing es un método no invasivo de muestreo para Bd en la piel de los anfibios. </li><li> Gire suavemente el hisopo durante y entre golpes para asegurar la mayor cantidad de ADN se recoge en el bastoncillo. </li><li> Hisopos tienda en 1,5 ml microtubos a -20 ° C. </li></ol></li><li> Extracción de ADN y el ensayo qPCR <ol><li> Extraer el ADN genómico a partir de los hisopos utilizando un kit de aislamiento de ADN disponibles comercialmente, de acuerdo con las instrucciones para el tejido animal. </li><li> Analizar el ADN extraído utilizando cuantitativa en tiempo real PCR (qPCR) después Boyle <em&gt; et al 17, con las siguientes modificaciones.: </li><li> Diluir las muestras de extracción de ADN a 1:10 con agua doblemente desionizada. </li><li> Añadir 0,7 l de albúmina de suero bovino (BSA) para evitar la inhibición de la PCR. </li><li> Incluir un control positivo interno en cada muestra para asegurar inhibición de la PCR no estaba afectando los resultados. </li><li> Corra las muestras con un control positivo y negativo y una serie de normas de dilución para estimar zoosporas (infección) de carga. </li></ol></li></ol> 2. Inoculación <ol><li> Cultura Bd <ol><li> Preparar caldo de triptona mediante la adición de 10 g de triptona al 1 L de ósmosis inversa o agua desionizada, en autoclave (121 ° C durante 40 min) y se dejó enfriar. Una vez enfriado a 23 ° C, añadir 1 ml de penicilina-estreptomicina. </li><li> Crece la tensión Bd (JEL411 de J. Longcore, aislado de Guabal, Panamá de un Phyllomedusa lemur) en un caldo triptona durante siete días a 23 ° C. </li></ol></li><li> Transfiera la broth cultura de triptona y placas de agar. <ol><li> Para hacer las placas, añadir 10 g de triptona y 10 g de agar a 1 L de ósmosis inversa o agua desionizada y se autoclave (121 ° C durante 40 min). </li><li> Una vez que la mezcla en autoclave se enfríe lo suficiente para tocar, pero antes de que se congela, verter en placas de Petri, 1/4-1/3 completo, en una campana de flujo laminar. </li><li> Cuando el agar se ha solidificado y enfriado completamente, añadir 0,5 ml de caldo Bd a cada placa y se extendió uniformemente alrededor de la placa. Deje que se seque. </li><li> Una vez que las placas se inoculan con zoosporas Bd, placas de sellado con Parafilm. </li><li> Permitir placas se incuban a 23 ° C durante cinco a siete días. Compruebe zoosporas movimiento para asegurar la viabilidad antes de la inoculación. </li></ol></li><li> Placas de inundación para la solución de la inoculación de zoosporas <ol><li> Después de los cinco a siete días de incubación y crecimiento Bd, inundar cada placa con 5 ml de agua del grifo de edad y permitir que las zoosporas entren los medios de comunicación durante 10 minutos. </li><li> Vierta la suspe zoosporasnsion en un recipiente portátil. </li><li> Calcule la concentración de zoosporas con un hemocitómetro. </li><li> Diluir la mezcla a una concentración de 1 x 10 6 por 3 ml con agua del grifo edad. </li></ol></li><li> Se inoculan los animales <ol><li> En individuales 50 ml contenedores, inocular cada animal mediante el vertido de 3 ml de mezcla de inóculo sobre la zona ventral. Permita inóculo adicional gotee en la base del recipiente de la inoculación. </li><li> Cada animal se mantendrá en el recipiente de la inoculación durante 24 horas para asegurar la infección. </li><li> Después de 24 horas de la inoculación, los animales volver a terrarios desinfectados individuales. </li><li> Permitir la infección para construir durante dos semanas. Confirme la infección con hisopo y qPCR resultados, y comenzar el tratamiento. </li><li> Para los controles Bd-negativas, inundaciones Bd-libre de las placas de agar con 5 ml de edades comprendidas agua del grifo, y la inoculación simulada a los animales con los mismos métodos que el anterior. </li></ol></li></ol> 3. Régimen de tratamiento <ol><li> Prepare baño de tratamiento <ol><li> Añadir 2,50 ml itraconazol acuosa (1% solución oral de Sporanox) a 1 Solución de L Anfibios Ringer (0.0025% itraconazol - la concentración de tratamiento eficaz más baja). <ol><li> Anfibio de solución de Ringer receta: 1 L de ósmosis inversa o agua desionizada, 6,6 g de cloruro de sodio, 0,15 g de cloruro de potasio, 0,15 g de cloruro de calcio, y 0,2 g de bicarbonato de sodio. Solución autoclave (121 ° C durante 40 min) y dejar enfriar a temperatura ambiente. </li><li> Por concentración de tratamiento itraconazol 0,01%, añadir itraconazol acuosa 10,00 ml (1% Sporanox Solución oral) a la Solución 1 L Anfibios de Ringer </li><li> Por concentración de tratamiento itraconazol 0,005%, añadir 5,00 ml itraconazol acuosa (1% Sporanox Solución oral) a la Solución 1 L Anfibios de Ringer. </li></ol></li><li> Para los controles Bd-positivos y negativos-Bd, bañar animales en solución de Ringer Anfibios sin itraconazol. </li></ol></li><li> Tratamiento &lt;ol&gt; <li> Coloque anfibios individuales en desinfectados 50 ml de contenedores con 35 ml de la solución de tratamiento. </li><li> Asegurarse de animales están totalmente cubiertos por cinco minutos por mover el recipiente. </li><li> Animales Retorno a terrarios desinfectados. Repita durante seis días. </li></ol></li><li> Asegurar el éxito del tratamiento <ol><li> Animales de ensayo para la infección Bd en el tratamiento de día comience. </li><li> Animales de ensayo para la infección Bd una semana después de acabados de tratamiento, y una vez a la semana durante cuatro semanas para asegurar que la infección haya desaparecido. </li></ol></li></ol> 4. Bd como Biohazard <ol><li> Desinfectar semanal terrarios individual. <ol><li> Bañe los contenedores terrarios y tratamiento en un 10% de lejía baño solución. </li><li> Enjuague cada contenedor blanqueado dos veces con agua corriente. </li><li> Permitir a los contenedores que se seque durante 24 horas antes de la reutilización. </li></ol></li><li> Use guantes de nitrilo limpios al manipular animales para evitar la contaminación cruzadade Bd patógeno. Cambie los guantes entre el manejo de cada animal. </li><li> Desinfecte todos los residuos líquidos antes de su eliminación por lo que la solución al 10% de lejía. </li><li> Autoclave todos los residuos sólidos que se puedan estar expuestos a BD antes de su eliminación. </li></ol>

<ol><li>Stuart, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+and+trends+of+amphibian+declines+and+extinctions+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide.</a> Science. 306 (5702), 1783-1786 (2004).</li>
<li>Skerratt, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+chytridiomycosis+has+caused+the+rapid+global+decline+and+extinction+of+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22EcoHealth%22%5BJournal%5D)">Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline and extinction of frogs.</a> EcoHealth. 4, 125-134 (2007).</li>
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<li>Boyle, D. G., Boyle, D. B., Olsen, V., Morgan, J. A. T., Hyatt, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantitative+detection+of+chytridiomycosis+%28Batrachochytrium+dendrobatidis%29+in+amphibian+samples+using+real-time+Taqman+PCR+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Rapid quantitative detection of chytridiomycosis (Batrachochytrium dendrobatidis) in amphibian samples using real-time Taqman PCR assay.</a> Dis. Aquat. Org. 60 (2), 141-148 (2004).</li>
<li>Martel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+safe+antifungal+treatment+protocol+to+eliminate+Batrachochytrium+dendrobatidis+from+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Developing a safe antifungal treatment protocol to eliminate Batrachochytrium dendrobatidis from amphibians.</a> Med. Mycol. 49 (2), 143-149 (2011).</li>
<li>Bowerman, J., Rombough, C., Weinstock, S. R., Padgett-Flohr, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terbinafine+hydrochloride+in+ethanol+effectively+clears+Batrachochytrium+dendrobatidis+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Herpetol.+Med.+Surg%22%5BJournal%5D)">Terbinafine hydrochloride in ethanol effectively clears Batrachochytrium dendrobatidis in amphibians.</a> J. Herpetol. Med. Surg. 20 (1), 24-29 (2010).</li>
<li>Young, S., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+with+fluid+and+electrolyte+therapy+cures+terminally+ill+green+tree+frogs+%28Litoria+caerulea%29+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zoo+Wildlife+Med%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol with fluid and electrolyte therapy cures terminally ill green tree frogs (Litoria caerulea) with chytridiomycosis.</a> J. Zoo Wildlife Med. 43 (2), 330-337 (2012).</li>
</ol>

El autor declara no los intereses financieros de la competencia.

El uso de este protocolo hemos sido capaces de reducir la dosis de tratamiento y el tiempo de tratamiento itraconazol para Bd en anfibios con seguridad y eficacia. La dosis de tratamiento más bajo y el tiempo (0.0025% por seis días) fue de un tratamiento exitoso para I. infección subclínica nebulifer. La eficacia de administrar una dosis más baja y el tiempo de tratamiento demuestran la necesidad de ensayos clínicos de tratamiento para tratamientos de la infección de Bd, como actualme...

Los anfibios están actualmente experimentando el mayor declive de la biodiversidad de todos los taxones de vertebrados 1. La quitridiomicosis, una enfermedad de la piel causada por los patógenos fúngicos Batrachochytrium dendrobatidis (Bd chytrid), es una de las principales causas de estos descensos dramáticos 2 Bd es el peor patógeno en el expediente para causar la pérdida de biodiversidad:. Infecta a más de 600 especies de anfibios y tiene causado la disminución de más de 300 especies, de las cuales por lo menos 200 especies se han convertido en grave peligro de extinción o extintas 2,3. El hongo quítrido no es sede específica y no está claro cuáles son las cualidades de la máquina permite la infección Bd progresar causando una enfermedad grave. La quitridiomicosis causa la muerte mediante la interrupción de los canales iónicos en la piel, dando como resultado la pérdida de electrolitos e insuficiencia cardíaca 4. También, Bd. sobrenadante (que no contiene zoosporas Bd) provoca una respuesta inmune en renacuajos 5 leading investigadores creen Bd produce un subproducto tóxico 6. Debido a que muchas especies están disminuyendo rápidamente, las colonias de aseguramiento de la cautividad y los programas de cría son importantes medidas de conservación, y pueden ser la única tabla de salvación para algunas especies. El establecimiento y mantenimiento de la enfermedad colonias libres es un reto para las instalaciones de gestión de anfibios. Los métodos quimioterapéuticos actuales para el tratamiento de infecciones Bd, aunque es eficaz, pueden ser perjudiciales para los animales que son tratados, y ningún método de tratamiento único ha sido un éxito en todas estas especies y clases de edad de anfibios 7. Se han realizado pocos ensayos clínicos de tratamientos para la infección Bd. 7. Los tres métodos más utilizados del tratamiento son la terapia de calor, el cloranfenicol y el itraconazol. La terapia de calor es una opción de tratamiento nonchemotherapeutic que parece tener pocos efectos secundarios, pueden ser utilizados en múltiples etapas de la vida, y es generalmentealiado eficaz. En un ensayo de tratamiento, Chatfield y Richards-Zawacki 8 encontraron que el 96% de los animales tratados se había despejado las infecciones después de ser alojados a 30 ° C durante 10 días. Aunque este ensayo no fue del 100% de éxito, proporciona una línea de base para que otros puedan evaluar la terapia de calor para su propia especie. La terapia de calor, aunque es eficaz para muchas especies, es poco práctico para muchas especies alpinas que no puede permanecer a altas temperaturas durante un período prolongado de tiempo. Cloranfenicol, un antibacteriano, se ha utilizado con éxito para tratar Bd en muchas especies, e inhibe el crecimiento de hongos in vitro. Como un antibacteriano, el cloranfenicol no ataca el hongo específicamente, pero se ha sabido para causar la apoptosis en células eucariotas 9. Se ha especulado que la terapia de cloranfenicol provoca la apoptosis en la piel, causando la muerte de esporangios intracelular, aunque el mecanismo de acción exacto es desconocido. Aunque ningún estudio clínico ha sido realizado, y por lo tantola dosis y el tiempo de tratamiento no han sido evaluados, los protocolos de tratamiento actuales suelen requerir la inmersión de dos a cuatro semanas 10,11, por lo que este tratamiento poco práctico para los anfibios terrestres. El cloranfenicol también ha sido restringido en algunos países para uso veterinario, ya que la exposición humana se ha asociado con una forma rara de anemia aplásica 12. El itraconazol, un antifúngico azol, es el más utilizado para el tratamiento de la infección Bd en anfibios en cautiverio. El protocolo más utilizado es el animal de baño en una solución de itraconazol 0,01% durante cinco minutos al día durante 11 días consecutivos. Este protocolo se deriva de las normas utilizadas para la administración de los mamíferos, y, si bien es efectivo para los anfibios, que no se basa en los ensayos clínicos en los anfibios 11,13. Este protocolo puede causar efectos secundarios negativos en ciertas especies, especialmente en el género Rana y en renacuajos y metamorfos últimos 11.Renacuajo tratamiento ha sido exitoso el uso de una concentración mucho más baja (0,0005%) de itraconazol, pero se asoció con despigmentación 14. Esta misma concentración se probó en metamorfos recientes y se encontró que no tener éxito en el tratamiento de la infección 15. Debido a que existe el riesgo de efectos secundarios negativos con el tratamiento itraconazol, algunos médicos han utilizado la mitad de la concentración habitual (0,005%) durante 11 días consecutivos, y se encontró que esto tenga éxito en la curación de las infecciones Bd 16. El presente estudio es un resumen de un ensayo de tratamiento clínico utilizando itraconazol para tratar la infección Bd. 15. El protocolo describe un intento de encontrar la dosis y tiempo de tratamiento más bajo que es seguro y efectivo para el tratamiento de animales infectados con Bd itraconazol. Los animales utilizados en este estudio fueron los últimos metamorfos de sapos costa del golfo, Incilius nebulifer.

<table><tbody><tr><td>0.1% Itraconazol acuoso, Sporonox</td><td>Janssen Pharmaceutica Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-100</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328-500</td><td></td></tr><tr><td>Hisopos de algodón estériles</td><td>Equipos médicos y de alambre</td><td>MW113</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Microtubos</td><td>Sarstedt</td><td>73.703.217</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNEasy Kit de Sangre y Tejidos</td><td>Qiagen</td><td>69581</td><td></td></tr><tr><td>7500 PCR en tiempo real</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351104</td><td></td></tr><tr><td>VIC IPC</td><td>Applied Biosystems</td><td>4308323</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Applied Biosystems</td><td>AM2618</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Invitrogen</td><td>30391023</td><td></td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Invitrogen</td><td>Q10029</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Sigma Aldrich CLS430589</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

disminución de la concentración de itraconazol y duración del éxito en el tratamiento de<em&gt; batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; la infección en anfibios

Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians

Los anfibios están experimentando el mayor descenso de toda clase de vertebrados y la principal causa de este descenso es un hongo patógeno Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), que causa la enfermedad quitridiomicosis. Colonias de aseguramiento en cautiverio son importantes en todo el mundo para las especies de anfibios amenazadas y pueden ser la única tabla de salvación para los de amenaza crítica de extinción. El mantenimiento de colonias gratuitas de enfermedades es una prioridad de los directivos en cautividad, no se han identificado aún los tratamientos seguros y eficaces para todas las especies y entre las etapas de vida. El tratamiento quimioterapéutico más utilizado es el itraconazol, aunque la dosis utilizada puede ser perjudicial para algunos individuos y especies. Se realizó un ensayo de tratamiento clínico para evaluar si una dosis más baja y más seguro, pero eficaz de itraconazol se pudo encontrar para curar infecciones de BD. Hemos encontrado que mediante la reducción de la concentración de tratamiento desde 0,01 hasta 0,0025% y la reducción de la duración del tratamiento de 11-6 Días de 5 mínimo baños, ranas podrían curarse de la infección Bd con menos efectos secundarios y menos mortalidad asociada al tratamiento.

Tratamiento itraconazol fue considerada exitosa si todos los animales estaban Bd-negativo cuatro semanas después de finalizado el tratamiento. Antes del tratamiento se inició, dos semanas después de la inoculación, los animales inoculados con Bd fueron infectadas, con una carga de zoosporas media de 1,121.7 (± 17,34), mientras que cuatro semanas después de finalizado el tratamiento, los animales de control Bd-positivos tenían una media de carga de zoosporas de 16,765.12 ( ± 14643.08). <p c...

Infección por Batrachochytrium dendrobatidis en los anfibios puede ser eliminado utilizando una concentración reducida (0,0025%) y menor duración (baños de cinco minutos durante seis días) de itraconazol que la que se utiliza generalmente. Se observaron menos mortalidad y menos efectos secundarios negativos utilizando este protocolo de tratamiento modificado.

Disminución de la concentración de itraconazol y Duración del éxito en el tratamiento de<em&gt; Batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; La infección en anfibios

Amphibians are experiencing the greatest decline of any vertebrate class and a leading cause of these declines is a fungal pathogen, Batrachochytrium ...

El objetivo general de este procedimiento es tratar anfibios infectados con el hongo de los anfibios Kitt, Bera key tridium, dendro, he o BD, utilizando la quimioterapia antifúngica con triazol. Esto se logra primero cultivando cepas de BD e inoculando los animales con el patógeno fúngico. El segundo paso consiste en probar a los animales mediante extracción de ADN y QPCR en hisopos cutáneos para confirmar la infección por BD.A continuación, los animales infectados se tratan sumergiéndolos en una solución de econazol al 0,0025 % durante cinco minutos al día durante seis días. El paso final consiste en monitorear el estado de la infección en los animales tratados mediante análisis de QPCR en hisopados de piel durante un mínimo de cuatro semanas posteriores a la finalización del tratamiento, para asegurar la cura exitosa del animal. Este procedimiento demuestra que una concentración reducida y un tiempo de tratamiento más corto del antifúngico itraconazol son eficaces para tratar animales infectados con Bd. La principal ventaja de utilizar este régimen de tratamiento frente a la dosis recomendada, que consiste en una solución de itraconazol al 0,01 % durante 11 días, es que una conce

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Se demuestran modelos de infección sistémica y localizada del pez cebra por el virus de la influenza A humana. Utilizando un modelo de infección sistémica, el pez cebra se puede utilizar para detectar medicamentos antivirales. Utilizando un modelo de infección localizada, el pez cebra puede utilizarse para caracterizar las respuestas de las células inmunitarias del huésped.

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Hemos desarrollado un sistema de cribado de alto rendimiento modular para el descubrimiento de nuevos compuestos contra Mycobacterium tuberculosis, la orientación intracelular y en caldo creciente bacterias, así como la citotoxicidad contra la célula huésped de mamífero.

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Este protocolo describe el uso de hisopos de colector de aceite y análisis de lodos de sistemas de pez cebra, que conduce a aumento de detección en comparación con el uso de centinelas para detectar patógenos como Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp.,  Pseudocapillaria tomentosa. También se propone un sistema para controlar la p. tomentosa huevos en cuarentena.

Proyección ambiental de hydrophila de la Aeromonasy Mycobacterium spp. Pseudocapillaria tomentosa en los sistemas de pez cebra

Este artículo resume los atributos de diseño y la eficacia de los sistemas de tratamiento que tratan el agua de lluvia urbana y la escorrentía de riego agrícola para eliminar los pesticidas y otros contaminantes asociados con la toxicidad acuática.

Sistemas de tratamiento con vegetación para eliminar los contaminantes asociados con la toxicidad del agua superficial en la agricultura y el escurrimiento urbano

Cuantificar la muerte celular epidérmica en ranas con quitridiomicosis usando dos métodos. En primer lugar, utilizamos terminal transferasa-mediated dUTP nick etiquetado final (TUNEL) en situ histología para determinar las diferencias entre animales clínicamente infectados y no infectados. En segundo lugar, llevamos a cabo un análisis de series temporales de la apoptosis sobre la infección usando un análisis de la proteína caspasa 3/7.

Utilizando mediada por la transferasa Terminal dUTP Nick End-etiquetado (TUNEL) y caspasas 3/7 ensayos a muerte celular epidérmica, medida en ranas con la quitridiomicosis

El estudio de la biología de los anfibios proporciona información valiosa sobre los procesos reproductivos, fisiológicos, embrionarios y de desarrollo que impulsan los organismos de muchos grupos taxonómicos. Aquí, presentamos una guía completa sobre diferentes metodologías que se pueden utilizar para estudiar el control y monitoreo ovárico en anfibios.

Técnicas Reproductivas para el Monitoreo y Control de La Ovacada en Anfibios

En el presente documento se describe un protocolo basado en placas de microtitulación de 96 pocillos que utiliza un ensayo de reducción de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-carboxanilida-2H-tetrazolio (XTT), para estudiar los efectos de los anticuerpos en las biopelículas formadas por C. tropicalis. Este protocolo in vitro se puede utilizar para comprobar el efecto de posibles nuevos compuestos antifúngicos sobre la actividad metabólica de las células de especies de Candida en...

Un ensayo de reducción soluble a base de tetrazolio para evaluar el efecto de los anticuerpos en las biopelículas de Candida tropicalis

Se trata de un método para muestrear y aislar bacterias cultivables de la microbiota cutánea de salamandras pletodóntidas europeas (género Speleomantes). Aquí, presentamos un protocolo para muestrear la piel de la salamandra con hisopos y procesarlos utilizando enfoques cultivables. Describimos el muestreo, el aislamiento y el establecimiento del cultivo axénico con caracterización de cepas bacterianas.

Aislamiento e identificación de cepas bacterianas de la piel de anfibios terrestres

El diseño de proteínas implica la construcción de secuencias de aminoácidos y la incorporación de motivos específicos para crear variantes funcionales. Este enfoque es fundamental para el desarrollo de péptidos antimicrobianos (AMP) para combatir los patógenos resistentes a los antibióticos. En este artículo se presenta un procedimiento para la construcción de proteínas utilizando diversas herramientas bioinformáticas.

Aplicación de I TASSER, trRosetta, UCSF Chimera, servidor HADDOCK y HEX loria para el diseño de proteínas De Novo e In Silico

Este protocolo proporciona una guía optimizada y detallada para utilizar la planaria Schmidtea mediterranea como sistema modelo para estudiar las interacciones huésped-patógeno durante la infección fúngica. El método se basa en el procedimiento previo para infectar planarias con el patógeno fúngico humano Candida albicans, proporcionando una guía detallada para mejorar la reproducibilidad y la consistencia experimental.

Un protocolo optimizado para la infección por Candida albicans en Schmidtea mediterranea para estudiar la patogénesis fúngica y la defensa del hospedador

Aprende a tratar infecciones por Batrachochytrium dendrobatidis en anfibios usando itraconazol a menor concentración y duración reducida. Este protocolo mejora el bienestar animal manteniendo la eficacia terapéutica.

Disminución de la concentración de itraconazol y Duración del éxito en el tratamiento de Batrachochytrium dendrobatidis La infección en anfibios (Video) | JoVE Journal

Disminución de la concentración de itraconazol y Duración del éxito en el tratamiento de

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